專利名稱：一種治療新城疫的新型卵黃抗體及其制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動保行業(yè)獸用生物制品領(lǐng)域，所提供新型卵黃抗體用于檢測、預(yù)防和治療新城疫病毒感染。
背景技術(shù)：
雞新城疫是一種具有高度傳染性的病毒性疾病，各種品種、年齡、性別的雞都易感染，發(fā)病率和死亡率在90%以上，是嚴重危害養(yǎng)雞生產(chǎn)的最主要疾病之一。在西方發(fā)達國家往往采取以撲殺強毒感染群為主的方法；而在我國，由于經(jīng)濟發(fā)展水平的限制以及強毒感染的普遍存在，主要通過應(yīng)用疫苗進行免疫接種來控制新城疫的發(fā)生，由于新城疫疫苗種類繁多，質(zhì)量參差不齊，臨床疫苗使用方法不一，往往會因疫苗的選擇和使用不當造成免疫失敗，給養(yǎng)雞生產(chǎn)帶來極大的經(jīng)濟損失，近年來的實踐證明不明原因的免疫失敗普遍存在。近年來，隨著食品安全問題的日益嚴重，化學(xué)藥物的使用大大受到限制，以往臨床使用的鹽酸嗎啉胍、金剛烷胺等抗病毒藥物已經(jīng)由農(nóng)業(yè)部禁止使用，而卵黃抗體作為一種安全、高效、無公害的生物制品，來源廣泛、品質(zhì)優(yōu)良且價格低廉，在臨床上用于動物疾病的治療和診斷，具有廣闊的市場前景。當前卵黃抗體提取純化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、辛酸萃取法、鹽析法等，這些方法收率低、雜蛋白多、產(chǎn)品活性低。雖然市場上曾經(jīng)一度流行使用卵黃抗體，但由于技術(shù)水平所限，真正起到治療作用的難覓其蹤。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種治療新城疫的新型卵黃抗體及其制作方法。制作步驟如下
第一步驟，購買雞新城疫活疫苗(C30-86株)、雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)存儲于_15°C以下備用；購買注射用生理鹽水、雞新城疫滅活疫苗存儲于2 8°C備用；
第二步驟，購買經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；
第三步驟，分別于7日齡、21日齡給全雞群做雞新城疫活疫苗(C30-86株)免疫，飲水途徑，劑量分別依次為2羽份、4羽份；
第四步驟，在70日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I 系);右側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫滅活疫苗；
第五步驟，在100日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射4羽份雞新城疫滅活疫苗；在頸部皮下注射4羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)；
第六步驟，在140日齡時，給全雞群做雞新城疫活疫苗(C30-86株)免疫，飲水途徑，劑量為10羽份；
第七步驟，自150 160日齡起收集新城疫抗體水平10以上的雞蛋保存在4°C環(huán)境備
用；
第八步驟，在超凈臺上收集蛋黃，按3倍比例加入滅菌蒸餾水攪拌30分鐘以上，配成均
3一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時，用過濾氣泵回收上清液；
第九步驟，將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過O. 45微米和O. 22微米的濾膜進行超濾濃縮，收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；
第十步驟，將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉，方便保存； 第十一步驟，將卵黃抗體干粉按照一定的劑量分裝即可。本方法利用適當?shù)拿庖叱绦颢@得高效價雞蛋，利用蛋白質(zhì)的親水性特點，通過沉降法將卵黃抗體與脂類分離，且在濃縮過程中不破壞卵黃抗體的空間結(jié)構(gòu)而出去雜蛋白， 充分保護了卵黃抗體的生物活性和純粹性，所制造的卵黃抗體純度高、活性強；本發(fā)明所提供的新型卵黃抗體提取純化方法，能最大限度將卵黃中特定的新城疫抗體從雜蛋白中分離出來而純化濃縮過程不對卵黃抗體產(chǎn)生破壞作用，不影響產(chǎn)品生物活性，并且包含基因型
Π和基因型νπ的新型新城疫抗體，使用范圍更廣闊，能夠覆蓋新城疫強毒感染的全部范
圍；本發(fā)明所提供的卵黃抗體干粉，可在符合GMP要求的環(huán)境下與葡萄糖、乳糖等適宜輔料以適當比例可配制成粉劑、溶液劑、注射液、注射用粉劑等臨床適用劑型，可用于診斷、預(yù)防和治療新城疫病毒感染。
具體實施例方式實施例
①蛋雞的免疫
購買SPF蛋雞雛，分別于7日齡、21日齡給全雞群做雞新城疫活疫苗(C30-86株)免疫， 飲水途徑，劑量分別依次為2羽份、4羽份。在70日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)；右側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫滅活疫苗。在100日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射4羽份雞新城疫滅活疫苗；在頸部皮下注射 4羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)。在140日齡時，給全雞群做雞新城疫活疫苗(C30-86株)免疫，飲水途徑，劑量為10 羽份。自160日齡起收集雞蛋保存在4°C環(huán)境備用。經(jīng)新城疫抗體檢測，全部能夠達到10以上。②卵黃抗體的提取與純化濃縮
在超凈臺上收集蛋黃，按3倍比例加入滅菌蒸餾水攪拌35分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時，用過濾氣泵回收上清液，即為卵黃抗體溶液。將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過O. 45微米和O. 22微米的濾膜進行超濾濃縮，收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液。③卵黃抗體的干燥
將卵黃抗體濃縮液做55°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉，保存即可。以上實施例僅為了對本發(fā)明作進一步的說明，而本發(fā)明的范圍不受所舉實施例的局限。部分試驗結(jié)果報告一種治療新城疫的新型卵黃抗體的試驗報告
選用某已確診感染新城疫的病雞3700只，隨機挑選30只最為空白對照，其余平均分為A、B兩組。網(wǎng)上平養(yǎng)，保持干凈，及時通風，做好記錄。飼料參考NRC肉雞飼養(yǎng)標準， 配制基礎(chǔ)日糧，自由采食，自由飲水，統(tǒng)一管理。A組添加本卵黃抗體凍干粉制劑(由廣東紫金正天藥業(yè)有限公司、廣東省中獸藥工程技術(shù)研究開發(fā)中心聯(lián)合制作)，按1:100的比例兌水飲用組為黃芪多糖注射液(抗病毒I號注射液)(由河源市獸藥工程技術(shù)研究開發(fā)中心提供)，按每50ml兌水Ikg自由飲用；C組為空白對照組。表I A、B、C三組治療對比試驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種治療新城疫的新型卵黃抗體，其制作步驟如下第一步驟，購買雞新城疫活疫苗(C30-86株)、雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)存儲于_15°C以下備用；購買注射用生理鹽水、雞新城疫滅活疫苗存儲于2 8°C備用；第二步驟，購買經(jīng)檢疫合格的SPF蛋雞雛作隔離飼養(yǎng)；第三步驟，分別于7日齡、21日齡給全雞群做雞新城疫活疫苗(C30-86株)免疫，飲水途徑，劑量分別依次為2羽份、4羽份；第四步驟，在70日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I 系);右側(cè)皮下注射2羽份雞新城疫滅活疫苗；第五步驟，在100日齡時，在雞胸部左側(cè)皮下注射4羽份雞新城疫滅活疫苗；在頸部皮下注射4羽份雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)；第六步驟，在140日齡時，給全雞群做雞新城疫活疫苗(C30-86株)免疫，飲水途徑，劑量為10羽份;第七步驟，自150 160日齡起收集新城疫抗體水平10以上的雞蛋保存在4°C環(huán)境備用；第八步驟，在超凈臺上收集蛋黃，按3倍比例加入滅菌蒸餾水攪拌30分鐘以上，配成均一的蛋黃液，轉(zhuǎn)移至4°C環(huán)境冷藏、靜置12小時，用過濾氣泵回收上清液；第九步驟，將含卵黃抗體的蛋黃上清液依次通過O. 45微米和O. 22微米的濾膜進行超濾濃縮，收集介于兩種濾膜之間的物質(zhì)即為卵黃抗體的濃縮液；第十步驟，將卵黃抗體濃縮液做50 56°C減壓干燥，制成卵黃抗體干粉，方便保存； 第十一步驟，將卵黃抗體干粉按照一定的劑量分裝即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種治療新城疫的新型卵黃抗體，可制成粉劑、液劑、噴霧劑、注射液、注射用粉劑。
全文摘要
本發(fā)明一種治療新城疫的新型卵黃抗體及其制作方法屬于動保行業(yè)獸用生物制品領(lǐng)域，其制作方法經(jīng)蛋雞的免疫、卵黃抗體的提取與純化濃縮及卵黃抗體的干燥過程。本發(fā)明能最大限度將卵黃中特定的新城疫抗體從雜蛋白中分離出來而純化濃縮過程不對卵黃抗體產(chǎn)生破壞作用，不影響產(chǎn)品生物活性，并且包含基因型II和基因型VII的新型新城疫抗體，使用范圍更廣闊，能夠覆蓋新城疫強毒感染的全部范圍；本發(fā)明所提供的卵黃抗體干粉，可在符合GMP要求的環(huán)境下與葡萄糖、乳糖等適宜輔料以適當比例可配制成粉劑、溶液劑、注射液、注射用粉劑等臨床適用劑型，可用于診斷、預(yù)防和治療新城疫病毒感染。
文檔編號C07K16/02GK102584991SQ201210056799
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月7日
發(fā)明者萬徐萍, 劉易通, 李振天, 王慶福, 紀雯婧 申請人:廣東紫金正天藥業(yè)有限公司