專利名稱：一種從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種黃芩苷和黃芩素的提取方法，尤其是涉及ー種從黃芩根中非柱色譜分離和純化黃芩苷和黃芩素的方法。
背景技術(shù)：
黃芩為常用中藥之一，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎等功效。黃芩的主要成分為黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷和漢黃芩素等黃酮類化合物，其中，黃芩苷和黃芩素是黃芩及其制劑的主要質(zhì)量控制指標(biāo)成分，現(xiàn)代藥理研究證明，黃芩苷和黃芩素不僅具有明顯的抗菌消炎、抗過敏、抗氧化、抗癌和抗病毒等作用，而且對治療心血管疾病也具有一定的作用。因此，黃芩苷和黃芩素的分離純化成了人們爭相研究的熱點。目前，對黃芩苷和黃芩素分離純化工藝的研究有很多報道，如沉淀洗滌法、酸沉法、超濾法、柱色譜法、大孔樹脂法、制備型高效液相色譜法等。此外，對黃芩素成分的分離純化還常常采用酸水解、熱裂解和酶 催化水解等方法，將黃芩苷制備成黃芩素。這些方法，都存在如下幾個問題ー是產(chǎn)品純度不高，純化產(chǎn)物往往為幾個甚至幾十個化合物的混合體；ニ是工作量大，要得到純度較高的產(chǎn)品，一般要經(jīng)過多種方法、多次分離，步驟繁雜；三是設(shè)備要求高，成本高，不易放大，難以實現(xiàn)大規(guī)模エ業(yè)化生產(chǎn)。而現(xiàn)有技術(shù)中還沒有能從黃芩提取液中同時非柱色譜分離和純化黃芩苷和黃芩素的エ藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供ー種操作簡單、快速，成本低，能實現(xiàn)エ業(yè)化生產(chǎn)的提取黃芩苷和黃芩素的方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是，一種提取黃芩苷和黃芩素的方法，包括以下步驟
(1)溶劑超聲提取稱取黃芩根粉末，按照每克黃芩根粉末加入100 200ml的提取溶齊U，然后加入酸，調(diào)節(jié)pH為3 5，超聲提取20 50min，在9000 — IlOOOrpm下離心3 6 min,得上清液；
所述提取溶劑是有機(jī)溶劑與水的混合物；
所述酸優(yōu)選有機(jī)酸，更優(yōu)選甲酸或こ酸；
(2)Fe304磁性納米粒子吸附按每100毫升上清液加入2.O 5. O g Fe3O4磁性納米粒子，攪拌，超聲分散2. O — 5. Omin，在10 — 30°C恒溫振蕩儀上振蕩IOmin 30min，磁鐵分離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe3O4磁性納米粒子表面；
(3)解吸附吸干上清液，往Fe3O4磁性納米粒子中加入與上清液等體積的黃芩苷洗脫液，在10 — 30°C恒溫振蕩儀上振蕩IOmin 30min，磁鐵分離，得到黃芩苷上清液；再往Fe3O4磁性納米粒子中加入與上清液等體積的黃芩素洗脫液，在10 — 30°C恒溫振蕩儀上振蕩IOmin 30min,磁鐵分離,得到黃岑素上清液；
所述黃芩苷洗脫液是含こ胺體積百分比為O. 01% 一 I. 0%的有機(jī)溶劑；所述黃芩素洗脫液是含こ酸體積百分比為O. 1% 一 8. 0%的有機(jī)溶剤。(4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，分別得到黃芩苷、黃芩素含量為70-90%的深黃色粉末。進(jìn)ー步，步驟(I)中，所述有機(jī)溶劑是甲醇、こ醇、こ腈、丙酮或石油醚中的至少ー種。進(jìn)ー步，步驟(I)中，所述有機(jī)溶劑與水的混合物，有機(jī)溶劑與水的體積比為2 5: I。進(jìn)ー步，步驟(3)中，所述有機(jī)溶劑是甲醇、こ醇、こ腈、丙酮或石油醚中的至少ー種。使用本發(fā)明，操作簡單，通過吸附、解吸附兩步即可實現(xiàn)黃芩苷和黃芩素的分離純 化。整個過程省時省力，分離速度快，特異性強(qiáng)，F(xiàn)e3O4納米粒子選擇性吸附黃芩提取液中的黃芩苷和黃芩素，經(jīng)磁場分離、洗脫液解吸附，分別得到了純度達(dá)到90%以上的黃芩苷和黃芩素，避免使用大量非極性有機(jī)溶劑，也避免劇烈機(jī)械振動所帯來的原料和能耗的損失，避免使用昂貴的制備色譜設(shè)備，以及繁瑣耗時的大孔吸附柱色譜，有效降低成本。此外，本發(fā)明中所用的吸附劑為Fe3O4磁性納米粒子，磁響應(yīng)好，在外加磁場作用下可以輕易實現(xiàn)固液分離，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子經(jīng)過解吸附再生以后，可以循環(huán)利用，解決了其他方法中吸附載體回收困難的問題，能有效的降低生產(chǎn)成本。該方法兩步即得到產(chǎn)品，產(chǎn)品純度高，無需進(jìn)行任何特殊處理，解決了傳統(tǒng)方法中多次分離仍得不到純度高成品的問題，易于實現(xiàn)エ業(yè)化生產(chǎn)。


圖I為實施例I各組分的高效液相色譜圖(圖中的I代表吸附前黃芩原液的液相色譜圖；2代表吸附后黃芩上清液的液相色譜圖；3代表黃芩苷洗脫液的液相色譜圖；4代表黃芩素洗脫液的液相色譜圖；組分a為黃芩苷、組分b為黃芩素)。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)ー步詳細(xì)說明。實施例I
本實施例包括以下步驟
(1)溶劑超聲提取稱取1.0g黃芩根粉末，加入100 ml提取溶劑，加入甲酸，調(diào)節(jié)pH為5,超聲提取30min,在10000 rpm離心5 min,得到提取液；
所述提取溶劑是こ腈與水的混合物，其中こ腈與水的體積比為4:1 ;
(2)Fe304磁性納米粒子吸附往步驟(I)所得提取液中加入3.0g Fe3O4磁性納米粒子，攪拌，超聲分散2 min，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩20 min，磁鐵分離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe3O4納米粒子表面；
(3)解吸附吸干上清液，往Fe3O4磁性納米粒子中加入100ml黃芩苷洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min,磁鐵分離，得到黃芩苷上清液，洗脫率達(dá)到95% ;再往磁性Fe3O4納米粒子中加入100 ml黃芩素洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min，磁鐵分離，得到黃芩素上清液，洗脫率達(dá)到97% ；所述的黃芩苷洗脫液是含こ胺體積百分比為0.01%的こ腈溶液，黃芩素洗脫液是含こ酸體積百分比為O. 3%的こ腈溶液；
(4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，得到O. 10g黃岑苷深黃色粉末、O. 20 g黃岑素深黃色粉末,其中黃岑苷的含量為87%,黃岑素的含量為 80%ο圖I為本實施例各組分的高效液相色譜圖
圖中的I代表吸附前黃芩原液的液相色譜圖；2代表吸附后黃芩上清液的液相色譜圖； 3代表黃芩苷洗脫液的液相色譜圖；4代表黃芩素洗脫液的液相色譜圖；組分a為黃芩苷、組分b為黃芩素。說明通過比較圖I中的I和2可以發(fā)現(xiàn)，2中的組分a和組分b的色譜峰明顯減少，而其它峰幾乎不變，說明黃芩中主要是組分a和組分b吸附在Fe3O4磁性納米粒子表面，而其它組分幾乎不被吸附；從3和4可以看出，吸附在Fe3O4磁性納米粒子表面的組分a黃芩苷和組分b黃芩素分別被成功洗脫下來。實施例2
本實施例包括以下步驟
(1)溶劑超聲提取稱取5.O g黃芩根粉末，加入800 ml提取溶劑，加入こ酸，調(diào)節(jié)pH為4,超聲提取30 min,在IOOOOrpm離心5 min,得到上清液；所述提取溶劑是甲醇與水的混合物，甲醇與水的體積比為3: I ；
(2)Fe3O4磁性納米粒子吸附往步驟(I)所得上清液中加入20. O g Fe3O4磁性納米粒子，攪拌，超聲分散2 min，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩20 min，磁鐵分離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe3O4納米粒子表面；
(3)解吸附吸干上清液，往Fe3O4納米粒子中加入800ml黃芩苷洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min,磁鐵分離，得到黃芩苷上清液，黃芩苷洗脫率達(dá)到93% ;再往Fe3O4納米粒子中加入800 ml黃芩素洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min，磁鐵分離，得到黃芩素上清液，黃芩素洗脫率達(dá)到94% ；
所述黃芩苷洗脫液是含こ胺體積百分比為O. 05%的甲醇溶液，黃芩素洗脫液是含こ酸體積百分比為I. 0%的甲醇溶液；
(4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，可以得到O. 40 g黃岑苷深黃色粉末、O. 9 g黃岑素深黃色粉末,其中黃岑苷的含量為85%,黃岑素的含量為81%。實施例3
本實施例包括以下步驟
(1)溶劑超聲提取稱取10.0g黃芩根粉末，加入2000 ml提取溶劑，然后加入甲酸，調(diào)節(jié)pH為3,超聲提取30min,在10000 rpm離心5 min,得到上清液；所述提取溶劑是丙酮與水的混合物，丙酮與水的體積比為4: I ；
(2)Fe304磁性納米粒子吸附往步驟(I)所得上清液中加入40g Fe3O4磁性納米粒子，攪拌，超聲分散2 min，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩20 min，磁鐵分離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe3O4納米粒子表面；
(3)解吸附吸干上清液，往Fe3O4磁性納米粒子中加入2000ml黃芩苷洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩洗脫20 min,磁鐵分離，得到黃芩苷上清液，洗脫率達(dá)到93% ;再往Fe3O4納米粒子中加入2000 ml黃芩素洗脫液，在25°C恒溫振蕩儀上振蕩20 min,磁鐵分離，得到黃芩素上清液，洗脫率達(dá)到94%;
所述黃芩苷洗脫液是含こ胺體積百分比為O. 1%的丙酮溶液，黃芩素洗脫液是含こ酸體積百分比為5. 0%的丙酮溶液； (4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，得到I. Og黃岑苷深黃色粉末、2. I g黃岑素深黃色粉末，其中黃岑苷的含量為85%,黃岑素的含量為80%。
權(quán)利要求
1.一種從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)溶劑超聲提取稱取黃芩根粉末，按照每克黃芩根粉末加入100 200ml的提取溶 劑，然后加入酸，調(diào)節(jié)pH為3 5，超聲提取20 50min，在9000 — llOOOrpm下離心3 6 min,得上清液；所述提取溶劑是有機(jī)溶劑與水的混合物；(2)Fe304磁性納米粒子吸附按每100毫升上清液加入2.0 5. 0 g Fe304磁性納米粒 子，攪拌，超聲分散2. 0 — 5. Omin，在10 — 30°C恒溫振蕩儀上振蕩lOmin 30min，磁鐵分 離，使溶液分成上下兩相，黃芩苷和黃芩素選擇性吸附在下層的Fe304磁性納米粒子表面；(3)解吸附吸干上清液，往Fe304磁性納米粒子中加入與上清液等體積的黃芩苷洗脫 液，在10 - 30°C恒溫振蕩儀上振蕩lOmin 30min，磁鐵分離，得到黃芩苷上清液；再往 Fe304磁性納米粒子中加入與上清液等體積的黃芩素洗脫液，在10 - 30°C恒溫振蕩儀上振 蕩lOmin 30min,磁鐵分離，得到黃岑素上清液；所述黃芩苷洗脫液是含乙胺體積百分比為0. 01% - 1. 0%的有機(jī)溶劑；所述黃芩素洗脫液是含乙酸體積百分比為0. 1% - 8. 0%的有機(jī)溶劑；(4)干燥純化將步驟(3)所得黃芩苷上清液和黃芩素上清液分別減壓蒸發(fā)，分別得到 黃芩苷、黃芩素含量為70-90%的深黃色粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，步驟 (1)中，所述有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、乙腈、丙酮或石油醚中的至少一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，步 驟(1)中，所述有機(jī)溶劑與水的體積比為2 5: 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，步 驟(1)中，所述酸為有機(jī)酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的從黃岑根中提取黃岑苷和黃岑素的方法，其特征在于，所述 有機(jī)酸為甲酸或乙酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其特征在于，步 驟(3)中，所述有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、乙腈、丙酮或石油醚中的至少一種。
全文摘要
一種從黃芩根中提取黃芩苷和黃芩素的方法，其包括以下步驟(1)溶劑超聲提??；(2)Fe3O4磁性納米粒子吸附；(3)解吸附。本發(fā)明簡單快速，通過外加磁場即可實現(xiàn)吸附載體與原料液的分離，通過不同的洗脫液可以選擇性洗脫黃芩苷和黃芩素，避免了原料和能耗的損失，有效降低成本，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子可以循環(huán)使用，能有效節(jié)約成本。
文檔編號C07H17/07GK102659877SQ20121015024
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月16日
發(fā)明者周鵬, 張軍安, 張松, 李媛, 許光明, 陳波 申請人:湖南師范大學(xué)