專利名稱：一種卡丹賓的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種卡丹賓的制備方法，特別是涉及一種應(yīng)用超臨界CO2萃取和高速逆流色譜制備卡丹賓的方法。
背景技術(shù)：
Anthocephaluschinensis (lam. ) A Rich, et ffalp.為菌草科植物大葉黃梁木，別名黃梁木，生于山谷溪旁或雜木林下，分布于廣東、廣西、 云南，以樹皮、葉入藥，具有清熱等功效，主治高熱不退、頭暈、頭痛、失眠、神經(jīng)性皮炎、牛皮癬。團(tuán)花樹皮含生物喊卡丹賓(cadambine), 3α -二氧卡丹賓(3a -dihvdrocadambine), 3 β - 二氧卡丹賓(3 β -dihydro-cadamb ine ), 3β -異二氫卡丹賓(3β -isodihydrocadarnbine)及四氫-β -咔啉(tetrahydro-β -carboline),還含以齊墩果酸(oleanolic acid)及團(tuán)花酸(cadambagenic acid)為式兀的阜式；葉含生物堿卡丹賓,金雞寧(cinchonine)及二氫金雞寧(di-hydrOcinchonine)?？ǖべe是團(tuán)花葉主要活性成分，為咔啉類生物堿?？ǖべe具有抗虐活性，能抑制惡性瘧原蟲的生長。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，尚未發(fā)現(xiàn)卡丹賓的工業(yè)提取純化方法的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種卡丹賓的制備方法，該方法產(chǎn)品收率高、含量高。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下
(1)取團(tuán)花葉原料細(xì)粉，加入堿性醇浸潤2-6小時(shí)，加入萃取釜中，采用超臨界CO2萃
?。?br> (2)萃取物用3%的鹽酸水溶液溶解，過濾，濾液用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；
(3)以正己烷-氯仿-甲醇-pH=8.5的氨水溶液為溶劑系統(tǒng),采用高速逆流色譜儀分離粗品中的卡丹賓，收集目標(biāo)組分，濃縮、干燥即得高含量卡丹賓。所述步驟(I)中堿性醇為90-99%甲醇，氨水調(diào)節(jié)pH8-10。所述步驟(I)中超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為40-55 °C ,萃取壓力為30-40MPa，C(V流量為2_5ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為2_4h，分離釜I溫度為40_45°C，壓力為7-9MPa，分離釜II溫度為30-40°C，壓力為4_6MPa。所述步驟(3)中正己烷-氯仿-甲醇_pH=8. 5的氨水溶液體積比為3_5 :7_9 :4_5 2-4，上相為流動相，下相為固定相。本發(fā)明的積極效果在于
1)采用超臨界CO2萃取，環(huán)保無污染，效率高，能耗較低；
2)采用高速逆流色譜分離，制備量大，樣品損失少，制備周期短，產(chǎn)品含量高。
下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :
取團(tuán)花葉原料細(xì)粉1kg，加300mlpH8的90%甲醇浸潤2小時(shí)，加入萃取釜中，進(jìn)行超臨界CO2萃取，萃取溫度為45°C，萃取壓力為30MPa，CO2流量為2ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為4h，分離釜I溫度為40°C，壓力為7MP a，分離釜II溫度為30°C，壓力為4MPa，收集解析萃取物，用3%的鹽酸水溶液溶解萃取物，過濾，濾液用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、pH=8. 5的氨水溶液，按體積比為3 7 4 :4混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)750rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2ml/min，收集卡丹賓流分，濃縮、干燥得卡丹賓191mg，經(jīng)HPLC檢測，含量為96. 3%。實(shí)施例2:
取團(tuán)花葉原料細(xì)粉1kg，加400mlpH9的95%甲醇浸潤6小時(shí)，加入萃取釜中，進(jìn)行超臨界CO2萃取，萃取溫度為40°C，萃取壓力為30MPa，CO2流量為3ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為3h，分離釜I溫度為40°C，壓力為7MPa，分離釜II溫度為35°C，壓力為5MPa，收集解析萃取物，用3%的鹽酸水溶液溶解萃取物，過濾，濾液用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、pH=8. 5的氨水溶液，按體積比為4 9 5 3混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)SOOrpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2. 5ml/min，收集卡丹賓流分，濃縮、干燥得卡丹賓230mg,經(jīng)HPLC檢測，含量為95. 4%。實(shí)施例3
取團(tuán)花葉原料細(xì)粉3kg，加1000mlpH8的99%甲醇浸潤6小時(shí)，加入萃取釜中，進(jìn)行超臨界CO2萃取，萃取溫度為50°C，萃取壓力為40MPa，CO2流量為4ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為3h，分離釜I溫度為45°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為30°C，壓力為4MPa，收集解析萃取物，用3%的鹽酸水溶液溶解萃取物，過濾，濾液用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、pH=8. 5的氨水溶液，按體積比為4 9 4 :4混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)700rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2ml/min，收集卡丹賓流分，濃縮、干燥得卡丹賓601mg，經(jīng)HPLC檢測，含量為95. 7%。實(shí)施例4:
取團(tuán)花葉原料細(xì)粉5kg，加I. 8LpH10的99%甲醇浸潤2小時(shí)，加入萃取釜中，進(jìn)行超臨界CO2萃取，萃取溫度為48°C，萃取壓力為32MPa，CO2流量為3. 5ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為4h，分離釜I溫度為45°C，壓力為7MPa，分離釜II溫度為35°C，壓力為4. 5MPa，收集解析萃取物，用3%的鹽酸水溶液溶解萃取物，過濾，濾液用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、PH=8. 5的氨水溶液，按體積比為5 8 5 4混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)900rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為2. 5ml/min，收集卡丹賓流分，濃縮、干燥得卡丹賓897mg，經(jīng)HPLC檢測，含量為98. 8%。 實(shí)施例5:
取團(tuán)花葉原料細(xì)粉10kg，加3LpH8的95%甲醇浸潤5小時(shí)，加入萃取釜中，進(jìn)行超臨界CO2萃取，萃取溫度為55°C，萃取壓力為40MPa，CO2流量為5ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為2h，分離釜I溫度為45°C，壓力為9MPa，分離釜II溫度為40°C，壓力為6MPa，收集解析萃取物，用3%的鹽酸水溶液溶解萃取物，過濾，濾液用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；取正己烷、氯仿、甲醇、pH=8. 5的氨水溶液，按體積比為5 9 5 :4混合，靜置，分出上下相，以下相為固定相，上相為流動相，開啟高速逆流色譜儀，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)850rpm，取上相溶解粗品注入色譜儀，控制流動相流速為3ml/min，收集卡丹賓流分，濃縮、干燥得卡丹賓 2.Ig,經(jīng)HPLC檢測，含量為96. 3%。
權(quán)利要求
1.ー種卡丹賓的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取團(tuán)花葉原料細(xì)粉，加入堿性醇浸潤2-6小吋，加入萃取釜中，采用超臨界CO2萃取； (2)萃取物用3%的鹽酸水溶液溶解，過濾，濾液用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品； (3)以正己烷-氯仿-甲醇-pH=8.5的氨水溶液為溶劑系統(tǒng),采用高速逆流色譜儀分離粗品中的卡丹賓，收集目標(biāo)組分，濃縮、干燥即得高含量卡丹賓。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種卡丹賓的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中堿性醇為90-99%甲醇，氨水調(diào)節(jié)pH8-10。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種卡丹賓的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為40-55°C，萃取壓カ為30-40MPa，C(V流量為2_5ml/g生藥/min，萃取時(shí)間為2-4h，分離釜I溫度為40-45°C，壓カ為7-9MPa，分離釜II溫度為30_40°C，壓カ為4_6MPa。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種卡丹賓的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中正己烷-氯仿-甲醇_pH=8. 5的氨水溶液體積比為3-5 :7-9 :4_5 :2_4，上相為流動相，下相為固定相。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種卡丹賓的制備方法。工藝步驟為取團(tuán)花葉原料細(xì)粉，加入堿性醇浸潤2-6小時(shí)，加入萃取釜中，采用超臨界CO2萃?。惠腿∥镉?%的鹽酸水溶液溶解，過濾，濾液用氯仿萃取，取氯仿層，回收氯仿干燥得到粗品；以正己烷-氯仿-甲醇-pH=8.5的氨水溶液為溶劑系統(tǒng)，采用高速逆流色譜儀分離粗品中的卡丹賓，收集目標(biāo)組分，濃縮、干燥即得高含量卡丹賓。本發(fā)明操作簡單、污染小，采用本發(fā)明制備的卡丹賓，產(chǎn)品純度高，易于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化放大。
文檔編號C07H1/08GK102659866SQ20121011933
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月23日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司