專利名稱：檢測(cè)膜通道蛋白與靶向藥物的相互作用的方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)膜通道蛋白與靶向藥物的相互作用的方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
細(xì)胞電壓門控鈉通道(VGSCs)在神經(jīng)元和其他可興奮性細(xì)胞動(dòng)作電位形成和傳導(dǎo)過(guò)程中有非常重要的作用，其細(xì)微變化或表達(dá)異常都會(huì)導(dǎo)致功能改變，是導(dǎo)致癲癇、疼痛、 先天性肌肉強(qiáng)直癥、周期性癱瘓等各種疾病的關(guān)鍵因素，一直是研究的熱點(diǎn)。但是在長(zhǎng)期的進(jìn)化和演變中，鈉通道形成了一系列亞型，廣泛分布在生物體各個(gè)組織中。其亞型的多樣性使得研究過(guò)程中針對(duì)亞型的區(qū)分和鑒定尤為重要，而特異性通道靶向藥物則成為不可或缺的工具。鈉通道靶向藥物能夠針對(duì)鈉通道不同的亞型，具有各種不同的結(jié)合位點(diǎn)和作用方式，使得能夠通過(guò)兩者之間相互的結(jié)合和作用，成為鈉通道亞型區(qū)分和鑒定的探針，同時(shí)也是研究鈉通道功能的工具。BmK I是由東亞短鉗蝎中提取分離得到的鈉通道特異性靶向藥物，是一個(gè)由60-70 個(gè)氨基酸組成的長(zhǎng)鏈肽類，能夠作用于鈉通道，改變鈉通道的電生理特征，顯著延緩其失活過(guò)程。其機(jī)理是由于鈉通道由一個(gè)形成孔道的功能性α亞基，一個(gè)或數(shù)個(gè)輔助β亞基組成。α亞基是鈉通道行使功能的關(guān)鍵亞基，由四個(gè)高度同源的結(jié)構(gòu)域(D I -D IV)組成，每個(gè)結(jié)構(gòu)域含有六個(gè)跨膜α螺旋片段(S1-S6)。在其結(jié)構(gòu)上目前已經(jīng)鑒定了至少七個(gè)通道靶向藥物的受體位點(diǎn)。sra技術(shù)可以觀測(cè)生物分子的動(dòng)態(tài)結(jié)合，實(shí)驗(yàn)時(shí)將一種生物分子固定在特殊的芯片上，利用液體傳送系統(tǒng)將溶解有另一種生物分子的結(jié)合緩沖液流經(jīng)芯片，當(dāng)溶液中的分子與固定在芯片上的分子相互結(jié)合時(shí)會(huì)改變芯片表明的溶液折射率(Resonance Unit, RU)，折射率的變化與結(jié)合在芯片表面的生物分子質(zhì)量成正比。儀器通過(guò)跟蹤檢測(cè)折光率的變化，進(jìn)而分析出生物分子之間結(jié)合、解離的整個(gè)過(guò)程。sra技術(shù)能夠?qū)崟r(shí)檢測(cè)生物分子間的相互作用，不必使用任何標(biāo)記，能夠保證生物分子的天然活性。全細(xì)胞膜片鉗能夠進(jìn)行單個(gè)細(xì)胞的電生理記錄，通過(guò)給予單個(gè)細(xì)胞電刺激(一定閾值的電壓或電流刺激)，或化學(xué)刺激(特異性靶向藥物等)可以記錄到由離子通道開放關(guān)閉所引起的電流或電壓信號(hào)，這一信號(hào)即可反映離子通道的電生理學(xué)性質(zhì)，是研究離子通道性質(zhì)的重要指標(biāo)。而膜通道靶向藥物作用于通道之后，可以引起通道電生理學(xué)性質(zhì)的改變，從而為研究離子通道提供依據(jù)。鈉通道作為一個(gè)大分子量的膜蛋白(260KD)，如何能夠分離純化而不影響其活性， 保證其完整的結(jié)構(gòu)，是目前尚未解決的難題，而sra技術(shù)檢測(cè)動(dòng)態(tài)結(jié)合，往往是需要能夠獲得待研究的生物分子樣本，因此膜通道蛋白分離純化的難題，在某種程度上就制約了它的使用，本發(fā)明利用人工合成關(guān)鍵結(jié)合序列肽鏈的方法，克服了此類限制，并成功驗(yàn)證了其可行性，使得利用sra技術(shù)研究膜通道蛋白與其靶向藥物結(jié)合成為可能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種檢測(cè)膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法。本發(fā)明的目的之二在于提供該檢測(cè)方法的應(yīng)用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下實(shí)驗(yàn)方案
一種檢測(cè)膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法，其特征在于該方法的具體步驟為
a.根據(jù)膜通道蛋白上與其靶向藥物相互作用位點(diǎn)上的關(guān)鍵氨基酸序列，合成肽鏈；
b.采用表面等離子共振技術(shù)檢測(cè)步驟a所得的肽鏈與靶向藥物的相互作用。上述的膜通道為細(xì)胞電壓門控鈉通道，該通道的位點(diǎn)3與其靶向藥物相互作用的關(guān)鍵氨基酸序列為D IV /S3-S4胞外環(huán)，根據(jù)該關(guān)鍵氨基酸序列設(shè)計(jì)的兩段肽鏈為
rNavl. 5 SIVGTVLSDIIQKYFFSPTL rNavl. 8 SIGSLLFSAILKSLENYFSPTL ； 所述的靶向藥物為鈉通道靶向藥物BmK I。上述的步驟b的具體方法為
a.靶向藥物的芯片固化
注 Λ 40OmM 的 N-ethyl-N-(dimethylaminepropyl)-carbodiimid 禾口 IOOmM 的 N-hydroxy-succimide的按1: 1的體積比混合成的混合液，激活CM5傳感器芯片上的偶聯(lián)基團(tuán)-COOH ；將靶向藥物以23 μ g/ml的配置濃度置于pH5. OUOmM醋酸鈉溶液中，取30 μ 1 注入芯片；
b.取一系列結(jié)合反應(yīng)終濃度下的肽鏈分別以20ul/min的流速通過(guò)步驟a所得的固化有靶向藥物的傳感器芯片；所有反應(yīng)在4°C進(jìn)行；使用的結(jié)合反應(yīng)液為NaCl 150 mM, CaCl2 1.2 mM, MgCl2 1 mM, KCl 3.5 mM, HEPES 10，D-glucose 20 mM，用 NaOH 調(diào)至 ρΗ7· 4。上述的肽鏈為
rNavl. 5 SIVGTVLSDIIQKYFFSPTL
rNavl. 8 SIGSLLFSAILKSLENYFSPTL ；所述的靴向藥物為鈉通道靴向藥物BmK I。本發(fā)明選取鼠源鈉通道亞型1.5 (rNavl. 5)作為陽(yáng)性對(duì)照，SI3R能觀察到明顯結(jié)合信號(hào)，其電生理性質(zhì)能夠被Bmk I顯著影響。以鼠源鈉通道亞型1.8 (rNavl. 8)與其對(duì)照， 發(fā)現(xiàn)通過(guò)Sra技術(shù)能觀察到結(jié)合信號(hào)，但Bmk I與其結(jié)合后，rNavl. 8的電生理性質(zhì)未有顯著變化，由此發(fā)現(xiàn)BmK I對(duì)于rNavl. 8的新特性。BmK I作為特異性鈉通道靶向藥物，能夠結(jié)合rNavl. 8卻不影響其功能。本發(fā)明經(jīng)人工合成膜通道蛋白相關(guān)的關(guān)鍵性氨基酸序列肽鏈，同時(shí)運(yùn)用表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance，SPR)技術(shù)實(shí)時(shí)檢測(cè)合成的膜通道蛋白肽鏈與其靶向藥物相互作用的動(dòng)態(tài)結(jié)合，再經(jīng)電生理記錄，來(lái)檢測(cè)膜通道的功能變化。本發(fā)明運(yùn)用該方法，驗(yàn)證了鈉通道亞型1. 8對(duì)其靶向藥物BmK I的選擇敏感性，即BmK I能夠結(jié)合鈉通道亞型1.8，但是不影響其功能，而本發(fā)明的鈉通道靶向藥物BmK I能夠與鈉通道上受體位點(diǎn)3 結(jié)合。受體位點(diǎn)3由VGSCs的D I /S5-S6、D IV /S5-S6、以及D IV /S3-S4組成，其中D IV / S3-S4這段序列中的氨基酸對(duì)通道與位點(diǎn)3靶向藥物結(jié)合至關(guān)重要。由此證明本發(fā)明從技術(shù)層面為研究研究膜通道蛋白生理/病理功能及其與靶向藥物相互作用開拓了新思路，提供了新的可行檢測(cè)方法。


圖1為Bmk I影響鈉通道(rNavl. 5，rNavl. 8)功能的電生理記錄。其中，(A)300nM BmK I 施加前后，rNavl. 5 電流的變化；(B) I5ms/Ipeak (rNavl. 5) ； (C) 300nM BmK I 給藥 rNavl. 8 的影響；(D) I5ms/Ipeak (rNavl. 8)。圖2為位于鈉通道(rNavl. 5，rNavl. 8)位點(diǎn)3的關(guān)鍵氨基酸序列肽鏈與鈉通道靶向藥物(BmK I)的相互作用結(jié)果。其中，(A)和(B)分別為rNavl. 5和rNavl. 8位點(diǎn)3上關(guān)鍵氨基酸序列合成肽鏈與BmK I結(jié)合情況(一系列濃度分別為1X10_9，2.5X10_9，5X10_9， 7. 5X10_9，1X10_8 mol/L)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一表面等離子共振(SH ，BIACore 3000)檢測(cè)位于鈉通道 (rNavl. 5，rNavl. 8)位點(diǎn)3的關(guān)鍵氨基酸序列肽鏈與鈉通道靶向藥物(BmK I)的相互作用。1.定位鈉通道位點(diǎn)3的關(guān)鍵氨基酸序列，并工人合成肽鏈。根據(jù)先前的文獻(xiàn)報(bào)道和研究，位點(diǎn)3靶向藥物通過(guò)結(jié)合鈉通道位點(diǎn)3影響其功能， 其中D IV /S3-S4胞外環(huán)是重要組成部分，這段氨基酸序列對(duì)通道與位點(diǎn)3靶向藥物的結(jié)合至關(guān)重要。因此，通過(guò)檢索比對(duì)鈉通道氨基酸序列，列出rNavl. 5和rNavl. 8的該段序列
rNavl. 5 SIVGTVLSDIIQKYFFSPTL rNavl. 8 SIGSLLFSAILKSLENYFSPTL
人工合成兩段多肽(由吉爾生化有限公司合成)，分子量分別為2228. 63和2400. 82，純度分別為95. 75%和96. 41%，液相色譜和質(zhì)譜報(bào)告由公司提供。(本說(shuō)明書中未列出)
以細(xì)胞外液(mM :NaCl 150，CaCl2 1.2，MgCl2 1,KC1 3. 5，HEPES 10，D_glucose 20，用 NaOH 調(diào)至 ρΗ7· 4)溶解為 1 X l(T8mol/L，-20° 保存。2. SI3R檢測(cè)多肽鏈與BmK I結(jié)合
采用全自動(dòng)生物傳感器BIACore -3000 (Pharmacia公司)實(shí)時(shí)分析兩段多肽鏈與BmK I的結(jié)合效應(yīng)。丨I)BmK I的芯片固化
注入 40 μ 1 的 400mM 的 N-ethyl-N-(dimethylaminepropyl)-carbodiimid 禾口 IOOmM 的N-hydroxy-succimide的按1:1的體積比混合而成的混合液，激活CM5傳感器芯片上的偶聯(lián)基團(tuán)-C00H。將BmK I以23 μ g/ml的配置濃度置于IOmM醋酸鈉溶液中(pH5. 0)，取 30μ1注入芯片。實(shí)際觀測(cè)到的芯片結(jié)合量為1020共振單位(RU)。芯片表面上過(guò)量的偶聯(lián)基團(tuán)可被!35μ1的IM ethanolamine hydrochloride (pH 8. 0)去活化。整個(gè)過(guò)程使用 BIACore -3000 專用的 HBS 緩沖液150Mm NaCl ；3. 5mM EDTA ；0. 05% BIACore _3000 表面活性劑 P-20 禾口 IOmM HEPES, pH 調(diào)至 7. 4. U與多肽的結(jié)合
一系列不同濃度的多肽以20ul/min的流速通過(guò)固化有BmK I的傳感器芯片。所有反應(yīng)均在 4°C進(jìn)行。使用的結(jié)合反應(yīng)液NaCl 150 mM, CaCl2 1.2 mM, MgCl2 1 mM, KCl 3.5 mM, HEPES 10，D-glucose 20 mM，用 NaOH 調(diào)至 ρΗ7· 4。結(jié)合反應(yīng)實(shí)驗(yàn)程序完成后，繼續(xù)在結(jié)合緩沖液的使用環(huán)境下，等待二者解離，解離程序完成后，固化芯片以5mM NaOH再生。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中與BIACore -3000相連接的計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)記錄反應(yīng)信號(hào)，并使用BIA Evaluation軟件包分析數(shù)據(jù)。
結(jié)果顯示一系列濃度(1X10-9，2.5X10-9，5X10-9，7.5X10-9，1X10_8)的多肽與 BmK I均有顯著的快速結(jié)合，并且具有濃度依賴性，結(jié)合量RU值隨著多肽濃度的增加而上升。參見圖2。結(jié)果表明rNavl. 5上肽鏈能夠與BmK I顯著結(jié)合，KA值為1. 61 X IO8 (1/M)，KD 值為6. 23 X KT9(M)，在芯片上的最大結(jié)合量為92. 6 (RU)。而rNavl. 8上肽鏈同樣觀察到了與BmK I的結(jié)合，KA值為6. 71 XlO8(1/M)，KD值為1. 49X 10_9(M)，芯片最大結(jié)合量為 40. 3 (RU)。通過(guò)SI3R檢測(cè)表明，BmK I能夠與rNavl. 5，rNavl. 8顯著性結(jié)合。實(shí)施例二 Bmk I影響鈉通道(rNavl. 5，rNavl. 8)功能的電生理記錄 1外源表達(dá)rNavl. 5和rNavl. 8
EI ]制備 rNavl. 5 (pCDNA3. 1+rNavl. 5)和 rNavl. 8 (pEGFP-N2+rNavl. 8)質(zhì)粒，以兩種質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α，用氨芐青霉素(50mg/L)篩選rNavl. 5陽(yáng)性菌落，用卡那霉素(50mg/L)篩選rNavl. 8陽(yáng)性菌落。用LB培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)菌株，使用質(zhì)粒大提試劑盒 (TianGen公司)進(jìn)行質(zhì)粒大量抽提。(具體步驟見試劑盒說(shuō)明書)。(2)培養(yǎng)HEK293T細(xì)胞系和ND7/23細(xì)胞系并轉(zhuǎn)染。HEK293T細(xì)胞用含10%胎牛血清(FBS)，4mM Glutamine的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)；ND7/23細(xì)胞用含10%胎牛血清(FBS)，2mM Glutamine的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。兩種細(xì)胞均置于含5% CO2的37°培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，采用胰蛋白酶(0.025%)消化法進(jìn)行細(xì)胞傳代。在轉(zhuǎn)染前M小時(shí)傳代，接種于35mm培養(yǎng)皿。待細(xì)胞長(zhǎng)滿平皿的60%左右，進(jìn)行轉(zhuǎn)染。細(xì)胞轉(zhuǎn)染采用脂質(zhì)體Lipoefectamin 2000( Invitrogen, he)轉(zhuǎn)染試劑，嚴(yán)格按照轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。rNavl. 5轉(zhuǎn)染于HEK293T細(xì)胞；rNavl. 8 轉(zhuǎn)染于ND7/23細(xì)胞。以8μ 1脂質(zhì)體攜帶3μ g質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞(具體步驟見轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書)。2全細(xì)胞膜片鉗記錄鈉通道電流轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)的細(xì)胞用于膜片鉗實(shí)驗(yàn)。膜片鉗記錄均在室溫下(20-22°C)進(jìn)行。記錄玻璃微電極(內(nèi)徑1.5mm，武漢微探款科學(xué)儀器有限公司，中國(guó))經(jīng)兩步拉制儀(Narishige，PC-10, Japan)垂直拉制而成，充灌電極內(nèi)液 (mM, CsF 140，CsCl 10，MgCl2 2，EGTA 10，HEPES 10 ；用 CsOH 調(diào)節(jié)至 ρΗ7· 3)后，電極阻抗為2ΜΩ左右。在倒置顯微鏡下，通過(guò)微操縱儀將充灌電極內(nèi)液的記錄電極輕輕壓向細(xì)胞表面。當(dāng)封接阻抗增加時(shí)，再使電極稍稍下降，并迅速通過(guò)記錄電極內(nèi)部施加適當(dāng)負(fù)壓，使電極和細(xì)胞表面形成緊密封接。在此基礎(chǔ)上繼續(xù)施加負(fù)壓破膜，即形成全細(xì)胞記錄方式。采用Axopatch 200Β膜片鉗放大器采集電流信號(hào)，電流信號(hào)經(jīng)AD/DA轉(zhuǎn)換器進(jìn)入計(jì)算機(jī)后， 由pCLAMPS. 2軟件的Clampex采樣程序采入，采樣頻率為20ΚΗζ。電流信號(hào)經(jīng)膜片鉗放大器低通貝塞爾濾波(low-pass Bessel filter)，_3dB頻率為2KHz。串聯(lián)電阻補(bǔ)償為85-95%。 均采用Clampex采樣程序提供的P/N漏減功能(P/N leak Subtraction)消除漏電流，N=_4 (P/-4，施加4個(gè)與階躍脈沖時(shí)程相同、極性相反的漏減脈沖，幅度為階躍脈沖的1/4)。全細(xì)胞記錄形成至少10分鐘待電流穩(wěn)定后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。BmK I 溶解于細(xì)胞外液(mM :NaCl 150，CaCl2 1. 2，MgCl2 1，KCl 3. 5，HEPES 10， D-glucose 20，用NaOH調(diào)至pH7. 4)。加藥管直徑約為100 μ m，距離細(xì)胞約100 μ m，給藥速度為 200-300 μ 1/min。
本發(fā)明表達(dá)rNavl. 5的載體為HEK293T細(xì)胞系，非轉(zhuǎn)染的HEK293T細(xì)胞的平均本底電流密度為D=5.53 士0.21 pA/pF(n=15)，這些本底電流與在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中激活的電流相比要小得多，因此在分析時(shí)可以忽略不計(jì)。參見圖1，將細(xì)胞鉗制于-140mv時(shí)，給予_20mv 躍階刺激，比較300nM BmK I施加前后，rNavl. 5電流的變化(如圖IA所示)。為了定量描述 BmK I對(duì)rNavl. 5失活的影響，將去極化刺激開始后4. 5ms到5ms間的電流平均值與此電壓下峰值的比值定義為IaiisAprak作為BmK I對(duì)通道失活過(guò)程影響的指標(biāo)。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)， 加藥前，rNavl. 5失活較快，IaisApeak僅占峰鈉電流的0. 14士0. 01 (n=32)；施加300 nM BmK I后，rNavl. 5失活化過(guò)程極其顯著地被延緩，此比值變?yōu)?. 62士0. 02(n=21)(如圖IB所示)。表達(dá)rNavl. 8的載體為ND7/23細(xì)胞系。據(jù)已有研究表明，ND7/23具有內(nèi)源性本底電流，但是可以被500nM TTX (河豚魚毒素)完全阻斷，而rNavl. 8是TTX不敏感型鈉通道 (TTX-R通道，IC50彡100yM)，500nm TTX不會(huì)阻斷rNavl. 8的電流。在記錄rNavl. 8電流時(shí)，在細(xì)胞外液中添加500nM TTX，可記錄到單獨(dú)的rNavl. 8通道電流。圖IC所示，鉗制電位為_80mv，給予細(xì)胞+IOmv刺激時(shí)，施加300nM BmK I前后(施加時(shí)間為IOmin)的rNavl. 8 電流，同樣使用I5msApeak作為量化指標(biāo)，施加300nM BmK I前后rNavl. 8電流的失活沒有顯著性差異:I5fflS/Ipeak加藥前后分別為0. 62士0. 02 (n=8)和0. 61 + 0. 01 (n=4)。(圖ID所示)
結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，300nM BmK I能夠影響rNavl. 5，顯著延緩其失活過(guò)程，而對(duì)rNavl. 8則無(wú)明顯效果。通過(guò)電生理記錄，檢測(cè)出通道靶向藥物(BmK I)對(duì)于通道(rNavl. 5，rNavl. 8)功能的影響。兩種檢測(cè)結(jié)果對(duì)比發(fā)現(xiàn)，BmK I對(duì)于rNavl. 5來(lái)說(shuō)，功能影響和動(dòng)態(tài)結(jié)合具有一致性，但是對(duì)于rNavl. 8來(lái)說(shuō)，二者存在差異，BmK I能夠結(jié)合rNavl. 8，實(shí)際上卻并不顯著影響其功能。由此證明本方法能夠從技術(shù)層面為研究研究膜通道蛋白生理/病理功能及其與靶向藥物相互作用開拓新思路，是具備可行性的檢測(cè)方法。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法，其特征在于該方法的具體步驟為a.根據(jù)膜通道蛋白上與其靶向藥物相互作用位點(diǎn)上的關(guān)鍵氨基酸序列，合成肽鏈；b.采用表面等離子共振技術(shù)檢測(cè)步驟a所得的肽鏈與靶向藥物的相互作用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的檢測(cè)膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法，其特征在于所述的膜通道為細(xì)胞電壓門控鈉通道，該通道的位點(diǎn)3與其靶向藥物相互作用的關(guān)鍵氨基酸序列為D IV /S3-S4胞外環(huán)，根據(jù)該關(guān)鍵氨基酸序列設(shè)計(jì)的兩段肽鏈為rNavl. 5 SIVGTVLSDIIQKYFFSPTL rNavl. 8 SIGSLLFSAILKSLENYFSPTL ； 所述的靶向藥物為鈉通道靶向藥物BmK I。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法，其特征在于所述的步驟b的具體方法為a.靶向藥物的芯片固化注 Λ 400mM 的 N-ethyl-N-(dimethylaminepropyl)-carbodiimid 禾口 IOOmM 的 N-hydroxy-succimide的按1: 1的體積比混合成的混合液，激活CM5傳感器芯片上的偶聯(lián)基團(tuán)-COOH ；將靶向藥物以23μβ/πι1的配置濃度置于pH5. OUOmM醋酸鈉溶液中，取30 μ 1 注入芯片；b.取一系列結(jié)合反應(yīng)終濃度下的肽鏈分別以20ul/min的流速通過(guò)步驟a所得的固化有靶向藥物的傳感器芯片；所有反應(yīng)在4°C進(jìn)行；使用的結(jié)合反應(yīng)液為NaCl 150 mM, CaCl2 1.2 mM, MgCl2 1 mM, KCl 3.5 mM, HEPES 10，D-glucose 20 mM，用 NaOH 調(diào)至 ρΗ7· 4。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)膜通道蛋白與靶向藥物相互作用的方法，其特征在于所述的肽鏈為rNavl. 5 SIVGTVLSDIIQKYFFSPTLrNavl. 8 SIGSLLFSAILKSLENYFSPTL ；所述的靴向藥物為鈉通道靴向藥物BmK I。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)膜通道蛋白與靶向藥物的相互作用的方法及其應(yīng)用。該方法的具體步驟為根據(jù)膜通道蛋白上與其靶向藥物相互作用位點(diǎn)上的關(guān)鍵氨基酸序列，合成肽鏈；采用表面等離子共振技術(shù)檢測(cè)步驟a所得的肽鏈與靶向藥物的相互作用。發(fā)明從技術(shù)層面為研究研究膜通道蛋白生理/病理功能及其與靶向藥物相互作用開拓了新思路，提供了新的可行檢測(cè)方法。
文檔編號(hào)C07K14/00GK102565006SQ20121000805
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月19日
發(fā)明者馮興華, 葉品, 吉永華, 楊宏天, 董邦乾 申請(qǐng)人:上海大學(xué)