專利名稱：大豆皂甙b的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)工程與技術(shù)領(lǐng)域，一種大豆皂甙B的提取和純化工藝。
背景技術(shù)：
大豆皂苷(Soyasaponins)是大豆中含有的一類重要的生物活性成分。皂甙的種類很多但大豆皂甙B的活性較好。近年研究表明，大豆皂苷B具有顯著的降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化等多種重要的生理功能，可開發(fā)成保健食品或藥品，同時(shí)它還是一種重要的發(fā)泡劑、 乳化劑、穩(wěn)定劑和風(fēng)味改良劑，市場潛力大。目前大豆皂甙制備工藝，將原料脫脂，有機(jī)溶劑提取，濾液濃縮后用正丁醇萃取， 正丁醇相減壓蒸干后得到粗品。但這種工藝有機(jī)溶劑用量多。大孔樹脂制備大豆皂甙已被應(yīng)用，該法回收率高。用此法文獻(xiàn)較多，例如:CN1245811A, CN1315323A, CN1327983A, CN1590385A等。大豆皂甙B的純化工藝多是采取制備色譜，硅膠住，逆流色譜等。這樣制得的皂甙B，用的有機(jī)試劑較多，污染環(huán)境，溶劑消耗量大，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。采用結(jié)晶法制備皂甙，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)，如CN200610053603. 3，但該文獻(xiàn)用乙醇結(jié)晶且得到的是總皂甙， 未將皂甙B分離出來。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種從脫脂大豆胚芽中提取并純化得到高純度大豆皂甙B的工藝，該工藝對環(huán)境友好，成本低，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是以脫脂的大豆胚芽為原料制備高含量的大豆皂甙B，其中通過大孔樹脂的吸附分離，得到皂甙粗品，在通過結(jié)晶將皂甙B分離出來，得到含量>85.0%的大豆皂甙B。具體步驟如下1.以脫脂大豆胚芽為原料，加入60% -90%的乙醇(體積百分比)，固液比為 1 20，加熱至沸騰，回流提取2-5個(gè)小時(shí)，過濾濃縮至原來體積的1/3-1/5;2.將濃縮液加水后通入裝有非極性大孔樹脂的吸附柱中，在溫度為20-30°C范圍內(nèi)，以流速為0. 5-3倍柱體積/小時(shí)上樣；3.用1-4倍柱體積的水，在溫度為20_30°C范圍內(nèi)，以流速為0. 5-3倍柱體積/小時(shí)洗去雜質(zhì)；4.用1-4倍柱體積的5-40%的乙醇(體積百分比)，在溫度為20_30°C范圍內(nèi)，以流速為0. 5-3倍柱體積/小時(shí)洗去雜質(zhì)；5.用1-4倍柱體積的50-90%的乙醇(體積百分比)，在溫度為20_30°C范圍內(nèi)， 以流速為0. 5-3倍柱體積/小時(shí)洗脫產(chǎn)物；6.將得到的洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到大豆皂甙粗品；7.將上述粗品加入水或30%乙醇(體積百分比)做為結(jié)晶溶劑，固液比為 1 10-30，在80°C下溶解，按1_7°C /小時(shí)的降溫速率冷卻到0_30°C，離心，干燥得到較純的大豆皂甙B;8.將第7步得到的產(chǎn)品加入水或30%乙醇(體積百分比)做為結(jié)晶溶劑，固液比為1 25-45，在80°C下溶解，按1_7°C /小時(shí)的降溫速率冷卻到0_30°C，離心，干燥得到純度較高的大豆皂甙B。上述大孔吸附樹脂可為非極性或弱極性的大孔吸附樹脂，如NKA，DlOl樹脂。結(jié)晶溶劑可是去離子水或者30%乙醇。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明包括大孔樹脂吸附，結(jié)晶等工藝。比起以前的工藝制備總皂甙該工藝優(yōu)點(diǎn)是分離純化大豆皂甙B，所選樹脂對皂甙B的選擇吸附性較高，所用溶劑對環(huán)境友好，所得產(chǎn)品純度高，色澤為白色，成本低，易于產(chǎn)業(yè)化，可創(chuàng)出較好的經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 稱取脫脂大豆胚芽(華北制藥廠提供)300g,加入6000ml70 %的乙醇溶液。在回流罐內(nèi)，加熱至沸騰回流提取池，趁熱過濾，得到提取液。通過減壓閃蒸除去提取液中的乙醇， 濃縮至約原來體積的1/3。再向濃縮液加入600ml水作為上樣液。層析柱尺寸0^6*700mm。 內(nèi)裝NKA樹脂(南開大學(xué)提供)約245g (約350ml的樹脂)。上樣大豆皂甙B原料液濃度為1. 69mg/ml，上樣體積為6倍柱體積，上樣流速為7ml/min。上樣及洗脫溫度為25°C。先用2倍柱體積的水洗，流速為8. 8ml/min,除去大豆低聚糖等雜質(zhì)。再用2倍柱體積的20% 乙醇洗脫，流速為8. 8ml/min,除去異黃酮等雜質(zhì)。最后用2. 5倍柱體積的80%乙醇洗脫，洗脫流速為5. Sml/min，收集大豆皂甙洗脫液，洗脫體積825ml。真空旋干得大豆皂甙粗品，呈棕黃色。皂甙B含量為20.0%，回收率88.0%。將上述大豆皂甙粗品放入燒杯中，加入水， 固液比1 20，在溫度為80°C下使其溶解，以3°C/h的降溫速率，降溫到20°C，然后離心分離母液和結(jié)晶，冷凍干燥得到第一步產(chǎn)品。該步得到的產(chǎn)品純度為陽.0%，回收率64. 0%, 呈淺黃色。最后將上一步的產(chǎn)品，加水，固液比1 35，在溫度為80°C下使其溶解，以；TC/ h的降溫速率，降溫到20°C，然后離心分離母液和結(jié)晶，冷凍干燥得到產(chǎn)品。產(chǎn)品中大豆皂甙B的含量為85%，總收率為50. 0%，色澤為白色。實(shí)施例2 稱取脫脂大豆胚芽(華北制藥廠提供)300g，加入6000ml60%的乙醇溶液。在回流罐內(nèi)，加熱至沸騰回流提取證，趁熱過濾，得到提取液。通過減壓閃蒸除去提取液中的乙醇， 濃縮至約原來體積的1/5。再向濃縮液加入600ml水作為上樣液。層析柱尺寸0^6*700mm。 內(nèi)裝DlOl樹脂(南開大學(xué)提供)約200g(約^Ktoil的樹脂)。上樣大豆皂甙B原料液濃度為2. 43mg/ml，上樣體積為4. 5倍柱體積，上樣流速為2. 42ml/min。上樣及洗脫溫度為 20°C。先用4倍柱體積的水洗，流速為14. 5ml/min，除去大豆低聚糖等雜質(zhì)。再用4倍柱體積的5%乙醇洗脫，流速為14. 5ml/min，除去異黃酮等雜質(zhì)。最后用4倍柱體積的50%乙醇洗脫，洗脫流速為2. 42ml/min，收集大豆皂甙洗脫液，洗脫體積1160ml。真空旋干得大豆皂甙粗品，呈棕黃色。皂甙B含量為18.6%，回收率90.0%。將上述大豆皂甙粗品放入燒杯中，加入水，固液比1 30，在溫度為80°C下使其溶解，以l°C/h的降溫速率，降溫到30°C， 然后離心分離母液和結(jié)晶，冷凍干燥得到第一步產(chǎn)品。該步得到的產(chǎn)品純度為49.0%，回收率60.0%，呈淺黃色。最后將上一步的產(chǎn)品，加水，固液比1 45，在溫度為80°C下使其溶解，以1°C /h的降溫速率，降溫到30°C，然后離心分離母液和結(jié)晶，冷凍干燥得到產(chǎn)品。產(chǎn)品中大豆皂甙B的含量為78%，總收率為48.4%，色澤為白色。實(shí)施例3 稱取脫脂大豆胚芽(華北制藥廠提供)300g，加入6000ml90 %的乙醇溶液。在回流罐內(nèi)，加熱至沸騰回流提取池，趁熱過濾，得到提取液。通過減壓閃蒸除去提取液中的乙醇， 濃縮至約原來體積的1/4。再向濃縮液加入IOOml水作為上樣液。層析柱尺寸0^6*700mm。 內(nèi)裝NKA樹脂(南開大學(xué)提供)約M5g (約350ml的樹脂)。上樣大豆皂甙B原料液濃度為 0. 77mg/ml，上樣體積為13倍柱體積，上樣流速為17. 5ml/min。上樣及洗脫溫度為30°C。先用1倍柱體積的水洗，流速為2. 92ml/min,除去大豆低聚糖等雜質(zhì)。再用1倍柱體積的40% 乙醇洗脫，流速為2.92ml/min，除去異黃酮等雜質(zhì)。最后用1倍柱體積的90%乙醇洗脫，洗脫流速為17. 5ml/min，收集大豆皂甙洗脫液，洗脫體積350ml。真空旋干得大豆皂甙粗品， 呈棕黃色。皂甙B含量為對.5%，回收率73.0%。將上述大豆皂甙粗品放入燒杯中，加入 30%乙醇，固液比1 10，在溫度為80°C下使其溶解，以7°C/h的降溫速率，降溫到0°C，然后離心分離母液和結(jié)晶，冷凍干燥得到第一步產(chǎn)品。該步得到的產(chǎn)品純度為47.5%，回收率 49.0%，呈淺黃色。最后將上一步的產(chǎn)品，加30%乙醇，固液比1 25，在溫度為80°C下使其溶解，以7。C /h的降溫速率，降溫到0°C，然后離心分離母液和結(jié)晶，冷凍干燥得到產(chǎn)品。 產(chǎn)品中大豆皂甙B的含量為63%，總收率為32. 0%，色澤為淡黃色。
權(quán)利要求
1. 一種大豆皂甙B的制備方法，其特征在于具體步驟如下1).以脫脂大豆胚芽為原料，加入體積百分比為60%-90%的乙醇，固液比為1 20， 加熱至沸騰，回流提取2-5個(gè)小時(shí)，過濾濃縮至原來體積的1/3-1/5 ；2).將濃縮液加水后通入裝有NKA或DlOl樹脂的吸附柱中，在溫度為20-30°C范圍內(nèi)， 以流速為0. 5-3倍柱體積/小時(shí)上樣；3).用1-4倍柱體積的水，在溫度為20-30°C范圍內(nèi)，以流速為0.5-3倍柱體積/小時(shí)洗去雜質(zhì)；4).用1-4倍柱體積體積百分比為5-40%的乙醇，在溫度為20-30°C范圍內(nèi)，以流速為 0. 5-3倍柱體積/小時(shí)洗去雜質(zhì)；5).用1-4倍柱體積體積百分比為50-90%的乙醇，在溫度為20-30°C范圍內(nèi)，以流速為 0. 5-3倍柱體積/小時(shí)洗脫產(chǎn)物；6).將得到的洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到大豆皂甙粗品；7).將上述粗品加入水或體積百分比為30%乙醇做為結(jié)晶溶劑，固液比為1 10-30， 在80°C下溶解，按1_7°C /小時(shí)的降溫速率冷卻到0-30°C，離心，干燥得到較純的大豆皂甙 B ；8).將第7)步得到的產(chǎn)品加入水或體積百分比為30%乙醇做為結(jié)晶溶劑，固液比為 1 25-45，在80°C下溶解，按1_7°C /小時(shí)的降溫速率冷卻到0_30°C，離心，干燥得到純度較高的大豆皂甙B。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種大豆皂甙B的制備方法，以解決大豆皂甙B的生產(chǎn)成本高，污染環(huán)境和工業(yè)化問題。本發(fā)明的工藝包括以下步驟1.脫脂大豆胚芽中皂甙的提??；2.過濾濃縮；3.過大孔吸附樹脂；4.梯度洗脫大孔樹脂柱，得到大豆皂甙；5.通過第一次結(jié)晶得到大豆皂甙B粗品；6.重結(jié)晶得到高純度大豆皂甙B。本發(fā)明是大豆皂甙B可以進(jìn)行工業(yè)化，并且對環(huán)境友好。
文檔編號C07H15/256GK102516349SQ20111034340
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月3日
發(fā)明者袁其朋, 趙麗 申請人:北京化工大學(xué)