專利名稱：人血白蛋白的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制品技術(shù)中蛋白質(zhì)的分離、提取方法，具體涉及人血白蛋白的制備方法。
背景技術(shù)：
人血漿白蛋白(HPA)是有585個(gè)氨基酸組成的單鏈非糖蛋白，分子量為66KD，是血漿中含量最多的一種蛋白質(zhì)，在人體內(nèi)HPA主要生理功能是維持血液滲透壓和攜帶血液中多種配基(包括脂肪酸、氨基酸、類固醇、金屬離子及藥物)與組織進(jìn)行交換等生理功能，臨床上主要用于手術(shù)輸血和危重病人補(bǔ)液，治療創(chuàng)傷休克、發(fā)燒、水腫、低白蛋白血癥和紅細(xì)胞過多癥等，而且能增強(qiáng)人體抵抗能力，是重要的臨床藥物，也是迄今為止產(chǎn)量最大、用量最大的蛋白質(zhì)藥物。當(dāng)前，HPA的臨床使用量巨大，國(guó)際上年使用量約達(dá)600噸，我國(guó)臨床使用量也已達(dá)100噸左右，并將隨著農(nóng)村生活水平和醫(yī)療條件的改善不斷增加?，F(xiàn)有技術(shù)中多采用低溫乙醇工藝分離血漿蛋白，分離各組分多采用離心分離的方法，它存在如下缺點(diǎn)一是離心剪切力對(duì)蛋白質(zhì)的影響，離心分離轉(zhuǎn)速每分鐘一般在14000 轉(zhuǎn)以上，超高速剪切力對(duì)蛋白質(zhì)沉淀顆粒造成的破壞，可能造成蛋白質(zhì)立體結(jié)構(gòu)的變化；二是離心分離采用超高速離心，一般達(dá)到14000轉(zhuǎn)以上，機(jī)器產(chǎn)熱需要接近-30°C以下的工藝?yán)涿皆陔x心機(jī)轉(zhuǎn)鼓周圍提供冷環(huán)境，以降低轉(zhuǎn)鼓超高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的熱量，防止蛋白受熱而變性。同時(shí)離心操作間溫度也要求_5°C以下，加上離心機(jī)本身的高耗電(3KW/臺(tái))，整體上能耗特別大，而且要求低溫的操作條件；三是離心操作由于單臺(tái)離心機(jī)轉(zhuǎn)鼓容量有限，需要多臺(tái)設(shè)備同時(shí)開啟，不易進(jìn)行管道自動(dòng)化，人員勞動(dòng)強(qiáng)度大，安全風(fēng)險(xiǎn)高，制品“跑、冒、滴、 漏”不可避免，此法產(chǎn)品收率一般在2. 5g/ml血漿以下，產(chǎn)品收率低。另一種較為改進(jìn)的方法是，采用加壓過濾分離方法，但是在過濾之前，反應(yīng)混懸液中必須加入足夠量的硅藻土或珍珠巖的助濾劑，才能保證過濾的實(shí)現(xiàn)。而硅藻土或珍珠巖等助濾劑中主要成分是二氧化硅，占70 80%，其次要成分就是三氧化二鋁，約占10 20 %不等，這些三氧化二鋁經(jīng)過蛋白反應(yīng)溶液后會(huì)有一定比例的鋁離子形式存在進(jìn)入制品溶液。從所周知，鋁離子對(duì)人體有致癌作用，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定有關(guān)人血白蛋白質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)都有明確的規(guī)定，必須小于200微克/升。另一方面，加壓過濾所用的深層濾板，其主要成分是纖維素纖維、硅藻土、珍珠巖等，也同樣有鋁離子釋放進(jìn)入制品中；并且還存在超濾透析注射用水體積大的缺陷為了去除生產(chǎn)過程中引入的鋁離子，在生產(chǎn)過程的超濾工序中，至少需要首次濃縮液10倍以上的注射用水進(jìn)行反復(fù)透析，才有可能使制品中鋁離子小于200 微克/升，而且即便是再增加透析倍數(shù)，鋁離子也始終會(huì)大于100微克/升。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，而提供一種人血白蛋白的制備方法，其技術(shù)方案如下人血白蛋白的制備方法，包括以下步驟
第一步，分離組分Ι+Π+ΙΙΙ 以人血漿為原料，加壓過濾分離人血漿，分離組分 I+II+III沉淀，收集壓濾上清液進(jìn)入下一步工序；第二步，分離組分IV 將上一步收集的壓濾上清液，采用加壓過濾分離組分IV沉淀，收集壓濾上清液進(jìn)入下一步工序；第三步分離組分V 將上一步收集的壓濾上清液，采用加壓過濾分離組分V，收集壓濾分離組分V沉淀進(jìn)入下一步工序；第四步精制純化，將上一工序收集的組分V沉淀的PH調(diào)節(jié)至4. 5 4. 6，調(diào)控溫度至-2 _3°C，靜置4小時(shí)以上，深層過濾，收集過濾液進(jìn)入下一工序；第五步，超濾將上一工序深層過濾液的PH調(diào)節(jié)至4. 0 4. 5，再濃縮深層過濾液至蛋白質(zhì)含量22%以上，收集超濃縮液進(jìn)入下一步工序；第六步，巴氏滅活將上一步超濾濃縮液調(diào)pH 6. 8 7. 0，添加辛酸鈉，至每克蛋白質(zhì)中添加0. 14 0. 18克辛酸鈉，60士0. 5°C水浴保溫10小時(shí)。第七步，除菌灌裝，檢定成品，將檢定合格后產(chǎn)品貼簽、裝盒等進(jìn)行包裝。上述技術(shù)方案的第一步中分離組分I+II+III具體步驟是，將低溫冰凍人血漿融化為液體狀態(tài)，加入體積份數(shù)為95%的-15°C的藥用乙醇，至最終乙醇的體積達(dá)到人血漿和藥用乙醇混合液總體積的20%，同時(shí)用pH為4. 0的緩沖液調(diào)節(jié)人血漿和藥用乙醇混合液的pH至6. 2 6. 4，并調(diào)節(jié)血漿蛋白質(zhì)使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到5. 0%，調(diào)控溫度至_5°C，攪拌 2小時(shí)以上，靜置4小時(shí)以上后，往混合液中按20g/L加入硅藻土或珍珠巖或二者組合作為助濾劑，采用加壓過濾分離方法分離組分I+II+III沉淀。上述技術(shù)方案的第二步中，分離組分IV的具體步驟是，將第一步收集的壓濾上清液，用PH為4. 0的緩沖液調(diào)節(jié)pH至6. 0 6. 2，加入體積份數(shù)為95 %的_15°C藥用乙醇至乙醇的體積達(dá)到第一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40%，調(diào)控溫度至_5°C，攪拌2小時(shí)以上，靜置6小時(shí)以上，往混合液中按15g/L加入硅藻土或珍珠巖或二者組合作為助濾劑，采用加壓過濾分離方法分離組分IV沉淀。上述技術(shù)方案的第三步中，分離組分V的具體步驟是，將第二步收集的壓濾上清液，用1 2mol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)PH至4. 7 4. 9，加入體積份數(shù)為95%的-15°C藥用乙醇至上一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40%，調(diào)控溫度至_8°C，攪拌2小時(shí)以上，靜置8小時(shí)以上，采用加壓過濾分離方法分離組分V沉淀。上述技術(shù)方案的第四步中，采用lmol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)組分V沉淀的pH調(diào)節(jié)至 4. 5 4. 6。上述技術(shù)方案的第五步中，超濾的具體步驟是，將第四步得到的深層過濾液用 lmol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH至4. 0 4. 5，濃縮使制品溶液的蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8 10%的濃縮液，往制品溶液中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10 30%的氯化鈉溶液，至氯化鈉溶液的體積達(dá)到制品溶液和氯化鈉混合液總體積的1. 0 1. 5%，用體積為5倍濃縮液體積且質(zhì)量份數(shù)為 0. 9%的氯化鈉溶液透析，接著用體積為1倍濃縮液體積且質(zhì)量份數(shù)為0. 5%的氯化鈉溶液透析，至乙醇體積含量< 0. 25%，再濃縮制品溶液至蛋白質(zhì)含量> 22%。上述技術(shù)方案的第七步中，除菌灌裝的具體步驟是，用裝配有0. 2微米濾膜的除菌濾器將第六步中巴氏滅活后的蛋白溶液進(jìn)行除菌過濾，采用機(jī)器自動(dòng)化灌裝至每瓶 50ml。
本發(fā)明采用相對(duì)溫和的加壓過濾分離方法，對(duì)蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)無影響，確保了制備出高質(zhì)量的人血白蛋白；加壓過濾分離方法，僅需要一臺(tái)轉(zhuǎn)子泵或氣動(dòng)泵即可提供壓濾機(jī)足夠的動(dòng)力，操作環(huán)境溫度也只需2 8°C，完全能夠在低溫的狀態(tài)下生產(chǎn)，能耗低；生產(chǎn)過程中采用壓濾機(jī)，一臺(tái)過濾面積30平方的壓濾機(jī)相當(dāng)于20臺(tái)左右的管式離心機(jī)的工作能力，單臺(tái)壓濾機(jī)可以實(shí)現(xiàn)管道相對(duì)密閉連接，制品回收徹底，一般收2. 7g/ml血漿以上， 產(chǎn)品收率大大提高；本發(fā)明超濾的過程中，首次僅需要5倍濃縮液體積溶液透析，減少了超濾透析體積，減少生產(chǎn)中透析用注射用水的用量；能夠向臨床提供低鋁離子含量甚至不含鋁離子的人血白蛋白。本發(fā)明在低溫乙醇?jí)簽V分離工藝過程中的超濾步驟中，保持蛋白溶液pH4.0 4. 5，低于白蛋白等電點(diǎn)pH4. 9，此時(shí)白蛋白帶正電荷，而鋁離子本身帶正電荷，保持兩者在溶液的分離狀態(tài)，首次濃縮后，鈉離子含量在1. 0 1. 5%，前5倍透析液用0. 9%氯化鈉溶液提供鈉離子置換鋁離子，通過透析去除鋁離子，確保制品中鋁離子小于50微克/升，在試驗(yàn)過程中甚至檢測(cè)到鋁離子為零，大大降低人血白蛋白制品中鋁離子含量，向臨床提供鋁離子含量低甚至不含鋁離子的人血白蛋白；超濾結(jié)束后，將白蛋白溶液PH調(diào)整到6. 8 7.0，有效確保了白蛋白在巴氏滅活和以后的儲(chǔ)存中的穩(wěn)定性；超濾過程中后續(xù)步驟中用1 倍0.5%氯化鈉溶液透析，調(diào)整鈉離子含量，確保成品鈉離子含量< 150mmol/L，提高了人血白蛋白的質(zhì)量。


圖1是本發(fā)明人血白蛋白分離工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，便于清楚地了解本發(fā)明，但它們不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限定。實(shí)施例1 第一步，沉淀組分I+II+III 低溫冰凍血漿融化為液體狀態(tài)，加入體積份數(shù)為 95%的_15°C藥用乙醇至最終乙醇濃度至20%，同時(shí)用pH4. 0緩沖液調(diào)節(jié)pH 6. 2，血漿蛋白含量5. 0%，調(diào)控溫度至_5°C，攪拌2小時(shí)，靜置5小時(shí)，往混合液中按20g/L加入硅藻土和珍珠巖二者組合作為助濾劑，采用加壓過濾分離，收集壓濾分離組分沉淀I+II+III供制備人免疫球蛋白，收集壓濾上清液進(jìn)入下一步工序；第二步，沉淀組分IV 將上一步收集的壓濾上清液，用pH4. 0緩沖液調(diào)節(jié)pH 6. 0， 加入體積份數(shù)為95%的_15°C藥用乙醇至最終乙醇的體積達(dá)到上一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40%，調(diào)控溫度至_5°C，攪拌3小時(shí)，靜置6小時(shí)，往反應(yīng)混懸液中按15g/L加入硅藻土或珍珠巖或二者組合作為助濾劑，采用加壓過濾分離，壓濾分離組分IV沉淀供制備微量蛋白質(zhì)，收集壓濾上清液進(jìn)入下一步工序。第三步，沉淀組分V 將上一步收集的壓濾上清液，用1 2mol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH 4. 7，加入體積份數(shù)為95%的_15°C藥用乙醇至最終乙醇的體積達(dá)到上一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40%，調(diào)控溫度至_8°C，攪拌2小時(shí)，靜置8小時(shí)，采用加壓過濾分離，壓濾上清液廢棄或回收乙醇，收集壓濾分離組分V沉淀進(jìn)入下一步工序。
第四步，精制純化將上一工序收集的組分V沉淀用4%乙醇溶液溶解，用lmol/L 醋酸溶液調(diào)節(jié)PH 4. 5，調(diào)控溫度至-2°C，靜置4小時(shí)，深層過濾，收集過濾液進(jìn)入下一工序。第五步，超濾將上一步深層過濾液用lmol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH 4. 0，濃縮使制品溶液蛋白質(zhì)含量8%，往制品溶液中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的氯化鈉溶液，至氯化鈉溶液的體積達(dá)到制品溶液和氯化鈉混合液總體積的1. 0%，先用5倍濃縮液體積的0. 9%氯化鈉溶液連續(xù)透析，接著用1倍濃縮液體積的0.5%氯化鈉溶液透析至乙醇含量<0. 25%，再濃縮制品溶液至蛋白質(zhì)含量> 22%以上，收集濃縮液進(jìn)入下一步工序。第六步，巴氏滅活將上一步超濾濃縮液調(diào)pH 6. 8，添加辛酸鈉，至每克蛋白質(zhì)中添加0. 14克辛酸鈉，60°C水浴保溫10小時(shí)。第七步，除菌灌裝用裝配有0.2微米濾膜的除菌濾器將上一步巴氏滅活后蛋白溶液進(jìn)行除菌過濾，采用機(jī)器自動(dòng)化灌裝至每瓶50ml。第八步，成品檢定灌裝后制品進(jìn)行14天放孵后逐瓶外觀燈檢，燈檢合格產(chǎn)品按照抽樣程序抽檢，進(jìn)行成品檢定。第九步，成品包裝將成品檢定合格后產(chǎn)品貼簽、裝盒等進(jìn)行包裝。實(shí)施例2 第一步，分離組分I+II+III 以人血漿為原料，將低溫冰凍人血漿融化為液體狀態(tài)，加入體積份數(shù)為95 %的-15°C的藥用乙醇，至最終乙醇的質(zhì)體積達(dá)到人血漿和藥用乙醇混合液總體積的20%，同時(shí)用pH為4. 0的緩沖液調(diào)節(jié)人血漿和藥用乙醇混合液的pH至 6. 3，使血漿蛋白質(zhì)含量5.0%，調(diào)控溫度至-5°C，攪拌2小時(shí)以上，靜置4小時(shí)以上后，往混合液中按20g/L加入硅藻土作為助濾劑，采用加壓過濾分離方法分離組分I+II+III沉淀， 收集組分I+II+III沉淀供制備人免疫球蛋白，收集壓濾上清液進(jìn)入下一步工序；第二步，分離組分IV 將第一步收集的壓濾上清液，用PH為4. 0的緩沖液調(diào)節(jié)pH 至46. 1，加入體積份數(shù)為95%的_15°C藥用乙醇至乙醇的體積達(dá)到上一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40%，調(diào)控溫度至_5°C，攪拌4小時(shí)，靜置8小時(shí)，往混合液中按15g/L加入硅藻土作為助濾劑，采用加壓過濾分離方法分離組分IV沉淀，供制備微量蛋白質(zhì)，收集壓濾上清液進(jìn)入下一步工序；第三步分離組分V 將第二步收集的壓濾上清液，用1 2mol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH 至4. 85，加入體積份數(shù)為95%的_15°C藥用乙醇至的質(zhì)量達(dá)到上一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40 %，調(diào)控溫度至-8V，攪拌6小時(shí)，靜置10小時(shí)，采用加壓過濾分離方法分離組分V沉淀，收集壓濾分離組分V沉淀進(jìn)入下一步工序；。第四步精制純化，將上一工序收集的組分V沉淀，采用lmol/L醋酸溶液的pH調(diào)節(jié)至4. 55，調(diào)控溫度至-2. 5°C，靜置4小時(shí)，深層過濾，收集過濾液進(jìn)入下一工序；第五步，超濾將上一工序深層過濾液用lmol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH為4. 25，濃縮使制品溶液的蛋白質(zhì)的質(zhì)量含量為9%，往制品溶液中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的氯化鈉溶液， 至氯化鈉溶液的體積達(dá)到制品溶液和氯化鈉混合液總體積的1. 3%，先用5倍濃縮液體積且質(zhì)量份數(shù)為0. 9%的氯化鈉溶液透析，接著用1倍濃縮液體積的0. 5%氯化鈉溶液透析至乙醇體積含量為0. 15%，再濃縮制品溶液至蛋白質(zhì)含量30%，收集超濃縮液進(jìn)入下一步工序；第六步，巴氏滅活將上一步超濾濃縮液調(diào)pH 6. 9，添加辛酸鈉，至每克蛋白質(zhì)中添加0. 16克辛酸鈉，60. 5°C水浴保溫10小時(shí)。第七步，除菌灌裝，用裝配有0. 2微米濾膜的除菌濾器將巴氏滅活后的蛋白溶液進(jìn)行除菌過濾，采用機(jī)器自動(dòng)化灌裝至每瓶50ml，檢定成品，將檢定合格后產(chǎn)品貼簽、裝盒等進(jìn)行包裝。實(shí)施例3 第一步，分離組分I+II+III 將低溫冰凍人血漿融化為液體狀態(tài)，加入體積份數(shù)為95%的-15°C的藥用乙醇，至最終乙醇的體積達(dá)到人血漿和藥用乙醇混合液總體積的 20%，同時(shí)用pH為4. 0的緩沖液調(diào)節(jié)人血漿和藥用乙醇混合液的pH至6. 4，使血漿蛋白質(zhì)的質(zhì)量含量5. 0%，調(diào)控溫度至_5°C，攪拌8小時(shí)，靜置12小時(shí)，往混合液中按20g/L加入硅藻土或珍珠巖或二者組合作為助濾劑，采用加壓過濾分離方法分離組分I+II+III沉淀， 收集組分I+II+III沉淀供制備人免疫球蛋白，收集壓濾上清液進(jìn)入下一步工序；第二步，分離組分IV，將第一步收集的壓濾上清液，用pH為4. 0的緩沖液調(diào)節(jié)pH 至6. 2，加入體積份數(shù)為95%的_15°C藥用乙醇至乙醇的體積達(dá)到上一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40%，調(diào)控溫度至_5°C，攪拌8小時(shí)以上，靜置9，往混合液中按15g/L加入珍珠巖作為助濾劑，采用加壓過濾分離方法分離組分IV沉淀；第三步分離組分V 將第二步收集的壓濾上清液，用1 2mol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH 至4. 9，加入體積份數(shù)為95%的_15°C藥用乙醇至的體積達(dá)到上一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40 %，調(diào)控溫度至-8V，攪拌6小時(shí)，靜置12小時(shí)，采用加壓過濾分離方法分離組分V沉淀，收集壓濾分離組分V沉淀進(jìn)入下一步工序；第四步精制純化，將上一工序收集的組分V沉淀，采用lmol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH 至4. 6，調(diào)控溫度至_3°C，靜置12小時(shí)，深層過濾，收集過濾液進(jìn)入下一工序；第五步，超濾將第四步得到的深層過濾液用lmol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH至4. 5，濃縮使制品溶液的蛋白質(zhì)的質(zhì)量含量為10%，往制品溶液中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的氯化鈉溶液，至氯化鈉溶液的體積達(dá)到制品溶液和氯化鈉混合液總體積的1. 5%，先用5倍濃縮液體積且質(zhì)量份數(shù)為0. 9%的氯化鈉溶液透析，接著用1倍濃縮液體積且質(zhì)量份數(shù)為0. 5%氯化鈉溶液透析，至乙醇體積含量0.2%，再濃縮制品溶液至蛋白質(zhì)含量為；第六步，巴氏滅活將上一步超濾濃縮液調(diào)pH 6. 8 7. 0，添加辛酸鈉，至每克蛋白質(zhì)中添加0. 14 0. 18克辛酸鈉，59. 5°C水浴保溫10小時(shí)。第七步，除菌灌裝，用裝配有0. 2微米濾膜的除菌濾器將巴氏滅活后的蛋白溶液進(jìn)行除菌過濾，采用機(jī)器自動(dòng)化灌裝至每瓶50ml，檢定成品，將檢定合格后產(chǎn)品貼簽、裝盒等進(jìn)行包裝。本說明書中未作詳細(xì)描述的內(nèi)容屬于本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員公知的現(xiàn)有技術(shù)。
權(quán)利要求
1.一種人血白蛋白的制備方法，其特征在于包括以下步驟第一步，分離組分Ι+Π+ΙΙΙ :以人血漿為原料，加壓過濾分離人血漿，分離組分 I+II+III沉淀，收集壓濾上清液進(jìn)入下一步工序；第二步，分離組分IV 將上一步收集的壓濾上清液，采用加壓過濾分離組分IV沉淀，收集壓濾上清液進(jìn)入下一步工序；第三步分離組分V 將上一步收集的壓濾上清液，采用加壓過濾分離組分V，收集壓濾分離組分V沉淀進(jìn)入下一步工序；第四步精制純化，將上一工序收集的組分V沉淀的PH調(diào)節(jié)至4. 5 4. 6，調(diào)控溫度至-2 _3°C，靜置4小時(shí)以上，深層過濾，收集過濾液進(jìn)入下一工序；第五步，超濾將上一工序深層過濾液的PH調(diào)節(jié)至4. 0 4. 5，再濃縮深層過濾液至蛋白質(zhì)含量22%以上，收集超濃縮液進(jìn)入下一步工序；第六步，巴氏滅活將上一步超濾濃縮液調(diào)PH 6. 8 7. 0，添加辛酸鈉，至每克蛋白質(zhì)中添加0. 14 0. 18克辛酸鈉，60士0. 5°C水浴保溫10小時(shí)。第七步，除菌灌裝，檢定成品，將檢定合格后產(chǎn)品貼簽、裝盒等進(jìn)行包裝。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血白蛋白的制備方法，其特征在于第一步中分離組分 I+II+III具體步驟是，將低溫冰凍人血漿融化為液體狀態(tài)，加入體積份數(shù)為95%的-15°C 的藥用乙醇，至最終乙醇的體積達(dá)到人血漿和藥用乙醇混合液總體積的20%，同時(shí)用pH 為4. 0的緩沖液調(diào)節(jié)人血漿和藥用乙醇混合液的pH至6. 2 6. 4，并調(diào)節(jié)血漿蛋白質(zhì)使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到5. 0%，調(diào)控溫度至_5°C，攪拌2小時(shí)以上，靜置4小時(shí)以上后，往混合液中按20g/L加入硅藻土或珍珠巖或二者組合作為助濾劑，采用加壓過濾分離方法分離組分 I+II+III 沉淀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血白蛋白的制備方法，其特征在于第二步中分離組分IV 的具體步驟是，將第一步收集的壓濾上清液，用PH為4. 0的緩沖液調(diào)節(jié)pH至6. 0 6. 2，加入體積份數(shù)為95%的_15°C藥用乙醇至乙醇的體積達(dá)到第一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40%，調(diào)控溫度至_5°C，攪拌2小時(shí)以上，靜置6小時(shí)以上，往混合液中按15g/L加入硅藻土或珍珠巖或二者組合作為助濾劑，采用加壓過濾分離方法分離組分 IV沉淀。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血白蛋白的制備方法，其特征在于第三步中分離組分V 的具體步驟是，將第二步收集的壓濾上清液，用1 2mol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH至4. 7 4. 9， 加入體積份數(shù)為95%的_15°C藥用乙醇至上一步收集的壓濾上清液和藥用乙醇混合液總體積的40 %，調(diào)控溫度至_8°C，攪拌2小時(shí)以上，靜置8小時(shí)以上，采用加壓過濾分離方法分離組分V沉淀。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血白蛋白的制備方法，其特征在于第四步中，采用lmol/ L醋酸溶液調(diào)節(jié)組分V沉淀的pH調(diào)節(jié)至4. 5 4. 6。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血白蛋白的制備方法，其特征在于第五步中超濾的具體步驟是，將第四步得到的深層過濾液用lmol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH至4. 0 4. 5，濃縮使制品溶液的蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8 10%的濃縮液，往制品溶液中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10 30% 的氯化鈉溶液，至氯化鈉溶液的體積達(dá)到制品溶液和氯化鈉混合液總體積的1. 0 1. 5%， 用體積為5倍濃縮液體積且質(zhì)量份數(shù)為0. 9%的氯化鈉溶液透析，接著用體積為1倍濃縮液體積且質(zhì)量份數(shù)為0. 5%的氯化鈉溶液透析，至乙醇體積含量< 0. 25%，再濃縮制品溶液至蛋白質(zhì)含量> 22%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血白蛋白的制備方法，其特征在于第七步中除菌灌裝的具體步驟是，用裝配有0.2微米濾膜的除菌濾器將第六步中巴氏滅活后的蛋白溶液進(jìn)行除菌過濾，采用機(jī)器自動(dòng)化灌裝至每瓶50ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物制品技術(shù)中蛋白質(zhì)的分離、提取方法，具體涉及人血白蛋白的制備方法，依次進(jìn)行以下步驟制得，分離組分I+II+III、分離組分IV、分離組分V、精制純化；超濾、巴氏滅活、除菌灌裝，檢定成品，將檢定合格后產(chǎn)品貼簽、裝盒等進(jìn)行包裝。本發(fā)明采用相對(duì)溫和的加壓過濾分離方法，對(duì)蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)無影響，確保了制備出高質(zhì)量的人血白蛋白；大大提高了產(chǎn)品收率，并能夠向臨床提供低鋁離子含量甚至不含鋁離子的人血白蛋白，提高了人血白蛋白的質(zhì)量。
文檔編號(hào)C07K14/765GK102532304SQ20121001322
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月16日
發(fā)明者徐健生, 王玉兵, 田健生 申請(qǐng)人:武漢中原瑞德生物制品有限責(zé)任公司