專利名稱：一種裸地膽草素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種裸地膽草素的制備方法尤其是一種采用聚酰胺樹脂柱和高速逆流色譜結(jié)合提取分離制備裸地膽草素的方法。
背景技術(shù)：
裸地膽草素(Nudaphantin)分子式為C21H26O7,分子量為390. 43，是從菊科植物裸地膽草^Ve/^a/^M nudatus Grey全植物中提取分離得到的一種倍半萜內(nèi)酯類化合物。藥理研究表明，裸地膽草素對KB細胞具有細胞毒活性，其ED5tl為0. 31 μ g/mL。徐峰對裸地膽草分別采用己烷、氯仿和甲醇提取，發(fā)現(xiàn)氯仿提取物所得產(chǎn)物為深綠色糖漿，具有極強的細胞毒活性，再經(jīng)硅膠柱層析和制備TLC分離得到Nudaphantin，并視其為新細胞毒成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種利用聚酰胺樹脂和高速逆流色譜結(jié)合提取分離裸地膽草素的方法。本發(fā)明所述的一種裸地膽草素的制備方法，其特征在于按下列步驟進行 將裸地膽草全株粉碎，經(jīng)甲醇或乙醇溶液超聲提取，提取液加2-8%藥用活性炭脫色，
過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，用正丁醇萃取濃縮液2-4次，濃縮萃取液，與少量聚酰胺樹脂拌樣后，揮干溶劑，上聚酰胺樹脂柱，以二氯甲烷-乙醇混合溶液為洗脫劑梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮后經(jīng)高速逆流色譜法分離純化，冷凍干燥即得產(chǎn)品。所述二氯甲烷-乙醇混合溶液為洗脫劑梯度洗脫，依次按體積比10:1、5:1、1:1進行洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集裸地膽草素洗脫液。所述高速逆流色譜法分離純化溶劑系統(tǒng)選用環(huán)己烷-甲酸乙酯-乙醇-7jC，體積比為(3-5) :(3-5) :(5-7) (2-4)。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明先用聚酰胺樹脂柱層析對目標成分進行富集，降低了后續(xù)工序的處理量，高速逆流色譜法分離純化樣品損失小、產(chǎn)品純度高、制備量大。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。實施例1
將裸地膽草全株藥材粉碎，取IOOOg投入小型提取罐中，加入6L80%甲醇溶液超聲提取 1. 5h,提取2次，合并提取液過濾，加入27g針劑類藥用活性炭加熱攪拌脫色，過濾除去活性炭，減壓回收試劑至無醇味，用150ml正丁醇萃取3次，合并萃取液濃縮至原體積的1/5， 與少量聚酰胺樹脂拌樣，揮干試劑上聚酰胺樹脂柱，用二氯甲烷-乙醇混合溶液按體積比 10:1,5:1,1:1進行洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集裸地膽草素洗脫液，濃縮得裸地膽草提取浸膏。取環(huán)己烷-甲酸乙酯-乙醇-水(5:5:7:4)置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取裸地膽草提取浸膏溶于下相中，用泵將固定相灌滿分離柱，然后使主機轉(zhuǎn)動達到850rpm，以2. Oml/min流速泵入流動相，當流動相流出時，開始連續(xù)進樣，根據(jù)檢測器譜圖收集裸地膽草素流分，濃縮，低溫干燥即得到63mg裸地膽草素，GC檢測含量為98%。實施例2:
將裸地膽草全株藥材粉碎，取IOOOg投入小型提取罐中，加入7L70%乙醇溶液超聲提取lh，提取3次，合并提取液過濾，加入52g針劑類藥用活性炭加熱攪拌脫色，過濾除去活性炭，減壓回收試劑至無醇味，用200ml正丁醇萃取4次，合并萃取液濃縮至原體積的1/5， 與少量聚酰胺樹脂拌樣，揮干試劑上聚酰胺樹脂柱，用二氯甲烷-乙醇混合溶液按體積比 10:1,5:1,1:1進行洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集裸地膽草素洗脫液，濃縮得裸地膽草提取浸膏。取環(huán)己烷-甲酸乙酯-乙醇-水(3:3:5:2)置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取裸地膽草提取浸膏溶于下相中，用泵將固定相灌滿分離柱， 然后使主機轉(zhuǎn)動達到850rpm，以2. 5ml/min流速泵入流動相，當流動相流出時，開始連續(xù)進樣，根據(jù)檢測器譜圖收集裸地膽草素流分，濃縮，低溫干燥即得到61mg裸地膽草素，GC檢測含量為97%。實施例3:
將裸地膽草全株藥材粉碎，取IOOOg投入小型提取罐中，加入5L60%乙醇溶液超聲提取池，提取2次，合并提取液過濾，加入63g針劑類藥用活性炭加熱攪拌脫色，過濾除去活性炭，減壓回收試劑至無醇味，用IOOml正丁醇萃取4次，合并萃取液濃縮至原體積的1/5， 與少量聚酰胺樹脂拌樣，揮干試劑上聚酰胺樹脂柱，用二氯甲烷-乙醇混合溶液按體積比 10:1,5:1,1:1進行洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集裸地膽草素洗脫液，濃縮得裸地膽草提取浸膏。取環(huán)己烷-甲酸乙酯-乙醇-水(4:3:6:2)置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取裸地膽草提取浸膏溶于下相中，用泵將固定相灌滿分離柱， 然后使主機轉(zhuǎn)動達到850rpm，以3. Oml/min流速泵入流動相，當流動相流出時，開始連續(xù)進樣，根據(jù)檢測器譜圖收集裸地膽草素流分，濃縮，低溫干燥即得到69mg裸地膽草素，GC檢測含量為95%。實施例4:
將裸地膽草全株藥材粉碎，取IOOOg投入小型提取罐中，加入6L85%甲醇溶液超聲提取 0. 5h,提取3次，合并提取液過濾，加入79g針劑類藥用活性炭加熱攪拌脫色，過濾除去活性炭，減壓回收試劑至無醇味，用120ml正丁醇萃取2次，合并萃取液濃縮至原體積的1/5， 與少量聚酰胺樹脂拌樣，揮干試劑上聚酰胺樹脂柱，用二氯甲烷-乙醇混合溶液按體積比 10:1,5:1,1:1進行洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集裸地膽草素洗脫液，濃縮得裸地膽草提取浸膏。取環(huán)己烷-甲酸乙酯-乙醇-水(5:4:7:3)置于分液漏斗中混合均勻，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，取裸地膽草提取浸膏溶于下相中，用泵將固定相灌滿分離柱， 然后使主機轉(zhuǎn)動達到850rpm，以2. Oml/min流速泵入流動相，當流動相流出時，開始連續(xù)進樣，根據(jù)檢測器譜圖收集裸地膽草素流分，濃縮，低溫干燥即得到57mg裸地膽草素，GC檢測含量為98%。
權(quán)利要求
1.一種裸地膽草素的制備方法，其特征在于包括以下步驟將裸地膽草全株粉碎，經(jīng)甲醇或乙醇溶液超聲提取，提取液加2-8%藥用活性炭脫色，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味， 用正丁醇萃取濃縮液2-4次，濃縮萃取液，與少量聚酰胺樹脂拌樣后，揮干溶劑，上聚酰胺樹脂柱，以二氯甲烷-乙醇混合溶液為洗脫劑梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮后經(jīng)高速逆流色譜法分離純化，冷凍干燥即得產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述二氯甲烷-乙醇混合溶液為洗脫劑梯度洗脫，依次按體積比10:1、5:1、1:1進行洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集裸地膽草素洗脫液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述高速逆流色譜法分離純化溶劑系統(tǒng)選用環(huán)己烷-甲酸乙酯-乙醇-水，體積比為(3-5) :(3-5) :(5-7) (2-4)。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種裸地膽草素的制備方法。制備方法包括以下步驟將裸地膽草全株粉碎，經(jīng)極性有機溶劑提取，提取液加藥用活性炭脫色，過濾，濾液減壓濃縮，用正丁醇萃取2-4次，濃縮萃取液，與少量聚酰胺樹脂拌樣后，揮干溶劑，上聚酰胺樹脂柱，二氯甲烷-乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮后經(jīng)高速逆流色譜法分離純化，冷凍干燥即得產(chǎn)品。本發(fā)明操作簡單、能耗小、產(chǎn)品純度高。
文檔編號C07D493/18GK102408432SQ20111030350
公開日2012年4月11日 申請日期2011年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月10日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司