專利名稱：從虎杖中分離純化單體化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，具體是涉及一種從中藥虎杖中分離純化白藜蘆醇苷、大黃素-8-0-0 -D-葡萄糖甙、白藜蘆醇和大黃素的方法。
背景技術(shù)：
虎杖為寥科寥屬多年生草本植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.) 的干燥根和莖，葉亦入藥?；⒄刃晕犊嗪瑲w肝、肺、膽經(jīng)。主要功效有祛風(fēng)利濕、祛痰止咳、清熱解毒、活血化瘀。中醫(yī)臨床用于治療濕熱黃疸、肺熱咳嗽、瘡癰腫毒、關(guān)節(jié)痹痛、經(jīng)閉經(jīng)痛、水火燙傷、跌打損傷等?；⒄戎械闹饕行С煞譃檩祯惢衔锖蛙晤惓煞?，蒽醌類化合物主要有大黃素、大黃素8-0-3-D-葡萄糖甙)等，芪類成分主要是白藜蘆醇和白藜蘆醇苷。現(xiàn)已有文獻(xiàn)報(bào)道從虎杖中提取純化相關(guān)成分的方法。蘇文強(qiáng)[中壓柱層析法分離白藜蘆醇的研究，林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2004年01期]對虎杖中的白藜蘆醇進(jìn)行了提取分離和含量測定，采用中壓硅膠柱層析法分離白藜蘆醇。周建軍等[孔樹脂分離純化虎杖中蒽醌類化合物工藝研究，中成藥，2011年07期]以蒽醌類化合物量為指標(biāo)，考察大孔樹脂對蒽醌類化合物吸附及洗脫參數(shù)，純化后蒽醌類化合物量為71. 71%。張凌燕等[凝膠柱層析分離虎杖中白藜蘆醇的研究，天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2009年01期]探討了虎杖中白藜蘆醇分離純化的工藝條件，比較了不同溶劑、不同濃度、不同流速洗脫條件下白藜蘆醇樣品在LH-20凝膠層析柱上的分離效果，采用中壓液相色譜檢測收集到的白藜蘆醇純度可達(dá)80.34%。鐘芳芳等[虎杖中大黃素的分離及抗菌活性的初步研究，中南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2006年01期]采用pH梯度法提取虎杖中的大黃素，然后用濾紙擴(kuò)散法及薄層色譜自顯影生物技術(shù)研究其對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、綠膿桿菌、草分枝桿菌的抗菌效果。近年來也出現(xiàn)了與制備白藜蘆醇苷和白藜蘆醇有關(guān)的專利文獻(xiàn)。《白藜蘆醇和白藜蘆醇甙的制備方法》(中國專利，申請?zhí)?1118461. 2)用鹵代烴硅膠柱層析進(jìn)行第一步分離，然后用高速逆流色譜進(jìn)行第二次分離得到目標(biāo)產(chǎn)物?！栋邹继J醇和白藜蘆醇甙分離方法及其應(yīng)用》(中國專利，申請?zhí)?0121100. 5)對初提物進(jìn)行乙酸乙酯萃取，然后進(jìn)行硅膠柱層析，再以甲醇-氯仿為溶劑進(jìn)行重結(jié)晶得到白藜蘆醇苷，并通過第二次層析和重結(jié)晶得到白藜蘆醇?！痘⒄溶蘸桶邹继J醇的新制備方法》(中國專利，申請?zhí)?00310112538. 3)用聚酰胺層析法分離制備了虎杖苷和白藜蘆醇。《從虎杖中提取純度98%以上的白藜蘆醇的工藝》(中國專利，公開號CN101338327)將虎杖藥材經(jīng)過一系列處理過程得到粗品白藜蘆醇，再用虎杖專用絮凝劑絮凝沉淀，過濾，氧化鋁層析精制，結(jié)晶與重結(jié)晶和真空干燥等工藝步驟得到98%成品?！痘⒄戎杏行С煞执簏S素的提取方法》(中國專利，申請?zhí)?00510061919. 2)提供虎杖中有效成分大黃素的提取方法。上述方法或主要是進(jìn)行單一成分的分離，或是進(jìn)行混合物的提取，得到的產(chǎn)品純度較低，或需要使用鹵代烴為溶劑，對環(huán)境有嚴(yán)重危害，或溶劑體系比較復(fù)雜，生產(chǎn)規(guī)模較小，生產(chǎn)成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡便、綠色環(huán)保、分離量大、綜合成本低、生產(chǎn)周期短的快速從中藥虎杖中分離純化白藜蘆醇苷、白藜蘆醇、大黃素-8-0-0 -D-匍萄糖式和大黃素的方法。本發(fā)明的方案如下
從虎杖中分離純化白藜蘆醇苷、白藜蘆醇、大黃素-8-0-b-D-葡萄糖甙和大黃素的方法，步驟為
(1)虎杖提取物的制備取粉碎好的虎杖藥材，用乙醇或甲醇滲漉提取，滲漉 液經(jīng)回收至無醇后噴霧干燥得到提取物粗粉；
(2)柱層析純化將虎杖的提取物用甲醇溶解，上Superose12柱進(jìn)行層析分離純化，用甲醇-水或乙醇-水為洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫液流速為每小時(shí)1-10倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，得到高純度白藜蘆醇苷、白藜蘆醇、大黃素-8-0-b-D-葡萄糖甙和大黃素單體化合物。前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(I)滲漉提取時(shí)使用3柱串聯(lián)，逆流滲漉，介質(zhì)溫度為40-80°C，滲漉液流速為2-10倍單柱體積/小時(shí)。更加優(yōu)選的是，介質(zhì)溫度為50-60 0C (優(yōu)選55 °C )，滲漉液流速為3-5倍單柱體積/小時(shí)(優(yōu)選4倍單柱體積/小時(shí))。前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(I)滲漉提取時(shí)所用乙醇或甲醇的質(zhì)量濃度為 50%-100% (優(yōu)選 70%-90%，更優(yōu)選 85%)。前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(2)洗脫液為20%_85%的甲醇-水洗脫液(優(yōu)選 40%-70%，更優(yōu)選 65%)。前面所述的方法，優(yōu)選的方案是，步驟(2)用洗脫液進(jìn)行洗脫時(shí)，洗脫液流速為每小時(shí)2-6倍柱體積(優(yōu)選每小時(shí)3倍柱體積)。本發(fā)明從虎杖中分離純化白藜蘆醇苷、白藜蘆醇、大黃素-8-0-b-D-葡萄糖甙和大黃素的方法，采用3柱串聯(lián)提取，所得提取物目標(biāo)化合物含量高，雜質(zhì)低，這一優(yōu)點(diǎn)從虎杖提取物HPLC圖(圖I)可清楚看出。除此之外，還具有如下優(yōu)勢
(I)提取物經(jīng)過一步分離純化就可以同時(shí)得到白藜蘆醇苷、白藜蘆醇、大黃素-8-0-b-D-葡萄糖甙和大黃素等多種高純度單體化合物。不需要象已有技術(shù)一樣對樣品進(jìn)行多次分離，只需要一個(gè)分離步驟即可得到多種高純度化合物，方法操作簡單，效率高，工藝周期短，節(jié)省試劑，降低了生產(chǎn)成本。(2)純化過程中不使用對環(huán)境危害大的氯仿等有機(jī)溶劑，綠色環(huán)保。(3)優(yōu)化了層析方法的條件(洗脫液組成)，使純度和效率都大為提高。


圖I是虎杖提取物的高效液相色譜圖。圖2是實(shí)施例2層析色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例和附圖詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。實(shí)施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場獲得。所用Superose 12購自通用電氣(中國)醫(yī)療集團(tuán)，所用試劑均購自天津試劑四廠，所用水為去離子水。實(shí)施例虎杖藥材經(jīng)粉碎后，裝入3柱串聯(lián)滲漉柱逆流滲漉系統(tǒng)，以85%乙醇為滲漉溶劑，介質(zhì)溫度為55°C，滲漉液流速4倍單柱體積/小時(shí)。滲漉液經(jīng)回收至無醇后噴霧干燥得到虎杖藥材提取物粗粉。將虎杖藥材提取物粗粉用65%甲醇溶解，上Suppose 12層析，用甲醇-水為洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫液流速為每小時(shí)3倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，即得到所要分離的單體化合物。發(fā)明人通過使用不同濃度的甲醇，采用不同洗脫方式，優(yōu)選出了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的純化條件，有關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下
表一柱層析條件
權(quán)利要求
1.從虎杖中分離純化単體化合物的方法，其特征是，步驟為 (1)虎杖提取物的制備取粉碎好的虎杖藥材，用こ醇或甲醇滲漉提取，滲漉液經(jīng)回收至無醇后噴霧干燥得到提取物粗粉； (2)柱層析純化將虎杖的提取物用甲醇溶解，上Suppose12柱進(jìn)行層析分離純化，用甲醇-水或こ醇-水為洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫液流速為每小時(shí)1-10倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標(biāo)組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮，得到高純度白藜蘆醇苷、白藜蘆醇、大黃素-8-O-b-D-葡萄糖甙和大黃素単體化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征是，步驟(I)滲漉提取時(shí)使用3柱串聯(lián)，逆流滲漉，介質(zhì)溫度為40-80°C，滲漉液流速為2-10倍單柱體積/小吋。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是，介質(zhì)溫度為50-60°C，滲漉液流速為3-5倍單柱體積/小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是，介質(zhì)溫度為55°C，滲漉液流速為4倍單柱體積/小吋。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征是，步驟(I)滲漉提取時(shí)所用こ醇或甲醇的質(zhì)量濃度為50%-100%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征是，所用こ醇或甲醇的質(zhì)量濃度為70%-90%。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征是，所用こ醇或甲醇的質(zhì)量濃度為85%。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征是，步驟(2)洗脫液為20%-85%的甲醇-水洗脫液(優(yōu)選40%-70%，更優(yōu)選65%)。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征是，步驟(2)用洗脫液進(jìn)行洗脫時(shí)，洗脫液流速為每小時(shí)2-6倍柱體積(優(yōu)選每小時(shí)3倍柱體積)。
全文摘要
本發(fā)明涉及從從虎杖中分離純化白藜蘆醇苷、白藜蘆醇、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖甙和大黃素的方法，是以虎杖為原料，經(jīng)過下述步驟(1)虎杖提取物的制備取粉碎好的虎杖藥材，用乙醇或甲醇滲漉提取，滲漉液經(jīng)回收至無醇后噴霧干燥得到提取物粗粉；(2)柱層析純化以Superose12為分離介質(zhì)層析分離純化，用甲醇-水或乙醇-水為洗脫液，得到高純度白藜蘆醇苷、白藜蘆醇、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖甙和大黃素單體化合物。工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴(yán)重危害。
文檔編號C07H1/08GK102627677SQ201210076778
公開日2012年8月8日 申請日期2012年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月22日
發(fā)明者孫愛玲, 柳仁民, 董雯文 申請人:聊城大學(xué)