專利名稱：一種在變?nèi)~海棠和花葉海棠中提取純化根皮素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及根皮素的提取純化方法，屬于藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
根皮素，化學(xué)名3- (4-羥基苯基)-1- (2、4、6_三羥基苯基)-1_丙酮，是黃酮類化合物，溶于甲醇、乙醇和丙酮 ，幾乎不溶于水。根皮素主要分布于蘋果、梨等多汁水果的果皮及根皮及馬醉木中。最早是作為一種天然皮膚美白劑被使用，具有保濕、治療分泌旺盛型粉刺、抑制黑素細(xì)胞活性，淡化色斑的作用。最近國(guó)內(nèi)一些學(xué)者證實(shí)，根皮素具有良好的藥效活性，如抗炎、提高免疫，預(yù)防骨質(zhì)疏松、降血脂、抗腫瘤、抗心血管硬化、誘導(dǎo)癌癥細(xì)胞凋亡、抑制胃癌細(xì)胞等。因此，根皮素的使用范圍廣泛，對(duì)根皮素的需求量也日趨增加。目前從植物中分離純化根皮素時(shí)，多是先提取根皮苷，再進(jìn)行酶解或酸水解后，得到根皮素。如專利申請(qǐng)?zhí)?01010510889. x,該發(fā)明以蘋果葉、海棠葉為原料，將提取液經(jīng)大孔樹脂純化后，再進(jìn)行生物酶解，制備得到純度96%以上的根皮素。徐凱等，以蘋果皮為原料，將其提取液通過(guò)鹽酸水解處理后，在進(jìn)行進(jìn)一步提取，并認(rèn)為根皮素純度大幅提高(徐凱，等，蘋果皮中根皮素的提取工藝研究，食品研究與開發(fā)，2009年30卷12期)。目前，還未見不使用酶解或酸水解操作，直接從蘋果屬植物中分離純化根皮素方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從蘋果屬植物中不使用酶解或酸水解操作直接分離純化根皮素的方法。本發(fā)明提供了根皮素的提取純化方法，它包括如下操作步驟(I)取蘋果屬植物的葉，粉碎，加水或不同濃度的乙醇溶液提取，提取液回收溶劑后，在以水-乙酸乙酯系統(tǒng)萃取，取乙酸乙酯萃取層，回收溶劑后，得乙酸乙酯部位浸膏；(2)將乙酸乙酯部位浸膏上硅膠柱，用氯仿-甲醇=50 :(1-3) V/V洗脫除雜后，再依次用氯仿-甲醇=40 1V/V — 30 1V/V洗脫，薄層監(jiān)視，合并相同流分，回收溶劑后，浸膏備用;(3)取步驟(2)制備的浸膏，上硅膠柱，用石油醚-丙酮=5 :(2-4) V/V洗脫，薄層監(jiān)視，收集洗脫液，回收溶劑后，干燥，即得根皮素。進(jìn)一步地，所述蘋果屬植物為花楸蘋果組植物。更進(jìn)一步地,所述蘋果屬花楸蘋果組植物為變?nèi)~海棠Malus toringoides (Rehd.)Hughes.、花葉海棠 Malus tiansitoria (Batal. ) Schneid.。進(jìn)一步地，步驟(2)的具體操作如下將乙酸乙酯部位浸膏上硅膠柱，用氯仿-甲醇=50 :(1-3)V/V洗脫除雜后，先用10倍柱體積的氯仿-甲醇=40 1V/V洗脫，均勻收集120份，分別得到B1-B120流分；再以7倍柱體積的氯仿-甲醇=30 :1V/V洗脫，均勻收集112份，分別得到C1-C112流分；薄層監(jiān)視，合并B84-120流分、C1-C32流分，回收溶劑后，浸膏備用。更進(jìn)一步地，步驟(2)中，用氯仿-甲醇=50 :1V/V洗脫除雜。進(jìn)一步地,步驟(3)中，用石油醚-丙酮=5 3V/V洗脫。進(jìn)一步地，步驟(I)中，乙醇濃度為95%V/V。本發(fā)明不采用酶解或酸水解，首次從薔薇科蘋果屬花楸蘋果組植物變?nèi)~海棠和花葉海棠中分離得到根皮素，制備得到的根皮素純度在98%以上，且回收率較高，為根皮素的分離純化提供了新的路徑，同時(shí)也為變?nèi)~海棠和花葉海棠專屬性成分的研究奠定了基礎(chǔ)。


圖I根皮素H—NMR譜圖 圖2根皮素C-NMR譜3根皮素的HPLC純度檢測(cè)圖
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I本發(fā)明根皮素的分離純化方法(I)取變?nèi)~海棠干燥葉8kg，用手揉碎或粉碎，每次稱取Ikg左右，加5倍95%的乙醇回流提取，提取兩次，過(guò)濾，收集續(xù)濾液，減壓回收，得乙醇部位浸膏563g。將乙醇部位的浸膏加水溶解，然后加入2倍的乙酸乙酯反復(fù)萃取直至乙酸乙酯溶液無(wú)色，合并乙酸乙酯溶液，減壓回收得乙酸乙酯部位浸膏240g。(2)將乙酸乙酯部位加適量甲醇溶解，同時(shí)加入200g硅膠(200-300目)進(jìn)行拌樣。取3000g硅膠進(jìn)行濕法裝柱，待硅膠柱沉淀均勻后加入樣品，用氯仿-甲醇=50 :(1-3) V/V洗脫除雜后，先用10倍柱體積的氯仿-甲醇=40 :1V/V洗脫，均勻收集120份，分別得到B1-B120流分；再以7倍柱體積的氯仿-甲醇=30 :1V/V洗脫，均勻收集112份，分別得到C1-C112流分；薄層監(jiān)視，合并B84-120流分、C1-C32流分，回收溶劑后，得浸膏42g，備用。(3)取步驟(2)制備的浸膏，上樣于400g的硅膠柱，用石油醚-丙酮=5 3V/V洗 脫，薄層監(jiān)視，收集洗脫液，回收溶劑后，干燥，即得根皮素4g。本實(shí)驗(yàn)先后用石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、氯仿-甲醇為三種洗脫劑進(jìn)行了預(yù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，氯仿-甲醇對(duì)變?nèi)~海棠黃酮類物質(zhì)洗脫較為完全，且極性范圍廣。實(shí)施例2實(shí)施例I所得產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)鑒定取實(shí)施例I得到的根皮素進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，數(shù)據(jù)如下本品為淺粉紅色粉末(甲醇)，TLC紫外燈下噴三氯化鋁顯色劑顯亮藍(lán)色。鹽酸鎂粉反應(yīng)顯陽(yáng)性，初步判斷為黃酮類或黃酮醇類化合物。分子式=C15H14O5IH-匪 R(600MHz，DMS0-d612. 23 (2H, s, 2’，6’ -0H), 10. 33 (1H, s, 4’ -0H), 9. 12(1H，s, 4-0H)，7. 03 (2H, s, H-3，，5，)，6. 68 (2H, d, J=8. 5Hz)，5. 82 (2H, s, H_3，，5，)，3. 23 (2H, d,J=7. 6Hz), 2. 78 (2H, d, J=7. 6Hz)，13C-NMR (151MHz, DMS0_d6) 205. 0 (C=O)，164.7(04’)，164.4(C-2’，C-6’)，155. 0(C-4), 132. 5 (C-I), 128. 9 (C_2, C_6)，114. 7 (C_3, C_5) 103. 9 (C_l，-)94.4(C-3’，C-5’ ),45. 9 (C-a ),30. 0 (C-^ )經(jīng)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)比鑒定為化合物根皮素(Phloretin).
權(quán)利要求
1.根皮素的提取純化方法，其特征在于它包括如下操作步驟 (1)取蘋果屬植物的葉，粉碎或揉碎，加水或不同濃度的乙醇溶液提取，提取液回收溶劑后，在以水-乙酸乙酯系統(tǒng)萃取，取乙酸乙酯萃取層，回收溶劑后，得乙酸乙酯部位浸膏； (2)將乙酸乙酯部位浸膏上硅膠柱，用氯仿-甲醇=50:(1-3)V/V洗脫除雜后，再依次用氯仿-甲醇=40 1V/V — 30 1V/V洗脫，薄層監(jiān)視，合并相同流分，回收溶劑后，浸膏備用； (3)取步驟(2)制備的浸膏，上硅膠柱，用石油醚-丙酮=5:(2-4)V/V洗脫，薄層監(jiān)視，收集洗脫液，回收溶劑后，干燥，即得根皮素。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的提取純化方法，其特征在于所述蘋果屬植物為蘋果屬花楸蘋果組植物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取純化方法，其特征在于所述蘋果屬花楸蘋果組植物為變?nèi)~海棠 Malus toringoides (Rehd. )Hughes.、花葉海棠 Malus tiansitoria(Batal.)Schneid.。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的提取純化方法，其特征在于步驟(2)的具體操作如下 將乙酸乙酯部位浸膏上硅膠柱，用氯仿-甲醇=50 : (1-3) V/V洗脫除雜后，先用10倍柱體積的氯仿-甲醇=40 1V/V洗脫，均勻收集120份，分別得到B1-B120流分；再以7倍柱體積的氯仿-甲醇=30 :1V/V洗脫，均勻收集112份，分別得到C1-C112流分；薄層監(jiān)視，合并B84-120流分、C1-C32流分，回收溶劑后，浸膏備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取純化方法，其特征在于步驟(2)中，用氯仿-甲醇=501V/V洗脫除雜。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的提取純化方法，其特征在于步驟(3)中，用石油醚-丙酮=53V/V洗脫。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的提取純化方法，其特征在于步驟(I)中，乙醇濃度為95%V/N。
全文摘要
本發(fā)明提供了根皮素的分離純化方法。本發(fā)明不采用酶解或酸水解，首次從薔薇科蘋果屬花楸蘋果組植物中分離得到根皮素，制備得到的根皮素純度在98%以上，且回收率較高，該發(fā)明為根皮素的分離純化提供了新的路徑，同時(shí)也為變?nèi)~海棠和花葉海棠專屬性成分的研究奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C07C45/78GK102701938SQ20121019056
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月11日
發(fā)明者彭成, 李敏, 王道清 申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué)