專利名稱：一種從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙a3的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種甜菊甙A3的提純方法，具體是使用混和溶劑從甜菊總甙中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法。
背景技術(shù)：
甜菊式A3又稱萊鮑迪式A(rebaudioside A),分子式為C44H71O24,相對(duì)分子質(zhì)量983，是ー種強(qiáng)效的甜味劑，甜菊甙的甜度為蔗糖的200倍左右，其后味略帶甘苦味。甜菊甙A3的甜度為蔗糖的350 400倍，口味純正，沒有后苦味。含80%甜菊甙A3的甜菊糖市價(jià)比一般甜菊總甙高4 5倍。甜菊甙類甜味劑已廣泛用于食品エ業(yè)和醫(yī)藥エ業(yè)中作為甜味齊U、添加劑和矯味劑，如糕點(diǎn)、餅干、飲料、罐頭、腌制品中，還可用于糖尿病、高血壓、肥胖癥、誕心病、頻齒患者的保健食品和中西藥制劑中。 甜菊甙A3的制備方法主要采用樹脂分離法和甲醇低溫結(jié)晶法。樹脂分離法是以甜葉菊濃縮液為原料，通過不同樹脂反復(fù)洗脫獲得甜菊甙A3。此法分離樹脂洗脫時(shí)間較長(zhǎng)，洗脫液中甜菊甙A3濃度偏低，且濃縮困難，耗能大。甲醇結(jié)晶法是使用甲醇作溶劑，得到一次結(jié)晶主要是甜菊甙，隨甲醇的濃度、用量不同，其含量有一定波動(dòng)，大部分甜菊甙A3留在母液中，需要濃縮后進(jìn)行甲醇二次結(jié)晶，且結(jié)晶溫度需在零度以下的低溫進(jìn)行，該過程也有采用甲醇和異丙醇混和溶劑進(jìn)行結(jié)晶，該方法獲得的甜菊甙A3其純度偏低，約為90%，時(shí)間長(zhǎng)，約為48h，結(jié)晶要求溫度低，エ業(yè)化成本高，且需經(jīng)過多次結(jié)晶步驟，不僅耗時(shí)而且溶劑損失量大。申請(qǐng)?zhí)枮?00810196722. 3的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公開了一種從甜葉菊濃縮液中分離提純甜菊甙A3和甜菊甙的方法。該方法通過模擬移動(dòng)床利用酸性鈣型螯合樹脂作為固定劑，以濃縮液為原料，以水作為洗脫劑，使甜菊甙A3、甜菊甙和其它甜菊甙分離。該方法采用模擬移動(dòng)床技術(shù)進(jìn)行提純甜菊甙A3和甜菊甙，需要合成樹脂，分離后樹脂存在回收再利用問題，并且分離過程需要溫度較高，在加熱35°C 95°C完成分離，需要消耗較多熱能。專利號(hào)為CN200710025792. 8的中國(guó)發(fā)明專利公開了ー種從甜菊糖中提取高純度萊鮑迪A甙的方法，該方法利用重結(jié)晶和膜分離技術(shù)相結(jié)合，用甲醇與異丙醇混合溶劑溶解原料甜菊糖進(jìn)行重結(jié)晶，結(jié)晶溫度需_18°C，結(jié)晶時(shí)間24-48h后需要重結(jié)晶；對(duì)晶體用純水溶解后再膜分離，濃縮、真空干燥獲得高純度萊鮑迪A甙含量大于90%產(chǎn)品。該方法需要反復(fù)進(jìn)行重結(jié)晶后，還需進(jìn)行膜分離技術(shù)，在重結(jié)晶過程不僅增加了產(chǎn)品生產(chǎn)周期，而且消耗了大量的溶劑，膜分離更是増加成本，還存在膜的回收再利用問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供ー種エ藝簡(jiǎn)化、只需一次結(jié)晶，且在4°C 20°C下結(jié)晶，無需增加制冷設(shè)備，并大大縮短了結(jié)晶時(shí)間，節(jié)能型的從甜菊總甙中分離獲得高純度的甜菊甙A3的方法。發(fā)明采用降溫法結(jié)晶，根據(jù)溶質(zhì)通過降低溫度形成過飽和溶液從而析出的原理得到較高純度的溶質(zhì)，影響結(jié)晶的因素很多，主要有単一或復(fù)合溶劑的選擇、結(jié)晶溫度，攪拌速度，攪拌方式，過飽和度的選擇等等，其中溶劑的選擇是決定物質(zhì)能否成功結(jié)晶的關(guān)鍵因素，根據(jù)相似相溶原理，溶質(zhì)易溶于結(jié)構(gòu)相近的溶劑中，極性物質(zhì)易溶于極性溶剤，極性較強(qiáng)的溶劑往往有水、甲醇、こ醇等，中等極性及較低極性溶劑有異丙醇、丙酮、こ酸こ酷、氯仿等等。但最終合適溶劑的選擇只能用試驗(yàn)的方法來決定。發(fā)明中主要對(duì)甜菊甙A3進(jìn)行結(jié)晶分離，采用水、甲醇、こ醇混合溶劑作為結(jié)晶溶劑，該混合體系可有效溶解原料中的甜菊甙A3和其他雜質(zhì)，并在降溫過程使得甜菊甙A3形成過飽和溶液，可以在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到結(jié)晶分離的目的，水的引入増加了溶劑極性，更好的控制了過飽和區(qū)間，使得一次結(jié)晶即可獲得高純度甜菊甙A3。而現(xiàn)有技術(shù)使用結(jié)晶溶劑為甲醇或甲醇和異丙醇混合溶剤，由于極性較低，甜菊甙A3溶解度降低，需要在更低溫度不才能使甜菊甙A3處于過飽和狀態(tài)并緩慢析出，在這過程中其他雜質(zhì)也一并緩慢析出，因此一次結(jié)晶甜菊甙A3不僅時(shí)間長(zhǎng)，純度不高，而且需要重結(jié)晶進(jìn)一步分離甜菊甙A3。
為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明的目的本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)一種從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，包括如下步驟(I)混合溶劑配制按體積比為水こ醇甲醇=0. 2 0. 8 I 3 I的比例將水、こ醇和甲醇混合，配制混合溶劑；(2)結(jié)晶按甜菊總甙混合物原料與混合溶劑的固液質(zhì)量體積比為Ig 3ml Ig 5ml的比例將甜菊總甙混合物原料和混合溶劑加入到容器中混合，室溫下攪拌溶解10 30min，添加甜菊甙A3晶種，在溫度為4°C 20°C攪拌2 6h后離心分離，獲得晶體產(chǎn)物；甜菊甙A3晶種為純度大于99%的甜菊甙A3，甜菊甙A3晶種的用量為甜菊總甙混合物原料中甜菊甙A3重量的I 5% ;所述甜菊總甙混合物原料為甜菊甙A3重量含量大于40%的甜菊總甙混合物；(3)分離所得晶體產(chǎn)物用無水こ醇洗滌后離心分離，再用無水甲醇洗滌；離心分離后，真空干燥，得甜菊甙A3產(chǎn)品。為進(jìn)ー步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，以質(zhì)量百分比計(jì)，所述甜菊總甙混合物原料中甜菊甙A3含量?jī)?yōu)選為40 90 %，甜菊甙含量?jī)?yōu)選為7 50 %，甜菊雙糖甙含量?jī)?yōu)選為I 5 %，甜菊式B含量?jī)?yōu)選為I 3%,甜菊式C含量?jī)?yōu)選為I 2%。所述こ醇為體積濃度優(yōu)選為大于95%的こ醇水溶液或者無水こ醇。所述離心分離的條件優(yōu)選為2000 3000rpm轉(zhuǎn)速下,離心6 15min。所述真空干燥為優(yōu)選在真空度為-0. 04 -0. 02MPA下進(jìn)行。所述無水甲醇洗滌中，晶體與無水甲醇料液質(zhì)量體積比優(yōu)選為Ig Iml ig . 5mi。所述無水甲醇洗滌的次數(shù)優(yōu)選為1-3次。所述乙醇洗滌的次數(shù)優(yōu)選為1-3次。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和積極效果I、本發(fā)明選取こ醇、甲醇和水組成的混合溶劑從甜菊總甙中結(jié)晶、分離甜菊甙A3，一次結(jié)晶和洗滌可使40%的甜菊甙A3純度提高到85-90%，再用甲醇洗滌可使甜菊甙A3的純度達(dá)到95-99.9%，最大限度的保留了甜菊甙A3，甜菊甙A3的純度高，該發(fā)明比目前報(bào)道技術(shù)エ藝過程更為簡(jiǎn)單易行。2、本發(fā)明結(jié)晶可在4°C 20°C的常溫下進(jìn)行，不需低溫結(jié)晶、能耗低，生產(chǎn)成本低。在結(jié)晶過程中，溶劑的選擇是關(guān)系到純化甜菊甙A3和回收率的關(guān)鍵因素之一，本發(fā)明混合溶劑中水在這里起了很關(guān)鍵的作用，水、こ醇、甲醇組成的混合溶劑中由于水的加入，達(dá)到提高了對(duì)甜菊甙A3的溶解能力，使得溫度小范圍改變，即結(jié)晶溫度在4°C 20°C下就會(huì)使甜菊甙A3達(dá)到過飽和區(qū)間，溶液達(dá)到過飽和狀態(tài)，使得在4°C 20°C下甜菊甙A3隨晶種一同析出結(jié)晶，通過洗滌晶體即可獲得純度較高的甜菊甙A3，因此只需結(jié)晶一次，并且不需要在公開文獻(xiàn)中的零度以下完成結(jié)晶過程，能耗將是現(xiàn)有技術(shù)的20 %，成本減少一半以上。3、采取真空干燥甜菊甙A3，使得甜菊甙A3干燥徹底，粉碎容易，溶劑較為安全且沸點(diǎn)低，容易被蒸發(fā)出去，產(chǎn)品中有機(jī)溶劑殘留低。4、通過本發(fā)明的混合溶劑結(jié)晶法，不僅可對(duì)大量原料進(jìn)行結(jié)晶分離甜菊甙A3，而且可在室溫下進(jìn)行，結(jié)晶后溶劑還可回收再利用，大大降低了成本，實(shí)現(xiàn)了可規(guī)模化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步的說明，需要說明的是，實(shí)施例并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明要求保護(hù)范圍的限制。實(shí)施例I原料為甜菊甙A3重量含量大于40%甜菊總甙混合物，其中，甜菊甙A3含量43%，甜菊甙含量50 %，甜菊雙糖甙含量2 %，甜菊甙B含量3 %，甜菊甙C含量2 %。甜菊甙A3的甜度為蔗糖的350 400倍，口味純正，沒有后苦味。甜菊甙A3純度越高，售價(jià)越高。一種從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，包括如下步驟(I)混合溶劑配置按體積比為水こ醇甲醇=0.5 2 I的比例將水、こ醇和甲醇混合，配置混合溶剤；(2)結(jié)晶在250ml燒杯中，按甜菊總甙混合物原料與混合溶劑的固液質(zhì)量體積比為Ig : 5ml的比例稱取的原料10. 0g、混合溶劑50ml ;室溫下,轉(zhuǎn)速為60rpm磁力攪拌下攪拌溶解30min ;按原料中甜菊甙A3總重量5%的比例在燒杯中添加甜菊甙A3晶種(該甜菊甙A3晶種純度為99%，購(gòu)制于上海西寶生物科技有限公司)。所得溶液置于4°C ±1°C攪拌結(jié)晶，晶體析出時(shí)間為2h,在轉(zhuǎn)速為3000rpm條件下離心分離IOmin,得晶體；通過離心可以將液體除去，得到晶體；(3)分離所得晶體用50mlこ醇(95 %，體積百分比)洗滌2次，每次洗滌后均在3000rpm離心分離lOmin，得到甜菊甙A3重量為3.01g，計(jì)算回收率為70%，其中回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；通過HPLC測(cè)定甜菊甙A3的純度為88%。分離的母液收集后另行處理回收。所得甜菊甙A3用40ml的無水甲醇洗滌后，再3000rpm離心分離IOmin,晶體用無水甲醇40ml洗洚兩次，以進(jìn)ー步除去所含雜質(zhì)。然后在真空度為-0. 02MPA下進(jìn)行真空干燥10h。干燥后獲得甜菊式A3重量為2. 236g,計(jì)算得甜菊甙A3的回收率為52%，甜菊甙A3的回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；HPLC測(cè)定所得甜菊甙A3的純度為96. 7%，產(chǎn)品密封待用。該實(shí)施例中，獲得純度為96. 7%甜菊甙A3的結(jié)晶過程中無需重結(jié)晶，僅采用一次結(jié)晶過程，并且結(jié)晶時(shí)間僅為2h，結(jié)晶溫度在4°C ±1°C下完成，這與專利號(hào)為CN200710025792. 8的中國(guó)發(fā)明專利公開了一種從甜菊糖中提取高純度萊鮑迪A甙的方法相比較，用甲醇與異丙醇混合溶劑溶解原料甜菊糖進(jìn)行重結(jié)晶，結(jié)晶溫度需-18°C，結(jié)晶時(shí)間為24h，對(duì)結(jié)晶晶體還需要重結(jié)晶過程；并且要求晶體用純水溶解后再膜分離才能獲得甜菊甙A3含量90%。從エ藝上簡(jiǎn)化重結(jié)晶、膜分離等技術(shù)操作，從結(jié)晶時(shí)間上節(jié)省了 22h，從結(jié)晶溫度上提高了結(jié)晶溫度，無需添加昂貴的制冷設(shè)備，減少了生產(chǎn)成本。實(shí)施例2 :原料為甜菊甙A3純度大于40% (重量)甜菊總甙混合物，其中甜菊甙A3含量40 %，甜菊甙含量50 %，甜菊雙糖甙含量5 %，甜菊甙B含量3 %，甜菊甙C含量2 %。甜菊甙A3的甜度為蔗糖的350 400倍，口味純正，沒有后苦味。甜菊甙A3純度越高，售價(jià)越高。ー種從甜菊甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，包括如下步驟(I)混合溶劑配置按體積比為水こ醇甲醇=0.3 1.6 I的比例將水、こ醇和甲醇混合，配置混合溶劑；
(2)結(jié)晶在250ml燒杯中，按甜菊總甙混合物原料與混合溶劑的固液質(zhì)量體積比為Ig : 5ml的比例稱取的原料10. 0g、混合溶劑50ml ;室溫下,轉(zhuǎn)速為IOOrpm磁力攪拌下攪拌溶解30min ;按原料中甜菊甙A3總重量I %的比例在燒杯中添加甜菊甙A3晶種(該甜菊甙A3晶種純度為99%，購(gòu)制于上海西寶生物科技有限公司)。所得溶液置于15°C ±1°C攪拌結(jié)晶，晶體析出時(shí)間為6h,在轉(zhuǎn)速為3000rpm條件下離心分離6min,得晶體；通過離心可以將液體除去，得到晶體；(3)分離所得晶體用50mlこ醇(95 %，體積百分比)洗滌3次，每次洗滌后均在3000rpm離心分離6min，得到甜菊甙A3重量為2. 72g，計(jì)算回收率為68%，其中回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；通過HPLC測(cè)定甜菊甙A3的純度為82%。分離的母液收集后另行處理回收。所得甜菊甙A3用50ml的無水甲醇洗滌后，再3000rpm離心分離6min,晶體用無水甲醇50ml洗漆兩次，以進(jìn)ー步除去所含雜質(zhì)。然后在真空度為-0. 04MPA下進(jìn)行真空干燥10h。干燥后獲得甜菊式A3重量為2. OOg,計(jì)算得甜菊甙A3的回收率為50%，甜菊甙A3的回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；HPLC測(cè)定所得甜菊甙A3的純度為97. 5%，產(chǎn)品密封待用。實(shí)施例3原料為甜菊甙A3重量含量大于40%甜菊總甙混合物，其中，甜菊甙A3含量90%，甜菊甙含量7 %，甜菊雙糖甙含量I %，甜菊甙B含量I %，甜菊甙C含量I %。甜菊甙A3的甜度為蔗糖的350 400倍，口味純正，沒有后苦味。甜菊甙A3純度越高，售價(jià)越高。一種從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，包括如下步驟(I)混合溶劑配置按體積比為水こ醇甲醇=0.8 3 I的比例將水、こ醇和甲醇混合，配置混合溶剤；(2)結(jié)晶在250ml燒杯中，按甜菊總甙混合物原料與混合溶劑的固液質(zhì)量體積比為Ig : 3ml的比例稱取的原料10. 0g、混合溶劑30ml ;室溫下,轉(zhuǎn)速為60rpm磁力攪拌下攪拌溶解IOmin ;按原料中甜菊甙A3總重量3%的比例在燒杯中添加甜菊甙A3晶種(該甜菊甙A3晶種純度為99%，購(gòu)制于上海西寶生物科技有限公司)。所得溶液置于20°C ±1°C攪拌結(jié)晶，晶體析出時(shí)間為4h,在轉(zhuǎn)速為2500rpm條件下離心分離8min,得晶體；通過離心可以將液體除去，得到晶體；(3)分離所得晶體用50ml無水こ醇洗滌兩次，每次洗滌后均在2500rpm離心分離8min，得到甜菊甙A3重量為6. 12g，計(jì)算回收率為65%，其中回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；通過HPLC測(cè)定甜菊甙A3的純度為86 %。分離的母液收集后另行處理回收。所得甜菊甙A3用IOml的無水甲醇洗滌后，再2500rpm離心分離8min,晶體用無水甲醇IOml洗滌兩次，以進(jìn)一歩除去所含雜質(zhì)。然后在真空度為_0. 02MPA下進(jìn)行真空干燥10h。干燥后獲得甜菊甙A3重量為4. 32g，計(jì)算得甜菊甙A3的回收率為48%，甜菊甙A3的回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；HPLC測(cè)定所得甜菊甙A3的純度為95. 2%，產(chǎn)品密封待用。實(shí)施例4原料為甜菊甙A3重量含量大于40%甜菊總甙混合物，其中，甜菊甙A3含量60%，甜菊甙含量30 %，甜菊雙糖甙含量5 %，甜菊甙B含量3 %，甜菊甙C含量2 %。甜菊甙A3的甜度為蔗糖的350 400倍，口味純正，沒有后苦味。甜菊甙A3純度越高，售價(jià)越高。
一種從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，包括如下步驟(I)混合溶劑配置按體積比為水こ醇甲醇=0.6 2 I的比例將水、こ醇和甲醇混合，配置混合溶剤；(2)結(jié)晶在250ml燒杯中，按甜菊總甙混合物原料與混合溶劑的固液質(zhì)量體積比為Ig : 5ml的比例稱取的原料10. 0g、混合溶劑50ml ;室溫下,轉(zhuǎn)速為60rpm磁力攪拌下攪拌溶解15min ;按原料中甜菊甙A3總重量2%的比例在燒杯中添加甜菊甙A3晶種(該甜菊甙A3晶種純度為99%，購(gòu)制于上海西寶生物科技有限公司)。所得溶液置于10°C ±1°C攪拌結(jié)晶，晶體析出時(shí)間為5h,在轉(zhuǎn)速為2000rpm條件下離心分離15min,得晶體；通過離心可以將液體除去，得到晶體；(3)分離所得晶體用50mlこ醇(95%，體積百分比)洗滌I次，毎次洗滌后均在2000rpm離心分離15min，得到甜菊甙A3重量為4. 26g，計(jì)算回收率為71%，其中回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；通過HPLC測(cè)定甜菊甙A3的純度為85%。分離的母液收集后另行處理回收。所得甜菊甙A3用30ml的無水甲醇洗滌后，再2000rpm離心分離15min,晶體用無水甲醇30ml洗漆I次，以進(jìn)ー步除去所含雜質(zhì)。然后在真空度為-0. 03MPA下進(jìn)行真空干燥10h。干燥后獲得甜菊甙A3重量為3. 24g，計(jì)算得甜菊甙A3的回收率為54%，甜菊甙A3的回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；HPLC測(cè)定所得甜菊甙A3的純度為99. 2%，產(chǎn)品密封待用。實(shí)施例5原料為甜菊甙A3重量含量大于40%甜菊總甙混合物，其中，甜菊甙A3含量75%，甜菊甙含量20 %，甜菊雙糖甙含量I %，甜菊甙B含量3 %，甜菊甙C含量I %。甜菊甙A3的甜度為蔗糖的350 400倍，口味純正，沒有后苦味。甜菊甙A3純度越高，售價(jià)越高。一種從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，包括如下步驟(I)混合溶劑配置按體積比為水こ醇甲醇=0.2 2 I的比例將水、こ醇和甲醇混合，配置混合溶剤；(2)結(jié)晶在250ml燒杯中，按甜菊總甙混合物原料與混合溶劑的固液質(zhì)量體積比為Ig : 4mI的比例稱取的原料10. 0g、混合溶劑40ml ;室溫下,轉(zhuǎn)速為60rpm磁力攪拌下攪拌溶解30min ;按原料中甜菊甙A3總重量5 %的比例在燒杯中添加甜菊甙A3晶種(該甜菊甙A3晶種純度為99%，購(gòu)制于上海西寶生物科技有限公司)。所得溶液置于4°C ±1°C攪拌結(jié)晶，晶體析出時(shí)間為2h,在轉(zhuǎn)速為3000rpm條件下離心分離IOmin,得晶體；通過離心可以將液體除去，得到晶體；(3)分離所得晶體用50ml無水こ醇洗滌3次，每次洗滌后均在3000rpm離心分離lOmin，得到甜菊甙A3重量為4. 95g，計(jì)算回收率為66%，其中回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；通過HPLC測(cè)定甜菊甙A3的純度為90%。分離的母液收集后另行處理回收。所得甜菊甙A3用50ml的無水甲醇洗滌I次后，再3000rpm離心分離lOmin。然后在真空度為-0. 04MPA下進(jìn)行真空干燥10h。干燥后獲得甜菊甙A3重量為4. 65g，計(jì)算得甜菊甙A3的回收率為62 %，甜菊甙A3的回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；HPLC測(cè)定所得甜菊甙A3的純度為99. 9 %，產(chǎn)品密封待用。實(shí)施例6原料為甜菊甙A3重量含量大于40%甜菊總甙混合物，其中，甜菊甙A3含量50%，甜菊甙含量45 %，甜菊雙糖甙含量I %，甜菊甙B含量2 %，甜菊甙C含量2 %。甜菊甙A3 的甜度為蔗糖的350 400倍，口味純正，沒有后苦味。甜菊甙A3純度越高，售價(jià)越高。一種從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，包括如下步驟(I)混合溶劑配置按體積比為水こ醇甲醇=0.5 I I的比例將水、こ醇和甲醇混合，配置混合溶剤；(2)結(jié)晶在250ml燒杯中，按甜菊總甙混合物原料與混合溶劑的固液質(zhì)量體積比為Ig : 5ml的比例稱取的原料10. Og、混合溶劑50ml ;室溫下,轉(zhuǎn)速為60rpm磁力攪拌下攪拌溶解30min ;按原料中甜菊甙A3總重量5%的比例在燒杯中添加甜菊甙A3晶種(該甜菊甙A3晶種純度為99%，購(gòu)制于上海西寶生物科技有限公司)。所得溶液置于20°C ±1°C攪拌結(jié)晶，晶體析出時(shí)間為5h,在轉(zhuǎn)速為2000rpm條件下離心分離IOmin,得晶體；通過離心可以將液體除去，得到晶體；(3)分離所得晶體用50mlこ醇(95 %，體積百分比)洗滌3次，每次洗滌后均在2000rpm離心分離lOmin，得到甜菊甙A3重量為3. 25g，計(jì)算回收率為65%，其中回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；通過HPLC測(cè)定甜菊甙A3的純度為90%。分離的母液收集后另行處理回收。所得甜菊甙A3用30ml的無水甲醇洗滌后,再3000rpm離心分離6min,晶體用無水甲醇30ml洗漆2次，以進(jìn)ー步除去所含雜質(zhì)。然后在真空度為-0. 02MPA下進(jìn)行真空干燥10h。干燥后獲得甜菊式A3重量為2. 90g,計(jì)算得甜菊甙A3的回收率為58%，甜菊甙A3的回收率計(jì)算為實(shí)際得到的甜菊甙A3重量除以原料中的甜菊甙A3重量；HPLC測(cè)定所得甜菊甙A3的純度為98. 9%，產(chǎn)品密封待用。
權(quán)利要求
1.一種從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，其特征在于包括如下步驟 (1)混合溶劑配制按體積比為水こ醇甲醇=0.2 0. 8 I 3 I的比例將水、こ醇和甲醇混合，配制混合溶劑； (2)結(jié)晶按甜菊總甙混合物原料與混合溶劑的固液質(zhì)量體積比為Ig 3ml Ig 5ml的比例將甜菊總甙混合物原料和混合溶劑加入到容器中混合，室溫下攪拌溶解10 30min，添加甜菊甙A3晶種，在溫度為4°C 20°C攪拌2 6h后離心分離，獲得晶體產(chǎn)物；甜菊甙A3晶種為純度大于99%的甜菊甙A3，甜菊甙A3晶種的用量為甜菊總甙混合物原料中甜菊甙A3重量的I 5% ;所述甜菊總甙混合物原料為甜菊甙A3重量含量大于40%的甜菊總甙混合物； (3)分離所得晶體產(chǎn)物用無水こ醇洗滌后離心分離，再用無水甲醇洗滌；離心分離后，真空干燥，得甜菊甙A3產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，其特征在于以質(zhì)量百分比計(jì)，所述甜菊總甙混合物原料中甜菊甙A3含量40 90 %，甜菊甙含量7 50%，甜菊雙糖甙含量I 5%，甜菊甙B含量I 3%，甜菊甙C含量I 2%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，其特征在于所述こ醇為體積濃度大于95%的こ醇水溶液或者無水こ醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，其特征在于所述離心分離條件為2000 3000rpm轉(zhuǎn)速下,離心6 15min。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，其特征在于所述真空干燥為在真空度為-0. 04 -0. 02MPA下進(jìn)行。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，其特征在干所述無水甲醇洗滌中，晶體與無水甲醇料液質(zhì)量體積比為Ig Iml Ig 5ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，其特征在于所述無水甲醇洗滌的次數(shù)為1-3次。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從甜菊總甙混合物中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法，其特征在于所述こ醇洗滌的次數(shù)為1-3次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從甜菊總甙中結(jié)晶分離甜菊甙A3的方法。該方法先配置混合溶劑，然后按甜菊總甙混合物原料與混合溶劑的固液質(zhì)量體積比為1g∶3ml～1g∶5ml的比例將甜菊總甙混合物原料和混合溶劑加入到容器中混合，室溫下攪拌溶解10～30min，添加甜菊甙A3晶種，在溫度為4C～20℃攪拌2～6h后離心分離，獲得晶體產(chǎn)物；所得晶體產(chǎn)物用無水乙醇洗滌后離心分離，再用無水甲醇洗滌；離心分離后，真空干燥，得甜菊甙A3產(chǎn)品。本發(fā)明制備的甜菊甙A3是從甜菊總甙中采用結(jié)晶分離技術(shù)，獲得了純度在95-99.9％甜菊甙A3。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單易行，且能耗低，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H1/06GK102775453SQ20121020831
公開日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2012年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月21日
發(fā)明者左鋒, 張麗萍, 錢麗麗 申請(qǐng)人:黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)