專利名稱：一種快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物中分離制備高純度藥效成分的方法，尤其涉及一種快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法。
背景技術(shù)：
大黃作為我國著名的傳統(tǒng)中藥材，其藥用記載始見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品，具有“瀉下通便，破積滯”之功效。在傳統(tǒng)的中醫(yī)藥應(yīng)用中，大黃植物的藥用范圍非常單一，主要偏重其瀉下的功效?，F(xiàn)代研究證明了大黃瀉下功效作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)成分是蒽醌類成分。因此，蒽醌類化合物被認(rèn)定為是大黃藥材的傳統(tǒng)成藥化合物，是世界各國用于評(píng)價(jià)大黃藥材品質(zhì)優(yōu)劣及其相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的主要指標(biāo)。(許義杵，大黃的應(yīng)用及其機(jī)理研究進(jìn)展，中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，1992，12(9) : 421-422。) 然而，多年來對(duì)于大黃植物的研究與開發(fā)利用更多的集中在了對(duì)于藥典收載的“正品”大黃及其所含的蒽醌類成分和其相應(yīng)的藥效活性功能上；但是藥典收載之外的大黃屬的其它40余種“非正品”大黃并未得到充分的重視和合理的利用?！胺钦贰贝簏S由于不含或僅含痕量的蒽醌類成分，因此其瀉下藥效作用很弱或全無，但是這些資源豐富的“非正品”大黃在民間醫(yī)療中通常與“正品”大黃混淆使用，并且在藥材市場中摻雜或冒充“正品”大黃混亂銷售的現(xiàn)象十分嚴(yán)重(李秀才，大黃的研究進(jìn)展，中國藥學(xué)雜志，1998,33(10) :581-584。)近幾年研究新發(fā)現(xiàn)，“非正品”大黃中的主含成分——土大黃苷和脫氧土大黃苷，具有多種顯著的藥效活性，例如降血糖(Li JM,脫氧土大黃苷抑制腸道和腎臟的葡萄糖攝取在體外和體內(nèi)研究，藥理實(shí)驗(yàn)療法(美國)，2007，320:38-46。);降血脂(Tadashi K,從大黃植物中發(fā)現(xiàn)的天然脂多糖抑制劑，生物有機(jī)與藥物化學(xué)(美國)，2001，9:1887-1893。)；抗腫瘤(Lee SH,脫氧土大黃苷對(duì)人白血病HL-60細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)，植物藥(德國)，2002. 68: 123-127。)等。由于脫氧土大黃苷土大黃苷和相關(guān)藥理臨床研究及其制劑產(chǎn)品開發(fā)的逐漸興起，使得對(duì)于高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的需求迅速增大，因此，研究確定從大黃植物中快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。經(jīng)檢索發(fā)現(xiàn)，公開號(hào)為CN101244129A的中國專利公開了應(yīng)用聚酰胺樹脂分離制備脫氧土大黃苷的方法。又如，公開號(hào)為CN101475613A的中國專利公開了應(yīng)用大孔吸附樹脂分離制備土大黃苷的方法。但是，由于無法避免的樹脂殘留物、樹脂原料安全性隱患等問題，國家藥監(jiān)局已經(jīng)對(duì)應(yīng)用于保健食品的利用吸附樹脂分離純化的生產(chǎn)工藝作出了相應(yīng)的限制和規(guī)定(國食藥監(jiān)注[2005] 202號(hào))。因此，上述專利方法和文獻(xiàn)中的傳統(tǒng)柱層析等方法在醫(yī)藥及保健食品工業(yè)中的實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用方面具有一定的局限性；并且，現(xiàn)有的專利和文獻(xiàn)方法還存在著步驟繁瑣、效率較低、操作復(fù)雜、產(chǎn)品純度不高等諸多缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡單、易于工業(yè)化生產(chǎn)的快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法。為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法，包括以下步驟
⑴取野生或栽培大黃植物的干燥根或根莖經(jīng)切割或粉碎后，得到提取原料；
⑵按I I 30的料液質(zhì)量體積比向所述提取原料中加入質(zhì)量濃度為40°/Γ98%的乙醇溶液，并置于1(T90°C溫度下提取O. 5 24小時(shí)，提取次數(shù)為f 4次，收集合并提取液得到粗提液；所述粗提液經(jīng)減壓濃縮干燥或噴霧干燥至恒重，得到提取物；
⑶將甲醇、水、正丁醇、氯仿四種溶劑按廣2. 7 Γ4. 3 0. 5^1. 5 Γ3. 8的體積比混合并充分振搖后，在室溫下靜置至混合溶液自然分層，然后分別收集上相溶劑和下相溶劑；所述上相溶劑和下相溶劑分別超聲5 20分鐘，分別得到上相溶劑作為固定相，下相溶劑作為流動(dòng)相；
⑷以5(T200mL所述流動(dòng)相溶解O. 5^5g所述提取物，得到進(jìn)樣溶液；
(5)向高速逆流色譜儀器的分離管中泵入所述固定相，同時(shí)使所述分離管按正向轉(zhuǎn)動(dòng)并保持轉(zhuǎn)速為35(T550 rpm，至所述分離管出口端有所述固定相溢出時(shí)，替換成用所述流動(dòng)相以l(T30mL/min的流速泵入所述分離管，至所述分離管出口端有所述流動(dòng)相溢出時(shí)，將所述進(jìn)樣溶液注入所述高速逆流色譜儀器的進(jìn)樣圈中，同時(shí)保持所述流動(dòng)相泵入的流速持續(xù)不變；
(6)當(dāng)所述高速逆流色譜儀器按所述步驟(5)所述方法運(yùn)轉(zhuǎn)到7(Tl00min時(shí)，收集此時(shí)間段的流出液A ;將該流出液A按常規(guī)方法干燥至恒重，即得脫氧土大黃苷；
⑴當(dāng)所述高速逆流色譜儀器按所述步驟(5)所述方法運(yùn)轉(zhuǎn)到12(T320min時(shí)，替換成使所述分離管以相同轉(zhuǎn)速按反向轉(zhuǎn)動(dòng)，并保持所述流動(dòng)相泵入的流速持續(xù)不變；
⑶當(dāng)所述高速逆流色譜儀器按所述步驟(7)所述方法運(yùn)轉(zhuǎn)到40(T450min時(shí)，收集此時(shí)間段的流出液B ;將該流出液B按常規(guī)方法干燥至恒重，即得土大黃苷。所述步驟⑴中大黃是指屬于“非正品”大黃的天山大黃、波葉大黃、河套大黃、拉薩大黃、華北大黃、圓葉大黃、藏邊大黃中的一種。所述步驟⑴中干燥根或根莖采用切割方式獲得的提取原料為2 5 mm的切片。所述步驟⑴中干燥根或根莖采用破碎方式獲得的提取原料為1(Γ80目的粉末。所述步驟⑵中減壓濃縮干燥的條件是指溫度為3(T50°C、抽真空到負(fù)壓為O. 01 O. IMPa0本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)
I、本發(fā)明應(yīng)用高速逆流色譜儀器從大黃中分離制備的兩種物質(zhì)分別經(jīng)全波長掃描分析(Agilent DAD檢測器，20(T400nm)，結(jié)果表明，所得兩種物質(zhì)均具有二苯乙烯骨架結(jié)構(gòu)的特征性紫外吸收峰，脫氧土大黃苷的最大吸收波長為320 nm和217 nm (參見圖I) ;土大黃苷的最大吸收波長為323 nm和221 nm (參見圖2)。同時(shí)，本發(fā)明所得兩種物質(zhì)分別經(jīng)1H-NMR and 13C-NMR (INOVA 400MHz核磁共振儀)進(jìn)一步分析鑒定表明，這兩種物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)明確(參見表I、表2)。表I脫氧土大黃苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)核磁共振數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.一種快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法，包括以下步驟 ⑴取野生或栽培大黃植物的干燥根或根莖經(jīng)切割或粉碎后，得到提取原料； ⑵按I I 30的料液質(zhì)量體積比向所述提取原料中加入質(zhì)量濃度為409^98%的乙醇溶液，并置于1(T90°C溫度下提取0. 5^24小時(shí)，提取次數(shù)為f 4次，收集合并提取液得到粗提液；所述粗提液經(jīng)減壓濃縮干燥或噴霧干燥至恒重，得到提取物； ⑶將甲醇、水、正丁醇、氯仿四種溶劑按廣2. 7 T4. 3 0. 5^1. 5 r3. 8的體積比混合并充分振搖后，在室溫下靜置至混合溶液自然分層，然后分別收集上相溶劑和下相溶劑；所述上相溶劑和下相溶劑分別超聲5 20分鐘，分別得到上相溶劑作為固定相，下相溶劑作為流動(dòng)相； ⑷以5(T200mL所述流動(dòng)相溶解0. 5^5g所述提取物，得到進(jìn)樣溶液； (5)向高速逆流色譜儀器的分離管中泵入所述固定相，同時(shí)使所述分離管按正向轉(zhuǎn)動(dòng)并保持轉(zhuǎn)速為35(T550 rpm，至所述分離管出口端有所述固定相溢出時(shí)，替換成用所述流動(dòng)相以l(T30mL/min的流速泵入所述分離管，至所述分離管出口端有所述流動(dòng)相溢出時(shí)，將所述進(jìn)樣溶液注入所述高速逆流色譜儀器的進(jìn)樣圈中，同時(shí)保持所述流動(dòng)相泵入的流速持續(xù)不變； (6)當(dāng)所述高速逆流色譜儀器按所述步驟(5)所述方法運(yùn)轉(zhuǎn)到7(Tl00min時(shí)，收集此時(shí)間段的流出液A ;將該流出液A按常規(guī)方法干燥至恒重，即得脫氧土大黃苷； (7)當(dāng)所述高速逆流色譜儀器按所述步驟(5)所述方法運(yùn)轉(zhuǎn)到12(T320min時(shí)，替換成使所述分離管以相同轉(zhuǎn)速按反向轉(zhuǎn)動(dòng)，并保持所述流動(dòng)相泵入的流速持續(xù)不變； ⑶當(dāng)所述高速逆流色譜儀器按所述步驟(7)所述方法運(yùn)轉(zhuǎn)到40(T450min時(shí)，收集此時(shí)間段的流出液B ;將該流出液B按常規(guī)方法干燥至恒重，即得土大黃苷。
2.如權(quán)利要求I所述的一種快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法，其特征在于所述步驟⑴中大黃是指屬于“非正品”大黃的天山大黃、波葉大黃、河套大黃、拉薩大黃、華北大黃、圓葉大黃、藏邊大黃中的一種。
3.如權(quán)利要求I所述的一種快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法，其特征在于所述步驟⑴中干燥根或根莖采用切割方式獲得的提取原料為2 5 mm的切片。
4.如權(quán)利要求I所述的一種快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法，其特征在于所述步驟⑴中干燥根或根莖采用破碎方式獲得的提取原料為1(T80目的粉末。
5.如權(quán)利要求I所述的一種快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法，其特征在于所述步驟⑵中減壓濃縮干燥的條件是指溫度為3(T50°C、抽真空到負(fù)壓為0.01 0. IMPa0
全文摘要
本發(fā)明涉及一種快速分離制備高純度脫氧土大黃苷和土大黃苷的方法，該方法包括以下步驟⑴取野生或栽培大黃植物的干燥根或根莖經(jīng)切割或粉碎后，得到提取原料；⑵對(duì)提取原料進(jìn)行醇提、干燥得到提取物；⑶將甲醇、水、正丁醇、氯仿四種溶劑混合經(jīng)振搖、靜置分層，收集上相溶劑和下相溶劑；上相溶劑和下相溶劑經(jīng)超聲得到固定相、流動(dòng)相；⑷在流動(dòng)相中溶解提取物，得到進(jìn)樣溶液；⑸向高速逆流色譜儀器的分離管中依次泵入固定相、流動(dòng)相，并將進(jìn)樣溶液注入高速逆流色譜儀器的進(jìn)樣圈中；⑹收集70~100min時(shí)間段的流出液A，并將其干燥即得脫氧土大黃苷；⑺分離管反向轉(zhuǎn)動(dòng)；⑻收集400~450min時(shí)間段的流出液B，并將其干燥即得土大黃苷。本發(fā)明操作簡單、易于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H15/203GK102702283SQ20121013997
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月8日
發(fā)明者王小艷, 袁木榮 申請(qǐng)人:青海伊納維康生物科技有限公司