專利名稱：虎杖中二苯乙烯苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥中有效成分提取與分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從虎杖中制備ニ苯こ烯苷的方法。
背景技術(shù)：
虎杖為寥科多年生草本植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc)的根及根莖，是使用悠久且常用中藥之一。其性寒味苦，具有祛風利濕、散瘀定痛、止咳化痰等功效?，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，虎杖具有多種藥理活性，主要包括顯著的抗菌、抗真菌作用樊小容.虎杖對致病菌株藥敏試驗.時珍國醫(yī)國藥，2000，11 (2) :108與較好的抗病毒活性蔣巖，王紅霞，鮑作義，等.用鼠艾滋病模型評價虎杖水提液的抗病毒作用.中國病毒學，1998，13⑷306；對心血管系統(tǒng)亦有強心、降脂作用金春華，趙克森，劉杰等.虎杖甙對 正常大鼠血管平滑肌細胞內(nèi)游離鈣濃度的影響.中國病理生理雜志，1998，14(2) :195;陳曉莉，肖華，薛克昌.虎杖片與辛伐他汀治療高脂血癥的比較.醫(yī)藥導報，2002，21 (I) 25 ；王懷亮.虎杖提取物對冠心病患者血小板釋放功能的影響.深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，1997，7(2) :19;還具有清除自由基孟潔，杭瑚.虎杖提取物的抗氧化活性及穩(wěn)定性研究.化學世界，2000，(8) :417、降血糖沈忠明，殷建偉，袁海波.虎杖鞣質(zhì)的降血糖作用研究.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004,16 (3) :220、抗腫瘤，抗炎，止血，止咳，平喘，鎮(zhèn)靜等活性孔曉華，周玲芝.中藥虎杖的研究進展.中醫(yī)藥導報，2009，15 (5) :107?；⒄戎泻休^多的羥基蒽醌類、ニ苯こ烯類、黃酮類和多糖類成分孔曉華，周玲芝.中藥虎杖的研究進展.中醫(yī)藥導報.2009，15(5) :107，其中大黃素、大黃素甲醚、虎杖苷等含量較高。為了進一步闡明虎杖的藥效基礎(chǔ)，我們對虎杖的化學成分研究發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的虎杖中均含有2，3，5，4’-四羥基ニ苯こ烯-2-0-β -D-葡萄糖苷(簡稱ニ苯こ烯苷)，最聞含量可達5. I %。ニ苯こ烯苷也是何首烏中的主要水溶性成分，為白色無定形粉末，易溶于水、甲醇、こ醇。其含量常作為何首烏藥材及制劑質(zhì)量控制的指標。ニ苯こ烯苷有多種藥理作用對老年性癡呆等神經(jīng)退行性疾病有治療作用張?zhí)m，邢穎，趙玲，等.不同時程APP轉(zhuǎn)基因小鼠學習記憶改變及參烏膠囊、ニ苯こ烯苷的干預作用.中國行為醫(yī)學科學，2006，15(3) :193_196;清除自由基,延緩衰老的作用Lv LS, Gu XH, Tang J, et al. Antioxidantactivity of stilbeneglycosides irom poygonum mumflorum. Food しhemistry，2007,104(4) :1678-1681；降血脂及抗動脈粥樣硬化作用Yang PY, Almofti MR, Lu L，et al. Reduction ofatheroscierosis in cholesterol-fed rabbits and decrease oiexpressions of intracellular adhesion molecule—I and vascular endothelialgrowth factor in foam cells by a water-solution fraction of polygonummultiflorum. J Pharmacol Sci，2005，99 (3) :294_300;抗腫瘤作用謝歲.何首烏及ニ苯乙烯苷的研究進展.天津藥學，2010，22 (3) :70-73等；具有重要的藥用價值和開發(fā)前景?；⒄戎饕植加诮K、浙江、江西、福建、山東、河南等中南部地區(qū)，資源豐富。以虎杖作為ニ苯こ烯苷的新來源，從中提取ニ苯こ烯苷，可產(chǎn)生更大的經(jīng)濟效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供ー種エ藝穩(wěn)定、純度和收率高的虎杖中制備ニ苯こ烯苷的方法，該方法包括以下步驟(I)提取將虎杖粉碎成粗粉，用50 90%こ醇浸泡12 24h，浸潰或滲漉提取，減壓回收こ醇，得到提取濃縮液；(2)萃取法除去雜質(zhì)將提取濃縮液用低極性有機溶劑萃取，集中有機溶劑萃取過的水溶液；(3)大孔吸附樹脂純化將水溶液稀釋后，過大孔吸附樹脂，先用少量水洗脫至洗脫液不渾濁，棄去，用30%濃度こ醇洗脫雜質(zhì)，棄去，再用40 60%濃度こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至小體積，冷凍干燥，得ニ苯こ烯苷粗品。(4)重結(jié)晶將ニ苯こ烯苷粗品混懸于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，慢慢降低溫度，析出結(jié)晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體。上述⑴步驟中采用50 90%こ醇浸泡12 24h，最好采用60 80%こ醇；提取方法包括浸潰或滲漉提取，最好為滲漉提取。上述(2)步驟中所述低極性有機溶劑可以是苯、甲苯、ニ甲苯、こ醚、石油醚等低極性有機溶劑中的ー種。上述(3)步驟中用40 60%濃度こ醇洗脫，最好采用40%こ醇；用量為樹脂重量的5 10倍。
具體實施例方式下面列舉典型實施例，對本發(fā)明進ー步說明，但不以任何形式構(gòu)成對本發(fā)明的限制。實施例I取虎杖藥材1kg，粉碎成粗粉，用2L 60%こ醇潤濕；裝入滲漉器中，浸潰放置24h，便溶劑充分滲透擴散；用IOL 60%こ醇滲濾，收集滲漉液；減壓回收こ醇，濃縮至1200ml，毎次2倍體積こ醚萃取，共萃取3次，除脂溶性雜質(zhì)；取水層，加3倍藥材重量的去離子水稀釋，離心(3000轉(zhuǎn)/分)，上清液以ILAkg^h)流速過D-101大孔吸附樹脂(柱徑-柱高=
I 10，樹脂重量為藥材重量的2倍)，用3倍于樹脂體積的去離子水以ILAkg^h)流速除雜，然后用5倍于樹脂體積的30%こ醇以O(shè). 8L/(kg · h)流速除雜，最后用6倍于樹脂體積的40%こ醇以O(shè). 8L/(kg · h)流速解吸，收集解吸液，減壓回收こ醇，減壓濃縮至小體積，冷凍干燥；將得到的粗品11. 9g混懸于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，放置室溫，再置于-4°C，析出結(jié)晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體5. lg。實施例2取虎杖藥材2kg，粉碎成粗粉，用5L 70%こ醇潤濕；裝入滲漉器中，浸潰放置24h，使溶劑充分滲透擴散；用15L 70%こ醇滲濾，收集滲漉液；減壓回收こ醇，濃縮至2200ml，毎次3倍體積石油醚萃取，共萃取3次；取水層，加3倍藥材重量的去離子水稀釋，離心(3000轉(zhuǎn)/分)，上清液以l!V(kg -h)流速過D-101大孔吸附樹脂(柱徑-柱高=I 10，、樹脂重量為藥材重量的2倍)，用2倍于樹脂體積的去離子水以IL/(kg -h)流速除雜，然后用8倍于樹脂體積的30%こ醇以O(shè). 8L/(kg -h)流速除雜，最后用10倍于樹脂體積的40%こ醇以O(shè). 8L/(kg -h)流速解吸，收集解吸液，減壓回收こ醇，減壓濃縮至小體積，冷凍干燥；將得到的粗品20. 2g混懸于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，放置室溫，再置于-4°C，析出結(jié)晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體9. 9g。實施例3取虎杖藥材10kg，粉碎成粗粉，用15L 60%こ醇潤濕；裝入滲漉器中，浸潰放置24h，使溶劑充分滲透擴散；用50L 60%こ醇滲濾，收集滲漉液；減壓回收こ醇，濃縮至2L，毎次2倍體積こ醚萃取，共萃取2次；取水層，加2倍藥材重量的去離子水稀釋，離心(3000轉(zhuǎn)/分)，上清液以ILAkg^h)流速過D-101大孔吸附樹脂(柱徑-柱高=I 10，樹脂重量為藥材重量的I. 5倍)，用2倍于樹脂體積的去離子水以ILAkg · h)流速除雜，然后用5倍于樹脂體積的30%こ醇以O(shè). 8L/(kg · h)流速除雜，最后用6倍于樹脂體積的40% こ醇以O(shè). 8L/(kg -h)流速解吸，收集解吸液，減壓回收こ醇，減壓濃縮至小體積，冷凍干燥；將得到的粗品83. 6g混懸于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，放置室溫，再置于-4°C，析出結(jié)晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體32. 9g。
權(quán)利要求
1.ー種虎杖中制備ニ苯こ烯苷的方法，其方法特征在干 (1)提取將虎杖粉碎成粗粉，用50-90%こ醇浸泡12-24h，浸潰或滲漉提取，減壓回收こ醇，得到提取濃縮液； (2)萃取法除去雜質(zhì)將提取濃縮液用低極性有機溶劑萃取，集中有機溶劑萃取過的水溶液； (3)大孔吸附樹脂純化將水溶液稀釋后，過大孔吸附樹脂，先用少量水洗脫至洗脫液不渾濁,棄去,用30%濃度こ醇洗脫雜質(zhì)，棄去，再用40-60%濃度こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，冷凍干燥，得ニ苯こ烯苷粗品； (4)重結(jié)晶將ニ苯こ烯苷粗品混懸于I: 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，慢慢降低溫度，析出結(jié)晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的虎杖中二苯こ烯苷的制備方法，其提取特征在于所述(I)步驟中采用50-90%こ醇浸泡12-24h，最好采用60-80%こ醇；提取方法包括浸潰或滲漉提取，最好為滲漉提取?！?br> 3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的虎杖中二苯こ烯苷的制備方法，其萃取特征在于所述(2)步驟中低極性有機溶劑可以是苯、甲苯、ニ甲苯、こ醚、石油醚等低極性有機溶劑中的ー種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的虎杖中二苯こ烯苷的制備方法，其純化特征在于所述(3)步驟中用40-60%濃度こ醇洗脫，最好采用40%こ醇；用量為樹脂重量的5-10倍。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種虎杖中二苯乙烯苷的制備方法，屬于中藥中有效成分提取與分離技術(shù)領(lǐng)域。該制備方法的步驟為是將虎杖粉碎成粗粉，用50～90％乙醇浸泡，浸漬或滲漉提取，減壓濃縮；用低極性有機溶劑萃取濃縮液，除去雜質(zhì)；將萃取過的水溶液稀釋后，經(jīng)大孔吸附樹脂純化得二苯乙烯苷粗品；將粗品用1∶5的丙酮-水溶液重結(jié)晶，低溫處理，得到二苯乙烯苷晶體；本發(fā)明提供的虎杖中二苯乙烯苷的制備方法具有工藝穩(wěn)定、經(jīng)濟實用、提取效率高等特點。
文檔編號C07H15/203GK102718811SQ20121016048
公開日2012年10月10日 申請日期2012年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月22日
發(fā)明者孫紀元, 曹蔚, 楊倩, 畢琳琳, 王四旺, 謝艷華 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學