專利名稱：一種純化五味子醇甲的新方法
技術領域：
本發(fā)明屬于天然有機化學領域，涉及一種五味子醇甲的純化方法，特別是涉及一種利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法。
背景技術：
五味子，俗稱山花椒、秤砣子、藥五味子、面藤、五梅子等，唐等《新修本草》載“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。占醫(yī)書稱它室藉、玄及、會及，最早列于神農本草經上品，中藥功效在于滋補強壯之力，藥用價值極高。本發(fā)明采用俗稱北五味子的干燥成熟果實為原料，五味子含有豐富的有機酸、維生素、類黃酮、植物固醇及有強效復原作用的木脂素(例如五味子醇甲、五味子乙素或五味子脂素)。主要提取的五味子醇甲屬于木脂素成分中的聯(lián)苯環(huán)辛烯類，是一類脂溶性小分子化合物，溶于氯仿、乙醚、苯、丙酮、乙醇等有機溶劑，難溶于水。五味子醇甲是一種對人類健康有顯著保健作用的天然活性物質，已引起國際社會的普遍關注。經科學研究及臨床應用證明，五味子醇甲具有保肝及再生肝臟組織、保護及增強心臟機能、養(yǎng)陰固精，男女皆宜、增進智能健全；增強體能耐力；抗防自由基侵害、延緩老化過程，滋補和增強腎臟機能，人體測試結果顯示，五味子醇甲對于患有因病毒所引起之慢性肝炎者(包括A型、B型、C型、D型和E型)尤其有效。五味子傳統(tǒng)提取方法有醇提取和氯仿提取，提取時間長，純度較低；近年來利用超臨界提取的專利報道較多，但設備要求較高，不利于大規(guī)模生產。本發(fā)明采用了微波逆流提取設備，縮短了提取時間，又采用了適合大生產操作的大孔樹脂分離純化和柱層析進一步純化，產品純度大大提高。

發(fā)明內容
本發(fā)明采用微波提取，以乙醇為溶劑，除掉部分脂肪油，大大降低了提取時間，提高了生產效率，方法簡單。大孔樹脂再生方便迅速，適合大生產，且成本大大降低，水洗脫除去大部分色素和雜質；一方面通過除油除雜，另一方面大孔樹脂和硅膠柱層析結合，分離和純化效果好，后期又采用重結晶，所以本發(fā)明所得產品純度高，顯著提高有效成分含量，克服了常規(guī)提取方法純度低、時間長等缺點。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是一種利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其步驟如下(I)微波逆流提取五味子粉碎至40-60目，加入60-75%乙醇溶液，在400 600W，時間10 30min，8 12倍料液比條件下微波逆流提取，正向進料.反向進水.物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動，提取液加石油醚分層，除脂肪油；(2)大孔樹脂吸附回收乙醇至無醇后，將所得溶液上大孔樹脂吸附，型號為DA201、DlOU HPD300、AB-8樹脂中的種，樹脂柱的高徑比為8 1-15 I ；⑶純水洗脫在常溫常壓下，以lBV/h流速，先用蒸餾水洗脫，洗脫體積為3-5 BV，洗掉五味子水溶液中的色素、鞣質、無機鹽類等水溶性雜質；(4)乙醇洗脫再用40% -95%的乙醇溶液在l-3BV/h流速、洗脫體積為6-8BV下進行洗脫，洗脫液用薄層層析跟蹤監(jiān)測(以五味子醇甲為對照品對照)；(5)得五味子醇甲粗提物收集乙醇洗脫液濃縮，回收乙醇，減壓干燥，得到含量為65%以上五味子醇甲半成 品粗粉；(6)硅膠柱層析將所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過60-80目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱200-300目硅膠柱層析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95 85 2比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液；(7)重結晶將所收集的五味子醇甲洗脫液濃縮，噴粉干燥得粉末。加適量醋酸乙酯完全溶解后加熱，邊震蕩邊滴加石油醚至渾濁，放置過夜即可得到五味子醇甲晶體，再反復重結晶兩次，得到高純度五味子醇甲，其含量在98 %以上。
具體實施例方式實施例I :一種利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其步驟如下(I)取500g五味子粉碎至40目，加入60%乙醇溶液，在400W，時間10min，8倍料
液比條件下微波逆流提取，正向進料.反向進水.物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。提取液加石油醚分層，除脂肪油；(2)回收乙醇，將所得溶液上大孔樹脂吸附，型號為DA201樹脂，樹脂柱的高徑比為 8 : I ;(3)在常溫常壓下，以lBV/h流速，先用蒸餾水洗脫，洗脫體積為3BV ；(4)再用40%、50%、60%、70%、85%、95%的乙醇溶液在18￥/11流速、洗脫體積為6BV下進行洗脫。以五味子醇甲對照品為對照，洗脫液用薄層層析跟蹤監(jiān)測，收集60%乙醇部分的洗脫液。(5)將乙醇洗脫液濃縮，回收乙醇，減壓干燥，得到含量為65. 47%五味子醇甲半成品4. 17g ；(6)將所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過60目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱200目硅膠柱層析，并以石油醚、乙酸乙酯以95 2、90 I比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液；(7)將所收集的五味子醇甲洗脫液濃縮，噴粉干燥得粉末，加適量醋酸乙酯完全溶解后加熱，邊震蕩邊滴加石油醚至渾濁，放置過夜即可得到五味子醇甲晶體，再反復重結晶兩次，得到高純度五味子醇甲2. 76g，其含量在98. 5%。實施案例2 (I)取500g五味子粉碎至50目，加入70%乙醇溶液，在500W，時間20min，10倍
料液比條件下微波逆流提取，正向進料.反向進水.物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。提取液加石油醚分層，除脂肪油；(2)回收乙醇，將所得溶液上大孔樹脂吸附，型號為DlOl樹脂，樹脂柱的高徑比為
10 I ；(3)在常溫常壓下，以lBV/h流速，先用蒸餾水洗脫，洗脫體積為4BV ；(4)再用40%、50%、60%、70%、85%、95%的乙醇溶液在28￥/11流速、洗脫體積為 7BV下進行洗脫。洗脫液用薄層層析跟蹤監(jiān)測(以五味子醇甲為對照品對照)；(5)收集乙醇洗脫液濃縮，回收乙醇，減壓干燥，得到含量為65. 86%五味子醇甲半成品4. 15g ;(6)將所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過70目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱300目硅膠柱層析，并以石油醚、乙酸乙酯以90 2、85 I比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液；(7)將所收集的五味子醇甲洗脫液濃縮，噴粉干燥得粉末。加適量醋酸乙酯完全溶解后加熱，邊震蕩邊滴加石油醚至渾濁，放置過夜即可得到五味子醇甲晶體，再反復重結晶兩次，得到高純度五味子醇甲2. 79g，其含量為98%。實施案例3 (I)取500g五味子粉碎至60目，加入75%乙醇溶液，在500W，時間30min，12倍
料液比條件下微波逆流提取，正向進料.反向進水.物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。提取液加石油醚分層，除脂肪油；(2)回收乙醇，將所得溶液上大孔樹脂吸附，型號為AB-8樹脂，樹脂柱的高徑比為10 I ；(3)在常溫常壓下，以lBV/h流速，先用蒸餾水洗脫，洗脫體積為4BV ；(4)再用40%、50%、60%、70%、85%、95%的乙醇溶液在28￥/11流速、洗脫體積為7BV下進行洗脫。洗脫液用薄層層析跟蹤監(jiān)測(以五味子醇甲為對照品對照)；(5)收集乙醇洗脫液濃縮，回收乙醇，減壓干燥，得到含量為66%五味子醇甲半成品 4. 21g ；(6)將所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過60目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱200目硅膠柱層析，并以氯仿、甲醇以95 2,90 I比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液；(7)將所收集的五味子醇甲洗脫液濃縮，噴粉干燥得粉末，加適量醋酸乙酯完全溶解后加熱，邊震蕩邊滴加石油醚至渾濁，放置過夜即可得到五味子醇甲晶體，再反復重結晶兩次，得到高純度五味子醇甲2. 82g，其含量在98. 6%。實施案例4 (I)取500g五味子粉碎至50目，加入75%乙醇溶液，在600W，時間20min，10倍
料液比條件下微波逆流提取，正向進料.反向進水.物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。提取液加石油醚分層，除脂肪油；
(2)回收乙醇，將所得溶液上大孔樹脂吸附，型號為HPD300樹脂，樹脂柱的高徑比為 15 : I ;(3)在常溫常壓下，以lBV/h流速，先用蒸餾水洗脫，洗脫體積為5BV ；(4)再用40%、50%、60%、70%、85%、95%的乙醇溶液在38￥/11流速、洗脫體積為8BV下進行洗脫。洗脫液用薄層層析跟蹤監(jiān)測(以五味子醇甲為對照品對照)；(5)收集乙醇洗脫液濃縮，回收乙醇，減壓干燥，得到含量為65. 2%的五味子醇甲半成品4. 13g ；(6)將所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過80目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱300目硅膠柱層析，并以氯仿、甲醇以90 2、85 I的比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液；(7)將所收集的五味子醇甲洗脫液濃縮，噴粉干燥得粉末。加適量醋酸乙酯完全溶解后加熱，邊震蕩邊滴加石油醚至渾濁，放置過夜即可得到五味子醇甲晶體，再反復重結晶兩次，得到高純度五味子醇甲2. 74g，其含量在98. 09%。權利要求
1.一種利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其步驟如下 (1)微波逆流提取 五味子粉碎至40-60目，加入60-75%乙醇溶液，在400 600W，時間10 30min，8 12倍料液比條件下微波逆流提取，正向進料，反向進水.物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。提取液加石油醚分層，除脂肪油。
(2)大孔樹脂吸附 回收乙醇至無醇后，將所得溶液上大孔樹脂吸附，型號為DA20UDlOUHPD300、AB-8樹脂中的一種，樹脂柱的高徑比為8 :1-15: I。
(3)純水洗脫 在常溫常壓下，以lBV/h流速，先用蒸餾水洗脫，洗脫體積為3-5BV，洗掉五味子水溶液中的色素、鞣質、無機鹽類等水溶性雜質； (4)乙醇洗脫 再用40% -95%的乙醇溶液在l_3BV/h流速、洗脫體積為6-8BV下進行洗脫，洗脫液用薄層層析跟蹤監(jiān)測(以五味子醇甲為對照品對照)； (5)得五味子醇甲粗提物 收集乙醇洗脫液濃縮，回收乙醇，減壓干燥，得到含量為65%以上五味子醇甲半成品粗粉； (6)硅膠柱層析 將所得五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過60-80目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱200-300目硅膠柱層析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以98 85 2比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集五味子醇甲各階段洗脫液； (7)重結晶 將所收集的五味子醇甲洗脫液濃縮，噴粉干燥得粉末。加適量醋酸乙酯完全溶解后加熱，邊震蕩邊滴加石油醚至渾濁，放置過夜即可得到五味子醇甲晶體，再反復重結品兩次，得到高純度五味子醇甲，其含量在98 %以上。
2.根據(jù)權利要求I所述的利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是在所屬的步驟(I)中，五味子粉碎后過40 60目篩，乙醇濃度為60-75%，
3.根據(jù)權利要求2所述利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是在所屬的步驟(I)中，微波處理功率400 600W，時間10 30min，8 12倍料液比。
4.根據(jù)權利要求3所述的利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是在所屬的步驟(2)中，大孔樹脂型號為DA201、D101、HPD300、AB-8樹脂中的種，樹脂柱的高徑比為8 1-15 I。
5.根據(jù)權利要求4所述的利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是在所屬的步驟(3)中，蒸餾水洗脫流速為lBV/h，洗脫體積為 3-5BV。
6.根據(jù)權利要求5所述的利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是在所屬的步驟(4)中，洗脫乙醇濃度為40 % -95 %、流速為l-3BV/h流速、洗脫體積為6-8BV。
7.根據(jù)權利要求6所述的利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是在所屬的步驟￠)中，上硅膠柱層析前，五味子醇甲粗粉溶于醋酸乙酯，烘干過60-80目篩，上工業(yè)級柱200-300目。
8.根據(jù)權利要求7所述的利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法，其特征是在所屬的步驟￠)中，洗脫溶劑為氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液中的一種，洗脫比例為95 85 2，薄層色譜法跟蹤檢測。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機化學領域，涉及一種五味子醇甲的純化方法，特別是涉及一種利用微波逆流提取、大孔吸附樹脂吸附、柱層析純化五味子中五味子醇甲的方法本發(fā)明優(yōu)點1、本發(fā)明采用微波提取，以乙醇為溶劑，除掉部分脂肪油，大大降低了提取時間，提高了生產效率，方法簡單。2、大孔樹脂再生方便迅速，適合大生產，且成本大大降低，水洗脫降去大部分色素和雜質，容易操作。3、大孔樹脂和硅膠柱層析結合，分離和純化效果好，后期又采用重結晶，大大提高了產品純度本發(fā)明采用了微波逆流提取、大孔樹脂分離純化和柱層析進一步純化，產品純度大大提提高，最終得到含量65％以上的五味子醇甲半成品和含量98％以上的五味子醇甲終產品。
文檔編號C07C41/36GK102731271SQ20121014487
公開日2012年10月17日 申請日期2012年5月6日 優(yōu)先權日2011年12月25日
發(fā)明者萬莉, 姚德利, 姚德坤, 張亞紅 申請人:大興安嶺林格貝有機食品有限責任公司