專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從埃及槲果中提取純化總甾體皂苷及其單體的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從埃及槲果中提取純化總留體皂苷及其單體的分離方法
背景技術(shù)：
埃及槲果為槲果科(Balanitaceae)植物埃及槲果aegyptica Del.種子。EP1287829-A1中將10-80份埃及槲果和10-90份云實(shí)焙烤，浸在圣羅勒葉提取液中，干燥等步驟，所得提取物可用于制作鎮(zhèn)靜藥、強(qiáng)心劑、治療睡眠、疼痛、頭痛、控制心悸和防止尿路感染，用作利尿劑，可減輕浮腫。其主要化學(xué)成分為留體皂苷類(lèi)化合物，包括槲果素4、槲果素5、槲果素7，藥理研究表明這些化合物均具有顯著的抗腫瘤作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從埃及槲果中提取純化總留體皂苷及其單體的分離方法，是一種簡(jiǎn)單快捷、易于控制、環(huán)境污染小的分離方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種從埃及槲果中提取純化總留體皂苷及其單體的分離方法，其特征在于包括以下步
驟
(1)將埃及槲果種子烘干粉碎，將粉末與助溶劑按質(zhì)量體積比1:2放入超臨界CO2萃取器中，以無(wú)水乙醇為夾帶劑，調(diào)節(jié)萃取釜參數(shù)，使萃取釜溫度為45-65°C，壓力為30-38MPa，CO2流量控制在20-25kg/h，萃取時(shí)間為3-4h ;分離溫度為40-50°C，分離壓力為6_12MPa，收集總留體皂苷萃取物；
(2)萃取物加水稀釋后，通過(guò)大孔樹(shù)脂柱，分別用蒸餾水和20%乙醇洗脫后，用40-70%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏，低溫干燥得埃及槲果總留體皂苷；
(3)將埃及槲果總留體皂苷經(jīng)高速逆流色譜分離純化，最后采用重結(jié)晶的方法精制，得到槲果素4、槲果素5、槲果素7單體化合物。所述步驟(I)中助溶劑為加有表面活性劑的助溶劑，所述表面活性劑為吐溫、磺化琥珀酸二辛酯鈉、十二烷基磺酸鈉、十六烷基三甲基氯化銨、聚氧乙烯脂肪酸醚中的一種或幾種的混合物，助溶劑中的表面活性劑濃度為0. 03-0. 06mol/L。所述步驟(I)中的助溶劑中的溶劑由乙醇、正丁醇、水組成，體積比為6:8:3。所述步驟(3)中的高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)選用正己烷-正丁醇-甲醇-水，體積比為 5:3:4:3。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明采用超臨界二氧化碳萃取，高效快捷、易于控制、產(chǎn)品純度高、環(huán)境污染??；本發(fā)明將表面活性劑加入到CO2中，形成超臨界CO2反相微乳體系，提高了超臨界CO2對(duì)留體皂苷成分的萃取率，可直接獲得較高純度的埃及槲果留體皂苷萃取物；另外采用高速逆流色譜分離純化留體皂苷萃取物得到單體化合物，損失小、制備量大。
下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :
稱(chēng)取5kg埃及槲果種子粉碎，將粉末放入萃取罐中，配制0. 03mol/L的吐溫-乙醇-正丁醇-水溶液為助溶劑，泵入IOL于萃取器中，在溫度45°C，壓力30MPa，C02流量為22kg/h條件下進(jìn)行萃取，萃取時(shí)間為3h，然后采用二級(jí)分離，分離釜I溫度為42V。壓力為IlMPa ；分離釜II溫度為40°C。壓力為6MPa，收集萃取物。將萃取物加水稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水洗至無(wú)醇味，再依次用20%乙醇和60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓濃縮干燥，得到埃及槲果總留體皂苷，總留體皂苷的純度為65. 3%。將埃及槲果總留體皂苷進(jìn)行高速逆流色譜分離純化，條件為溶劑體系正己烷-正丁醇-甲醇-水，體積比為5:3:4:3，轉(zhuǎn)速為850rpm，流速為2. 5ml/min,以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵 入色譜儀的螺旋管，待充滿后開(kāi)啟速度控制器，泵入流動(dòng)相，當(dāng)兩相平衡后將樣品溶于流動(dòng)相中，注入分離管路，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜圖收集色譜峰組分，分離得到三個(gè)流分，將各流分分別濃縮、冷凍干燥，用60%乙醇重結(jié)晶得到高純度的槲果素4、槲果素5、槲果素7。實(shí)施例2:
稱(chēng)取5kg埃及槲果種子粉碎，將粉末放入萃取罐中，配制0. 05mol/L的磺化琥珀酸二辛酯鈉-乙醇-正丁醇-水溶液為助溶劑，泵入IOL于萃取器中，在溫度55°C，壓力32MPa，CO2流量為22kg/h條件下進(jìn)行萃取,萃取時(shí)間為4h,然后采用二級(jí)分離,分離爸I溫度為49 V。壓力為12MPa;分離釜II溫度為42°C。壓力為8MPa，收集萃取物。將萃取物加水稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水洗至無(wú)醇味，再依次用20%乙醇和65%乙醇洗脫，收集65%乙醇洗脫液，減壓濃縮干燥，得到埃及槲果總留體皂苷，總留體皂苷的純度為62. 3%。將埃及槲果總留體皂苷進(jìn)行高速逆流色譜分離純化，條件為溶劑體系正己烷-正丁醇-甲醇-水，體積比為5:3:4:3，轉(zhuǎn)速為850rpm，流速為2. 5ml/min,以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵入色譜儀的螺旋管，待充滿后開(kāi)啟速度控制器，泵入流動(dòng)相，當(dāng)兩相平衡后將樣品溶于流動(dòng)相中，注入分離管路，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜圖收集色譜峰組分，分離得到三個(gè)流分，將各流分分別濃縮、冷凍干燥，用65%乙醇重結(jié)晶得到高純度的槲果素4、槲果素5、槲果素7。實(shí)施例3:
稱(chēng)取5kg埃及槲果種子粉碎,將粉末放入萃取罐中，配制0. 06mol/L的十二燒基磺酸鈉-乙醇-正丁醇-水溶液為助溶劑，泵入IOL于萃取器中，在溫度65°C，壓力37MPa，CO2流量為22kg/h條件下進(jìn)行萃取,萃取時(shí)間為4h,然后采用二級(jí)分離,分離爸I溫度為50°C。壓力為IOMPa ;分離釜II溫度為45°C。壓力為7MPa，收集萃取物。將萃取物加水稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水洗至無(wú)醇味，再依次用20%乙醇和70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓濃縮干燥，得到埃及槲果總留體皂苷，總留體皂苷的純度為63. 4%。將埃及槲果總留體皂苷進(jìn)行高速逆流色譜分離純化，條件為溶劑體系正己烷-正丁醇-甲醇-水，體積比為5:3:4:3，轉(zhuǎn)速為850rpm，流速為2. 5ml/min,以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵入色譜儀的螺旋管，待充滿后開(kāi)啟速度控制器，泵入流動(dòng)相，當(dāng)兩相平衡后將樣品溶于流動(dòng)相中，注入分離管路，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜圖收集色譜峰組分，分離得到三個(gè)流分，將各流分分別濃縮、冷凍干燥，用80%乙醇重結(jié)晶得到高純度的槲果素4、槲果素5、槲果素7。實(shí)施例4:
稱(chēng)取5kg埃及槲果種子粉碎，將粉末放入萃取罐 中，配制0. 04mol/L的聚氧乙烯脂肪酸醚-乙醇-正丁醇-水溶液為助溶劑，泵入IOL于萃取器中，在溫度50°C，壓力35MPa，CO2流量為22kg/h條件下進(jìn)行萃取,萃取時(shí)間為3. 5h,然后采用二級(jí)分離,分離爸I溫度為47°C。壓力為12MPa;分離釜II溫度為41°C。壓力為9MPa，收集萃取物。將萃取物加水稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水洗至無(wú)醇味，再依次用20%乙醇和50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓濃縮干燥，得到埃及槲果總留體皂苷，總留體皂苷的純度為64. 1%。將埃及槲果總留體皂苷進(jìn)行高速逆流色譜分離純化，條件為溶劑體系正己烷-正丁醇-甲醇-水，體積比為5:3:4:3，轉(zhuǎn)速為850rpm，流速為2. 5ml/min,以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵入色譜儀的螺旋管，待充滿后開(kāi)啟速度控制器，泵入流動(dòng)相，當(dāng)兩相平衡后將樣品溶于流動(dòng)相中，注入分離管路，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜圖收集色譜峰組分，分離得到三個(gè)流分，將各流分分別濃縮、冷凍干燥，用70%乙醇重結(jié)晶得到高純度的槲果素4、槲果素5、槲果素7。實(shí)施例5
稱(chēng)取5kg埃及槲果種子粉碎，將粉末放入萃取罐中，配制0. 05mol/L的十六烷基三甲基氯化銨-乙醇-正丁醇-水溶液為助溶劑，泵入IOL于萃取器中，在溫度48°C，壓力38MPa，CO2流量為22kg/h條件下進(jìn)行萃取,萃取時(shí)間為4h,然后采用二級(jí)分離，分離爸I溫度為46°C。壓力為IlMPa ;分離釜II溫度為42°C。壓力為7MPa，收集萃取物。將萃取物加水稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，先用蒸餾水洗至無(wú)醇味，再依次用20%乙醇和40%乙醇洗脫，收集40%乙醇洗脫液，減壓濃縮干燥，得到埃及槲果總留體皂苷，總留體皂苷的純度為63. 7%。將埃及槲果總留體皂苷進(jìn)行高速逆流色譜分離純化，條件為溶劑體系正己烷-正丁醇-甲醇-/K，體積比為5:3:4: 3，轉(zhuǎn)速為850rpm，流速為2. 5ml/min,以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵入色譜儀的螺旋管，待充滿后開(kāi)啟速度控制器，泵入流動(dòng)相，當(dāng)兩相平衡后將樣品溶于流動(dòng)相中，注入分離管路，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜圖收集色譜峰組分，分離得到三個(gè)流分，將各流分分別濃縮、冷凍干燥，用80%乙醇重結(jié)晶得到高純度的槲果素4、槲果素5、槲果素7。
權(quán)利要求
1.一種從埃及槲果中提取純化總留體皂苷及其單體的分離方法，其特征在于包括以下步驟 (1)將埃及槲果種子烘干粉碎，將粉末與助溶劑按質(zhì)量體積比1:2放入超臨界CO2萃取器中，以無(wú)水乙醇為夾帶劑，調(diào)節(jié)萃取釜參數(shù)，使萃取釜溫度為45-65°C，壓力為30-38MPa，CO2流量控制在20-25kg/h，萃取時(shí)間為3-4h ;分離溫度為40-50°C，分離壓力為6_12MPa，收集總留體皂苷萃取物； (2)萃取物加水稀釋后，通過(guò)大孔樹(shù)脂柱，分別用蒸餾水和20%乙醇洗脫后，用40-70%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏，低溫干燥得埃及槲果總留體皂苷； (3)將埃及槲果總留體皂苷經(jīng)高速逆流色譜分離純化，最后采用重結(jié)晶的方法精制，得到槲果素4、槲果素5、槲果素7單體化合物。
2.如權(quán)利要求I所述的一種從埃及槲果中提取純化總留體皂苷及其單體的分離方法，其特征在于所述步驟(I)中助溶劑為加有表面活性劑的助溶劑，所述表面活性劑為吐溫、磺化琥珀酸二辛酯鈉、十二烷基磺酸鈉、十六烷基三甲基氯化銨、聚氧乙烯脂肪酸醚中的一種或幾種的混合物，助溶劑中的表面活性劑濃度為O. 03-0. 06mol/L。
3.如權(quán)利要求I所述的一種從埃及槲果中提取純化總留體皂苷及其單體的分離方法，其特征在于所述步驟(I)中的助溶劑中的溶劑由乙醇、正丁醇、水組成，體積比為6:8:3。
4.如權(quán)利要求I所述的一種從埃及槲果中提取純化總留體皂苷及其單體的分離方法，其特征在于所述步驟(3)中的高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)選用正己烷-正丁醇-甲醇-水，體積比為5:3:4:30
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種從埃及槲果中提取純化總甾體皂苷及其單體的分離方法，該方法將埃及槲果種子烘干粉碎，采用超臨界CO2萃取，收集總甾體皂苷萃取物，加水稀釋后，通過(guò)大孔樹(shù)脂柱，分別用蒸餾水和20%乙醇洗脫后，用40-70%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏，低溫干燥得埃及槲果總甾體皂苷，再經(jīng)高速逆流色譜分離純化得到各單體化合物。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單快捷、易于控制、環(huán)境污染小、易于規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J71/00GK102659906SQ20121012085
公開(kāi)日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月24日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司