專利名稱：一種同時制備長梗冬青苷和紫丁香苷的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種同時制備長梗冬青苷和紫丁香苷的方法。
背景技術：
救必應為冬青科植物鐵冬青Ilex rotunda Thunb.干燥樹皮,始載于《嶺南采藥錄》，又名白木香、羊不吃、白沉香等。鐵冬青生長于山下疏林或溝、溪邊，分布于江蘇、安黴、浙江、江西、福建、臺灣、湖南、廣東、廣西、云南，為我國南方民方常用草藥。具有清熱解毒，利濕止痛的功效，常用于治療暑濕發(fā)熱，咽喉腫痛，濕熱瀉痢，脘腹脹痛，風濕痹痛，濕疹，瘡癤，跌打損傷。此外，救必應こ醇提取部位具有較強的抑菌和抗炎作用[張榕文，黃兆勝，范慶亞，等.救必應抑菌抗炎有效部位篩選[J].中華中醫(yī)藥學刊，2008，26 (8) =1820-1822],而且對應激性高血壓大鼠有降壓和減慢心率作用[梁燕玲，董艷芬，羅集鵬.救必應こ醇提 取物對應激性高血壓大鼠降壓作用的實驗研究[J].中藥材，2005，28 (7) =582-584.];救必應正丁醇提取物具有抗心律失常和抗心肌缺血作用[陳小夏，何冰，徐苑芬，等.救必應正丁醇提取物抗心律失常和抗心肌缺血作用研究[J].中藥藥理與臨床，1998，14(4).]。我國臨床對本品的應用多集中在對胃腸道消化系統(tǒng)等疾病的治療[戴衛(wèi)波，梅全喜，曾聰彥.救必應化學成分研究及臨床應用進展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008 (12) :137-139.]。救必應中主要含有三萜類、黃酮和酚類化合物[廣州市藥品檢驗所.中草藥救必應的實驗研究[J].新醫(yī)藥通訊，1970 (2) :23-26.]，并分離得到長梗冬青苷[朱任宏，洪山海，王友海.中藥救必應中的配醣體[J].化學學報，1956，22 (2) :128-133.]、鐵冬青酸[文東旭，陳仲良.救必應化學成分的研究(I)LJ].中草藥，1991,22(6) :246-248.]、鐵冬青酸異丙叉酮縮醇、芥子醛、丁香醛、3-こ酰齊墩果酸、硬脂酸、丁香苷、芥子醛葡萄糖苷、坡模醇酸、苦丁冬青苷H、3-0_ a-L-吡喃阿拉伯糖-3に19 a-ニ羥基齊墩果烷-12-烯-28-酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖酷、丁香脂素4' -0-^ -D-吡喃葡萄糖苷、咖啡酸4-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷、香草酸4-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷、^ -谷留醇、胡蘿卜苷、ニ丁香醚、木栓酮、3-羥基齊墩果烷、十九烷酸等。在救必應較多的活性成分中，尤以長梗冬青苷和紫丁香苷含量較高且活性突出，前者屬五環(huán)三萜，后者屬于苯丙醇苷類化合物。長梗冬青苷在劑量為40mg/kg時對飲食誘導的高脂血癥大鼠具有顯著地降低總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇和致動脈粥樣硬化指數(shù)，及升高密度脂蛋白膽固醇的作用；在劑量為75mg/kg時對Triton誘導的高脂血癥大鼠具有顯著降低總膽固醇和總脂的作用[Jahromi MAF, Gupta M, Manickam M, etal. Hypolipidemic Activity of Pedunculoside, A Constitunt of Ilex Doniana[J].Pharmaceutical Biology, 1999, 37 (I) :37-41.]。李超生等發(fā)現(xiàn)長梗冬青苷可明顯減輕犬冠脈前降支導致的心肌缺血程度和范圍(劑量為40mg/kg)，降低心肌耗氧指數(shù)(劑量為40mg/kg),并能明顯對抗氯化鋇(4mg/kg)誘導的大鼠抗心律失常(劑量為25_100mg/kg)，還可減少局灶性腦缺血大鼠的腦梗死面積(劑量為100mg/kg)，表明長梗冬青對腦缺血及心肌缺血具有一定的保護作用[李超生.具棲冬青苷的制備方法及應用[PLC07J63/00.200610017186. 7. 2008-08-01]。紫丁香苷采用試管法測定可使凝血時間縮短，有止血作用；在體試驗對狗股動脈切開，狗與兔肝葉部分切除，狗脾臟十字切ロ，兔耳及腸系膜靜脈切開，均能縮短止血時間，其止血機制部分與血管平滑肌收縮有夫，此在離體兔耳血管灌流實驗可獲證明[廣州市藥品檢驗所.中草藥救必應的實驗研究[J].新醫(yī)藥通訊，1970(2)23-26.]。臨床觀察證實，丁香苷注射液具有止血作用，且似對泌尿系出血療效較顯著；靜脈給藥，療效有明顯提高，且無副作用[龐小雄，呂華沖，羅集鵬.救必應中具棲冬青甙的分離與鑒定[J].廣東藥學院學報，1997，13(2).]。目前，尚未有從救必應中同時快速提取長梗冬青苷和紫丁香苷兩個成分的報道。已有的提取純化長梗冬青 苷和紫丁香苷的方法主要是傳統(tǒng)的醇提取、柱層析純化。傳統(tǒng)提純過程漫長且目標化合物損失較多，采用多次硅膠柱層析，操作步驟繁多且洗脫液以氯仿、丙酮、こ酸こ酯等毒性較大、價格較高的試劑為主。中國專利“具棲冬青苷的制備方法及應用”(公開號CN101033245)采用傳統(tǒng)醇提救必應方法，僅獲得長梗冬青苷且純度為98%，損失了大量的紫丁香苷。龐小雄等采用傳統(tǒng)柱層析方法分離得到長梗冬青苷，此法時間長，有機試劑用量大，產量小。紫丁香苷中國專利(CN101307079)采用苯和丙酮作為溶劑提取分離得到紫丁香苷，此法所用溶劑毒性較大。綜上所述，在提取分離長梗冬青苷和紫丁香苷的過程中，普遍存在長梗冬青苷和紫丁香的流失、純化過程漫長、溶劑殘留毒性大、成本較高的問題。因此，有必要尋找ー種既簡便又安全地提取純化長梗冬青苷和紫丁香苷的方法。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供ー種從中藥救必應中大量、快速獲得高純度長梗冬青苷和紫丁香苷的方法。所述長梗冬青苷的結構式如式I所示
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\〇H(式I)所述紫丁香苷的結構式如式II所示
權利要求
1.一種同時提取長梗冬青苷和紫丁香苷的方法，包括下述步驟 1)以體積分數(shù)50%-70%的こ醇水溶液為提取劑，對救必應進行提取，收集提取液； 2)將所述提取液通過大孔吸附樹脂進行柱層析分離，以こ醇-水為洗脫劑進行梯度洗脫，分別收集體積分數(shù)為10% -30%こ醇水溶液的洗脫組分和體積分數(shù)為40% -70%こ醇水溶液的洗脫組分； 3)將所述體積分數(shù)為10%-30%こ醇水溶液的洗脫組分濃縮、干燥，得到紫丁香苷粗品，將所述紫丁香苷粗品采用重結晶或柱層析進行純化，得到純化的紫丁香苷； 將所述體積分數(shù)為40% -70%こ醇水溶液的洗脫組分濃縮、干燥，得到長梗冬青苷粗品，將所述長梗冬青苷粗品采用重結晶法或柱層析法進行純化，得到純化的長梗冬青苷。
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在干步驟I)中所述提取的方法為冷浸提取、超聲提取或回流提取。
3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于所述提取的方法為回流提??；所述回流提取進行1-3次，每次提取的時間為30分鐘-90分鐘，毎次提取時，提取劑的用量與救必應的配比為(8-16)L Ikgo
4.根據(jù)權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于在步驟2)前還包括將步驟I)得到的提取液進行濃縮的步驟；所得濃縮液的濃度為0. 04-0. 16g生藥/mL。
5.根據(jù)權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在干步驟2)中所述大孔吸附樹脂選自下述任意一種型號的大孔吸附樹脂HP20、NKA-II、HPD-100A、SP825、DM301、D101、AB-8和 S-8。
6.根據(jù)權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在干步驟2)中所述梯度洗脫的條件如下先用體積分數(shù)為10% -30%こ醇水溶液進行洗脫，再用體積分數(shù)為40% -70%こ醇水溶液進行洗脫；每個梯度洗脫2-5倍柱體積。
7.根據(jù)權利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在干步驟3)中所述重結晶法中所用的溶劑為甲醇、こ醇、丙酮或它們的水溶液。
8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于步驟3)中所述重結晶的方法具體如下將紫丁香苷粗品或長梗冬青苷粗品溶于溶劑中，置于50°C _70°C水浴中使其達到過飽和溶液，再于室溫靜置5-60h，析出結晶，過濾，干燥，得到純化的紫丁香苷粗品或長梗冬青苷。
9.根據(jù)權利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在干步驟3)中所述柱層析選自下述至少ー種開放式ODS柱色譜法、Sephadex LH-20柱層析法、制備液相色譜法； 所述柱層析法中所用的洗脫劑為體積分數(shù)為10-70%的甲醇水溶液。
10.根據(jù)權利要求1-9中任一項所述的方法，其特征在于所述純化的紫丁香苷的純度大于90%，所述純化的長梗冬青苷的純度大于98%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種同時制備高純度紫丁香苷和長梗冬青苷的方法。該方法以救必應為原料，采用溶劑提取法、大孔樹脂吸附法進行提取分離，采用重結晶、開放ODS柱色譜法或Sephadex LH-20柱層析法、制備液相色譜法等方法制備高純度紫丁香苷和長梗冬青苷，其純度均在90％以上，工藝簡單易行，適宜于產業(yè)化生產。
文檔編號C07H1/08GK102643322SQ20121008842
公開日2012年8月22日 申請日期2012年3月29日 優(yōu)先權日2012年3月29日
發(fā)明者劉海萍, 吳曉毅, 孫文, 巢志茂, 王淳, 譚志高 申請人:中國中醫(yī)科學院中藥研究所