專利名稱：一種提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法。具體一種提取毛喉鞘蕊花有效成分異佛司可林的方法。
背景技術(shù)：
毛喉鞘蕊花Coleus forskohlii (Willd) Briq.系唇形科 Labiatae 鞘蕊花屬Coleus Lour.植物，可用于治療心血管疾病、感冒、咳嗽和呼吸紊亂等疾病。異佛司可林(isoforskolin)是國產(chǎn)毛喉鞘蕊花的主要有效成分，現(xiàn)有技術(shù)公開了其具有降壓、降低眼內(nèi)壓、平喘、抗血小板聚集、抗肺損傷等作用。該化合物具有多種生物活性，在藥品和保健食品開發(fā)方面的應(yīng)用前景良好。目前已有的提取異佛司可林的相關(guān)技術(shù)主要有:(I)采用含水乙醇提取，有機(jī)溶劑萃取和硅膠柱層析分離等技術(shù)制備異佛司克林，該種工藝中存在如下缺陷:使用大量氯仿、二氯甲烷、石油醚或丙酮等有毒有機(jī)溶劑，以及不易再生重復(fù)使用的分離材料硅膠(中國專利公開號CN 1539493A和CN 101259123A) ； (2)超臨界流體萃取法，該法設(shè)備復(fù)雜，投資大，也未公開該法制得得異佛司可林的純度(中國專利公開號CN 1539493A) ; (3)采用含水乙醇提取，大孔樹脂純化，該法簡便、適于大生產(chǎn)，但所得提取物中異佛司可林的含量僅為8%和20% (中國專利ZL200410084646.9)。因此，關(guān)于如可提取高純度異佛司可林的方法引起本領(lǐng)域研究者的關(guān)注
發(fā)明內(nèi)容
: 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法，尤其是一種提取毛喉鞘蕊花有效成分異佛司可林的方法。本發(fā)明將毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，以含水乙醇提取，大孔樹脂柱層析、十八烷基鍵合硅膠柱層析、重結(jié)晶等方法進(jìn)行純化，制得純度大于90%的異佛司可林。本方法制備工藝環(huán)保，易放大生產(chǎn)，制得的異佛司可林純度可高達(dá)90%甚至98%，可用作藥品開發(fā)的原料和保健品的功能添加劑。具體而言，本發(fā)明的提取毛喉鞘蕊花有效成分異佛司可林的方法，其特征在于，其包括步驟:(I)提取:取毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，用70 95%乙醇提取，濃縮提取液，濃縮液直接過濾，或加入絮凝劑后過濾，濾液備用；(2)大孔樹脂柱層析純化:上述濾液調(diào)節(jié)pH值后通過大孔樹脂柱，依次用水及濃度為20 40%乙醇淋洗，再用60 85%乙醇洗脫，將洗脫液濃縮至干，得大孔樹脂提取物；(3)十八烷基鍵合硅膠(ODS)柱層析純化:取上述大孔樹脂提取物，與等重量ODS混合均勻，或用盡可能少量的乙醇溶解后，上ODS柱純化，以20 35%乙醇淋洗雜質(zhì)，再用40 65%乙醇洗脫，將洗脫液濃縮至干，得ODS提取物；
(4)重結(jié)晶:上述ODS提取物以乙酸乙酯、丙酮、乙醇或所述溶劑的混合液進(jìn)行重結(jié)晶，析出白色晶體后，濾出結(jié)晶，干燥，得純度大于90%的異佛司可林；(5)制備液相純化:制得的異佛司可林晶體用甲醇溶解后，經(jīng)制備液相進(jìn)一步純化，得純度大于98%的異佛司可林。本發(fā)明中，制得的異佛司可林純度按重量百分比計(jì)算。本發(fā)明中，所述的大孔樹脂優(yōu)選非極性或弱極性的聚苯乙烯型多孔性吸附樹脂。本發(fā)明步驟2中，所述上大孔樹脂前的濾液的pH值范圍為5 10。本發(fā)明步驟2中，大孔樹脂柱層析純化進(jìn)行I 3次。本發(fā)明步驟3中，所述的ODS柱層析純化進(jìn)行I 3次。本發(fā)明步驟4中，重結(jié)晶反復(fù)2 3次。本發(fā)明中，采用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測器測定異佛司可林的純度，按峰面積歸一化法計(jì)算異佛司可林的純度為90%以上。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較，具有工藝環(huán)保，適于工業(yè)化生產(chǎn)，制得的異佛司可林純度聞等優(yōu)點(diǎn)，具體體現(xiàn)為:(I)使用的溶劑主要為乙醇和水，可回收利用，對環(huán)境無污染；(2)柱層析分離材料采用大孔樹脂和十八烷基鍵合硅膠，可再生后反復(fù)使用；(3)制得的異佛司可林純度高，可達(dá)90%以上。
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為了便于理解，以下將通過具體的實(shí)施例對本發(fā)明的提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法進(jìn)行詳細(xì)地描述。需要特別指出的是，具體實(shí)例僅是為了說明，顯然本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以根據(jù)本文說明，在本發(fā)明的范圍內(nèi)對本發(fā)明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發(fā)明的范圍內(nèi)。
具體實(shí)施方式
:實(shí)施例1(I)毛喉鞘蕊花全草5公斤，粉碎，過20目篩，用70%乙醇60升分3次熱提，首次提取2h，第二、三次各提取lh，合并3次提取液，濃縮至約8升。濃縮液用水稀釋至25升，低速攪拌下加入I %殼聚糖溶液5升，靜置lh，過濾，將濾液調(diào)節(jié)至pH = 8 ;(2)上述濾液以2BV/h (BV為大孔樹脂的柱床體積)的流速通過10升HP20型大孔樹脂柱，依次用5BV水和4BV 30%乙醇淋洗除去雜質(zhì)，再用4BV 85%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮近干。濃縮液用20 %乙醇稀釋至2升，通過2升HP20型大孔樹脂柱，重復(fù)上述洗脫程序，濃縮洗脫液至干，得大孔樹脂提取物；(3)將大孔樹脂提取物與等重量的十八烷基鍵合硅膠(ODS)混合均勻，上ODS柱，以25%乙醇淋洗雜質(zhì)，再用65 %乙醇洗脫，分管收集，用薄層色譜檢識各管洗脫液中有無異佛司可林，合并含有異佛司可林的洗脫液，濃縮至干，重復(fù)以上ODS柱層析，收集含有異佛司可林的洗脫液，洗脫液濃縮至干，得ODS提取物；⑷ODS提取物用乙酸乙酯溶解，待析出白色晶體后，濾出結(jié)晶，結(jié)晶用乙酸乙酯溶解后進(jìn)行重結(jié)晶，濾出晶體，干燥，得純度大于90%的異佛司可林。(5)制備液相純化:上述異佛司可林晶體用甲醇溶解后，采用制備液相進(jìn)一步純化，液相色譜條件:色譜柱為ODS柱，流動(dòng)相為水甲醇(35: 65)，檢測波長210nm。收集主峰保留時(shí)間的流出液，濃縮至干，得純度大于98%的異佛司可林。實(shí)施例2(I)毛喉鞘蕊花全草5公斤，粉碎，過20目篩，用80%乙醇浸泡12h后滲漉，收集滲漉液40升，濃縮至約5升。濃縮液用水稀釋至20升，過濾，將濾液調(diào)節(jié)至pH = 9 ;
(2)上述濾液以2BV/h(BV為大孔樹脂的柱床體積)的流速通過10升HZ818型大孔樹脂柱，依次用5BV水和4BV 25%乙醇淋洗除去雜質(zhì)，再用4BV 80%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮近干。濃縮液用20%乙醇稀釋至2升，通過2升HZ818型大孔樹脂柱，重復(fù)上述洗脫程序，濃縮洗脫液至干，得大孔樹脂提取物；(3)將大孔樹脂提取物用少量乙醇溶解后，上ODS柱，以20%乙醇淋洗雜質(zhì)，再用60%乙醇洗脫，分管收集，用薄層色譜檢識各管洗脫液中有無異佛司可林，合并含有異佛司可林的洗脫液，濃縮至干，重復(fù)以上ODS柱層析，收集含有異佛司可林的洗脫液，洗脫液濃縮至干，得ODS提取物；⑷ODS提取物用無水乙醇溶解，待析出白色晶體后，濾出結(jié)晶。結(jié)晶用無水乙醇溶解后進(jìn)行重結(jié)晶，濾出晶體，干燥，得純度大于90%的異佛司可林；(5)制備液相純化:上述異佛司可林晶體用甲醇溶解后，采用制備液相進(jìn)一步純化，液相色譜條件:色譜柱為ODS柱，流動(dòng)相為水甲醇(35: 65)，檢測波長210nm。收集主峰保留時(shí)間的流出液，濃縮至干，得純度大于98%的異佛司可林。
權(quán)利要求
1.一種提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法，該有效成分為異佛司可林，其特征在于，其包括步驟: (1)提取:取毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，用70 95%乙醇提取，濃縮提取液，濃縮液直接過濾，或加入絮凝劑后過濾，濾液備用； (2)大孔樹脂柱層析純化:上述濾液調(diào)節(jié)PH值后通過大孔樹脂柱，依次用水及濃度為20 40%乙醇淋洗，再用60 85%乙醇洗脫，將洗脫液濃縮至干，得大孔樹脂提取物； (3)十八烷基鍵合硅膠(ODS)柱層析純化:取上述大孔樹脂提取物，與等重量ODS混合均勻，或用盡可能少量的乙醇溶解后，上ODS柱純化，以20 35%乙醇淋洗雜質(zhì)，再用40 65%乙醇洗脫，將洗脫液濃縮至干，得ODS提取物； (4)重結(jié)晶:上述ODS提取物以乙酸乙酯、丙酮、乙醇或所述溶劑的混合液進(jìn)行重結(jié)晶，析出白色晶體后，濾出結(jié)晶，干燥，得純度大于90%的異佛司可林； (5)制備液相純化:制得的異佛司可林晶體用甲醇溶解后，經(jīng)制備液相進(jìn)一步純化，得純度大于98%的異佛司可林。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的大孔樹脂選自非極性或弱極性的聚苯乙烯型多孔性吸附樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特 征在于，所述步驟(2)中的上大孔樹脂前的濾液pH值范圍為5 10。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中大孔樹脂柱層析純化進(jìn)行I 3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中的ODS柱層析純化進(jìn)行I 3次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(4)中的重結(jié)晶進(jìn)行2 3次。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種提取毛喉鞘蕊花有效成分的方法。具體是一種提取毛喉鞘蕊花有效成分異佛司可林的方法。本發(fā)明將毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，以含水乙醇提取，大孔樹脂柱層析、十八烷基鍵合硅膠柱層析、重結(jié)晶等方法進(jìn)行純化，制得純度大于90％的異佛司可林。本方法制備工藝環(huán)保，易放大生產(chǎn)，制得的異佛司可林純度可高達(dá)90％甚至98％，可用作藥品開發(fā)的原料和保健品的功能添加劑。
文檔編號C07D311/92GK103183658SQ201110458818
公開日2013年7月3日 申請日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者黃建明, 田璐璐, 汪亞勤, 殷嘉珺, 劉真君, 謝道濤 申請人:復(fù)旦大學(xué)