專(zhuān)利名稱(chēng)：能夠結(jié)合血清白蛋白的肽和包含所述肽的化合物、構(gòu)建體和多肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及能夠結(jié)合血清蛋白的氨基酸序列；涉及包含所述氨基酸序列或基本上由所述氨基酸序列組成的肽；涉及包含所述氨基酸序列的化合物和構(gòu)建體(如融合蛋白和多肽)；涉及編碼所述氨基酸序列、肽、融合蛋白或多肽的核酸；涉及包含所述氨基酸序列、肽構(gòu)建體、化合物、融合蛋白或多肽的組合物，特別是藥物組合物；并且涉及所述氨基酸序列、肽構(gòu)建體、化合物、融合蛋白或多肽的應(yīng)用。本發(fā)明的其他方面、實(shí)施方案、優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用將通過(guò)本文的進(jìn)一步描述而變得清楚。發(fā)明背景 國(guó)際申請(qǐng) WO 09/127691,名稱(chēng)為 “Peptides capable of binding to serumproteins and compounds, constructs and polypeptides comprising the same (倉(cāng)泛夠結(jié)合血清蛋白的肽和包含所述肽的化合物、構(gòu)建體和多肽)”，描述了一類(lèi)能夠結(jié)合血清白蛋白的肽，所述肽能夠與治療性結(jié)構(gòu)部分、化合物、蛋白或其他治療實(shí)體連接或融合，從而增加其半衰期。關(guān)于WO 09/127691中公開(kāi)的肽的描述，參考WO 09/127691的說(shuō)明書(shū)、權(quán)利要求書(shū)、附圖
和序列表，通過(guò)引用將其結(jié)合于此。通過(guò)舉例說(shuō)明的方式(并且不是通過(guò)限制WO09/127691或本申請(qǐng)的方式)，例如，W009/127691中描述的一些示例性的肽包含下述特征中的一種或多種(i) Arg (R)殘基，特別是能夠與人血清白蛋白的氨基酸殘基Asn (N) 133和Asn(N) 135形成氫鍵和/或能夠與人血清白蛋白的Pro (P) 134和Leu(L) 136殘基的主鏈氧原子形成靜電相互作用的Arg(R)殘基；和/或(ii)Trp (W)殘基，特別是能夠與人血清白蛋白的Arg(R) 138殘基形成靜電相互作用的Trp (W)殘基；和/或(iii)序列模體 GGG ;并且優(yōu)選地包含(i)，(ii)和(iii)中的至少任意兩項(xiàng)并且更優(yōu)選地所有三項(xiàng)。特別地，例如，WO 09/127691中描述的一些示例性的肽可以包含下述特征中的一種或多種⑴序列模體RXWD，其中X可以是任意氨基酸序列，但是優(yōu)選是W，Y，F(xiàn)，S或D ;和/或(i i)序列模體GGG，優(yōu)選序列模體FGGG (SEQ ID NO :6)，更優(yōu)選序列模體DVFGGG (SEQ ID NO : 15)，并且特別是序列模體 DVFGGGT (SEQ ID NO: 19)；并且最優(yōu)選包含這些序列模體⑴和(ii) 二者。此外，盡管WO 09/127691中聲明本申請(qǐng)不限于任何關(guān)于來(lái)自W009/127691的氨基酸序列于何處(即，與哪個(gè)表位)和怎樣(即，通過(guò)哪些氨基酸殘基)結(jié)合人血清白蛋白的具體(或完整)的解釋或假說(shuō)，但是其提到，通過(guò)晶體結(jié)構(gòu)和建模數(shù)據(jù)，關(guān)于來(lái)自WO09/127691的肽中之一(W) 09/127691中的SEQ ID NO :143)與人血清白蛋白的結(jié)合相互作用已經(jīng)進(jìn)行了許多觀察。這些記述在WO 09/127691第84-89頁(yè)的實(shí)施例8中，并且再次通過(guò)引用結(jié)合于此。國(guó)際申請(qǐng) WO 08/068280,名稱(chēng)為 “Peptides capable of binding to serumprotein(能夠結(jié)合血清蛋白的肽)”，描述了用于產(chǎn)生能夠結(jié)合血清蛋白的肽的方法，所述肽可以結(jié)合或融合于治療性結(jié)構(gòu)部分、化合物、蛋白或其他治療性實(shí)體從而增加其半衰期。SEQ ID NO :1是利用WO 08/068280所述的方法產(chǎn)生的肽的一個(gè)實(shí)例(在此處提及作為參照)。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供與WO 08/068280和WO 09/127691中描述的氨基酸序列相比具有改善的特性的氨基酸序列。特別地，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供這樣的氨基酸序列-與下述氨基酸序列相比，其更好地(如本文定義)結(jié)合人血清白蛋白，所述氨基酸序列為W0 08/068280(且特別地，好于SEQ ID NO :1的氨基酸序列，其來(lái)自WO08/068280)和 WO 09/127691 (且特別地，好于59F2 (W0 09/127691 SEQ ID NO :149/在本申請(qǐng)中為 SEQ ID NO 76) ；59H12(W0 09/127691 SEQ ID NO :155/在本申請(qǐng)中為 SEQ ID NO:77);和/或 59C2(W0 09/127691 SEQ ID NO :156/在本申請(qǐng)中為 SEQ ID NO :75)中描述的氨基酸序列；和/或-能夠特異性結(jié)合(如本文定義)人血清白蛋白，并且還能夠特異性結(jié)合來(lái)自至少一個(gè)其他哺乳動(dòng)物物種的血清白蛋白(如來(lái)自小鼠、大鼠、兔、狗或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種如狒狒或恒河猴的血清白蛋白)，并且特別能夠特異性結(jié)合人血清白蛋白和來(lái)自食蟹猴的血清白蛋白；和/或-能夠結(jié)合(人)血清白蛋白并且與WO08/068280和TO 09/127691中描述的相t匕，具有其他用于藥用的改善的特性，如提高的穩(wěn)定性、提高的蛋白酶抗性等；和/ 或-當(dāng)與治療性結(jié)構(gòu)部分、化合物、蛋白或其他治療性實(shí)體連接或融合時(shí)，與WO08/068280和WO 09/127691中描述的氨基酸序列相比(當(dāng)與相同治療劑連接或融合時(shí))，提供血清半衰期或其他藥理學(xué)相關(guān)性質(zhì)的更大的增加。本發(fā)明的目的還在于提供這樣的氨基酸序列，其可以與治療性結(jié)構(gòu)部分、化合物、蛋白或其他治療性實(shí)體連接或融合，從而使得到的化合物或構(gòu)建體與包含WO 08/068280和TO 09/127691中描述的氨基酸序列之一的相應(yīng)化合物或構(gòu)建體相比具有提高的半衰期。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供這樣的氨基酸序列，其是WO 08/068280和WO09/127691中所述的結(jié)合血清蛋白的氨基酸序列的替代品，且特別是一種改善的替代品。一般而言，本發(fā)明通過(guò)提供本文所述的氨基酸序列實(shí)現(xiàn)該目標(biāo)。這些氨基酸序列能夠結(jié)合于(并且特別地，如本文定義，特異性結(jié)合于)血清白蛋白(并且特別是人血清白、蛋白)，并且能夠用作用于與治療性化合物(如治療性蛋白或多肽)連接或融合從而增加其半衰期的小肽或肽結(jié)構(gòu)部分。這些氨基酸序列(其在本文也稱(chēng)為“本發(fā)明的氨基酸序列”)在本文中進(jìn)一步定乂。特別地，按照本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過(guò)靠近WO 09/127691所述的肽的N-末端提供一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(或一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的組合)(的片段)可以進(jìn)一步改善WO08/068280和WO 09/127691中所述的結(jié)合血清白蛋白的肽?？拷牡腘-末端的這些一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(或一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的組合)可以如本文進(jìn)一步所述。因此，本發(fā)明的氨基酸序列通常是基于WO 09/127691中所述的肽，但是除了 WO09/127691中所述的氨基酸殘基和/或序列模體之外，還在靠近所述肽的N-末端具有所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(或一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的組合)(的片段)，如本文進(jìn)一步所述。特別地，在本發(fā)明的氨基酸序列中，這些一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(或一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的組合)(的這種片段)可以相對(duì)于WO 09/127691中所述的肽的位置3 (按WO09/127691和本文進(jìn)一步所述編號(hào))靠近肽的N-末端提供。在本文中這也稱(chēng)為所述位置3的“上游”。
例如，這些氨基酸(的這種片段)可以相對(duì)于(優(yōu)選)存在于W009/127691中所述肽的位置3的Arg (R)殘基的位置提供到靠近肽的N-末端(如在WO 09/127691中所述，其可以特別是能夠與人血清白蛋白的氨基酸殘基Asn (N) 133和Asn (N) 135形成氫鍵和/或能夠與人血清白蛋白的Pro (P) 134和Leu(L) 136殘基的主鏈氧原子形成靜電相互作用的Arg(R)殘基)。如果存在這樣的Arg殘基，則在本申請(qǐng)的說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(或一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的組合)也可以說(shuō)是在所述Arg (R)殘基的“上游”。當(dāng)本發(fā)明的氨基酸序列包含RXWD模體(motif)時(shí)(其對(duì)于本發(fā)明的氨基酸序列是優(yōu)選的，如同對(duì)于09/127691中所述的肽是優(yōu)選的)，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(或一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的組合)同樣可以(并且優(yōu)選地)相對(duì)于所述RXWD模體靠近肽的N-末端提供。同樣地，如果存在這樣的模體，則在本申請(qǐng)的說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中，所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(或一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的組合)也稱(chēng)為在所述RXWD模體的“上游”。并且，當(dāng)氨基酸殘基片段在本文中稱(chēng)為是在某個(gè)殘基(如位置3的R)、某個(gè)位置(如位置3)或某個(gè)模體(如RXWD模體)的“上游”時(shí)，所述氨基酸片段優(yōu)選直接在所述殘基、位置或模體之前(即，與其直接連接并且基本上與其鄰接)(盡管不排除在所述片段與殘基/位置/模體之間存在1、2或3個(gè)氨基酸殘基)。優(yōu)選地，“位置3的上游”的氨基酸片段的最后一個(gè)氨基酸是在位置O、I或2處(按下述編號(hào))，并且優(yōu)選是在位置2處。因此，一般地，本文所述的為本發(fā)明的氨基酸序列提供改善的特性(與WO08/068280和WO 09/127691中所述的結(jié)合血清白蛋白的肽相比)的氨基酸片段通常在位置3的上游(編號(hào)方式如下文所示，其與W009/127691中所用的編號(hào)方式相對(duì)應(yīng))。通過(guò)舉例說(shuō)明的方式，術(shù)語(yǔ)“靠近(towards) N-末端”和“上游”通過(guò)本發(fā)明的下述氨基酸序列(克隆EXPGMP 89D03, SEQ ID NO 72)解釋W(xué)EQDRDffDFDVFGGGTP可以看出，本發(fā)明的這一氨基酸序列包含RXWD模體(下劃線(xiàn)表示)，以及DVFGGG模體(SEQ ID NO: 15 ;同樣下劃線(xiàn)表示)，其位于RXWD模體的“靠近C-末端”或“下游”。本發(fā)明的這一氨基酸序列還包含(舉例說(shuō)明)與WO 09/127691中所述的肽相比為本發(fā)明的氨基酸序列提供改善的特性(如本文所述)的所述一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基中一些的實(shí)例。認(rèn)為這些示例性的氨基酸殘基(WWEQD ；SEQ ID NO :96)在RXWD模體的“靠近N-末端”或“上游”(還應(yīng)該注意到，如在WO 09/127691中所述，前段中引用的Arg(R)殘基通常是存在于序列模體RXWD中的Arg (R)殘基)。從該實(shí)例也可以看出，在本發(fā)明的氨基酸序列中提供改善的特性(S卩，與WO09/127691中所述的肽相比)的RXWD模體上游的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基還可以替代WO09/127691中所述的肽中在RXWD模體上游的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基(例如，在來(lái)自WO09/127691的序列SEQ ID NO :143中，其為三個(gè)丙氨酸殘基，AAA)。在本發(fā)明中，使用與WO 09/127691和WO 08/068280中相同的氨基酸殘基編號(hào)方式。這種編號(hào)方式進(jìn)一步描述在WO 09/127691和W008/068280中，并且在整個(gè)本申請(qǐng)說(shuō)明書(shū)中進(jìn)一步使用和舉例說(shuō)明。按照這種編號(hào)方式，Arg(R)殘基位于位置3處，Arg(R)殘基上游的氨基酸殘基位于位置I和2處。例如，參考WO 09/127691第15頁(yè)表I (如其中提 及，替代位置3處的優(yōu)選的Arg殘基，WO 09/127691的肽可以在位置3處替代性地包含L，F(xiàn)，Y，W，P，T，S，M，A，D，I，K，Q或V，并且這同樣適用于本發(fā)明的氨基酸序列)。還應(yīng)該注意，本發(fā)明的氨基酸序列通常在位置3上游包含多于兩個(gè)氨基酸殘基。參考上述示例性序列SEQ ID NO :1，這些氨基酸殘基按下述編號(hào)
權(quán)利要求
1.氨基酸序列，其包含 a)Arg(R)殘基，特別是能夠與人血清白蛋白的氨基酸殘基Asn (N) 133和Asn(N) 135形成氫鍵和/或能夠與人血清白蛋白的Pro (P) 134和Leu (L) 136殘基的主鏈氧原子形成靜電相互作用的Arg (R)殘基；和/或 b)Trp(W)殘基，特別是能夠與人血清白蛋白的Arg(R) 138殘基形成靜電相互作用的Trp (W)殘基；和/或 c)序列模體GGG； 并且優(yōu)選地包含(i)，(ii)和(iii)中的至少任意兩項(xiàng)并且更優(yōu)選地所有三項(xiàng)； 并且另外在所述Arg殘基的上游包含至少一個(gè)疏水和/或芳族氨基酸殘基，以使所述至少一個(gè)所述疏水和/或芳族氨基酸殘基可以結(jié)合(人)血清白蛋白的亞口袋或結(jié)合到(人)血清白蛋白的亞口袋中，所述亞口袋包含(至少)人血清白蛋白的下列氨基酸殘基中的一個(gè)或多個(gè)V442, S443, T446, L484, L487, H488, K490, T491 和 / 或 V493。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的氨基酸序列，其包含序列模體RXWD(其中X選自W，Y，F(xiàn)，S或D)和序列模體FGGG(SEQ ID NO :6);并且優(yōu)選序列模體DVFGGG(SEQ ID N0:15)或TVFGGG(SEQ ID NO :131)。
3.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列是這樣的，以致當(dāng)其與治療性結(jié)構(gòu)部分、化合物、蛋白或其他治療性實(shí)體連接或融合時(shí)，與其中所述治療性結(jié)構(gòu)部分、化合物、蛋白或其他治療性實(shí)體與SEQ ID NO :I的氨基酸序列連接或融合的相對(duì)應(yīng)的化合物或構(gòu)建體相比，這樣得到的化合物具有更長(zhǎng)的半衰期；并且優(yōu)選地，與其中所述治療性結(jié)構(gòu)部分、化合物、蛋白或其他治療性實(shí)體與SEQ ID NO :75，76和/或77的氨基酸序列之一連接或融合的相對(duì)應(yīng)的化合物或構(gòu)建體相比，這樣得到的化合物具有相同或更長(zhǎng)的半衰期。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的氨基酸序列，所述氨基酸序列具有與來(lái)自食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))的血清白蛋白的交叉反應(yīng)性。
5.化合物或構(gòu)建體，其包含至少一個(gè)根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的氨基酸序列和至少一個(gè)治療性結(jié)構(gòu)部分。
6.化合物或構(gòu)建體，其包含至少兩個(gè)根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的氨基酸序列和至少一個(gè)治療性結(jié)構(gòu)部分。
7.化合物或構(gòu)建體，其包含至少一個(gè)串聯(lián)重復(fù)和至少一個(gè)治療性結(jié)構(gòu)部分，所述串聯(lián)重復(fù)含有至少兩個(gè)根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的氨基酸序列。
8.化合物或構(gòu)建體，其包含至少一個(gè)根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的氨基酸序列和至少一個(gè)治療性結(jié)構(gòu)部分，其中本發(fā)明的所述化合物與相應(yīng)化合物相比具有更長(zhǎng)的半衰期(如本文定義)，所述相應(yīng)化合物包含代替所述氨基酸序列的氨基酸序列AASYSDYDVFGGGTDFGP (SEQ IDNO 1)；并且本發(fā)明的所述化合物優(yōu)選地與相應(yīng)化合物相比具有相等或更長(zhǎng)的半衰期(如本文定義)，所述相應(yīng)化合物包含代替所述氨基酸序列的SEQID NO，s 75, 76或77的氨基酸序列之一。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的化合物或構(gòu)建體，其是融合蛋白或多肽。
10.根據(jù)權(quán)利要求7-9中任一項(xiàng)所述的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一個(gè)治療性結(jié)構(gòu)部分優(yōu)選地包含免疫球蛋白序列或其抗原結(jié)合片段，如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原結(jié)合片段；或所述至少一個(gè)治療性結(jié)構(gòu)部分優(yōu)選地基本上由免疫球蛋白序列或其抗原結(jié)合片段，如免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或其抗原結(jié)合片段組成。
11.根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物或構(gòu)建體，其中所述至少一個(gè)治療性結(jié)構(gòu)部分優(yōu)選地包含(單)結(jié)構(gòu)域抗體、“dAb”或納米抗體或基本上由(單)結(jié)構(gòu)域抗體、“dAb”或納米抗體馨組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及能夠結(jié)合血清蛋白的氨基酸序列；涉及包含所述氨基酸序列或基本上由所述氨基酸序列組成的化合物、蛋白、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體；涉及編碼所述氨基酸序列、化合物、蛋白、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體的核酸；涉及包含所述氨基酸序列、化合物、蛋白、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體的組合物，特別是藥物組合物；并且涉及所述氨基酸序列、化合物、蛋白、多肽、融合蛋白或構(gòu)建體的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07K14/765GK102781959SQ201180008308
公開(kāi)日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2011年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月5日
發(fā)明者卡羅·布東, 希爾德·阿迪·皮埃雷特·勒韋茲 申請(qǐng)人:埃博靈克斯股份有限公司