專利名稱：一種從長(zhǎng)柄石杉中提取石杉?jí)A甲的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是以貴州省六枝地區(qū)產(chǎn)的長(zhǎng)柄石杉為原料首次分離到生物堿石杉?jí)A甲的制備方法。石杉?jí)A甲易透過血腦屏障，對(duì)腦內(nèi)乙酰膽堿脂酶(AchE)具有強(qiáng)效抑制作用，明顯提高腦內(nèi)乙酰膽堿水平，促進(jìn)學(xué)習(xí)、記憶過程或明顯改善記憶障礙的作用。
背景技術(shù)：
長(zhǎng)柄石杉//uperziaserrata f. Iongipetiolata (Spring) Ching 系石杉科石杉屬蕨類植物蛇足石杉的一變種。分布于我國(guó)西南地區(qū)貴州、四川、重慶、云南等地海拔300-1900米的山坡、河谷、溪邊、林下、林緣或灌叢下。具散瘀消腫、止血生肌、清熱解毒功效，民間用于滅虱、滅臭蟲和治療蛇咬傷等。[《貴州藥用蕨類植物》.[M],貴州貴陽(yáng)貴 州科技出版社，2012，32·]。石杉?jí)A甲(Huperzine A)，又稱福定堿，為我國(guó)科學(xué)家從民間草藥“千層塔”[蛇足石杉，Huperzia serrata (Thunb. ex Murray) Trev]中分離得到的石松生物喊。該化合物是一種強(qiáng)效、高選擇性并具有可逆性的乙酰膽堿酯酶抑制劑，對(duì)早老性癡呆、單純性記憶障礙及重癥肌無力等癥狀具有顯著的療效，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床。目前，雖然石杉?jí)A甲可以通過化學(xué)合成的方法獲得，但其效率低、毒性大、成本高。因此，石杉?jí)A甲仍主要從自然資源中獲得。石杉喊甲(HuperzineA):化學(xué)名為(5R, 9R, 11E) _5_ 氨基-11 亞乙基 _5，8,9，10-四氫-7-甲基-5，9亞甲基環(huán)辛四烯并[幻吡啶-2 (IH)-酮，分子式為C15H18N2O,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.一種從長(zhǎng)柄石杉中提取石杉?jí)A甲的新方法，其特征是依次按下列步驟制備 (1)提取液的制備 將自然干燥的長(zhǎng)柄石杉樣品粉碎后，用乙醇水加熱回流提取，重復(fù)提取數(shù)次，收集提取液； (2)提取液的凈化 將提取液減壓濃縮回收乙醇，濃縮液用HCl水溶液調(diào)pH至2-3，用乙酸乙酯數(shù)次萃取，除去雜質(zhì)；有機(jī)相乙酸乙酯棄去或回收，酸水相即為凈化提取液； (3)長(zhǎng)柄石杉總生物堿的制備 將凈化提取液用氨水調(diào)PH至9-10，用氯仿萃取數(shù)次，合并氯仿萃取液，減壓蒸餾除去氯仿得長(zhǎng)柄石杉總生物堿； (4)石杉?jí)A甲粗品的制備 將長(zhǎng)柄石杉總生物堿用MPLC (RP-18)法，以甲醇水為溶劑系統(tǒng)進(jìn)行洗脫，先用水洗脫，除去水溶性成分,再用5-30%v/v的甲醇水洗脫，通過HPLC檢測(cè)合并含有石杉?jí)A甲的組分，濃縮、真空干燥得淡黃色固體，即為石杉?jí)A甲粗品； (5)高純度石杉?jí)A甲的制備 加適量丙酮或乙醇于上述石杉?jí)A甲粗品中，加熱使其溶解并趁熱過濾，濾液于室溫下結(jié)晶，如此反復(fù)重結(jié)晶數(shù)次，使石杉?jí)A甲純度為98-99%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從長(zhǎng)柄石杉中提取石杉?jí)A甲的新方法，其特征是各步驟工藝條件是 (1)提取液的制備 將自然干燥的長(zhǎng)柄石杉樣品粉碎至20-80目，加入10-20倍重的20-60% v/v乙醇水，75°C加熱回流提取3-5小時(shí)，重復(fù)提取3-4次，收集提取液備用； (2)提取液的凈化 將提取液減壓濃縮至原體積的8-15%，濃縮液用5%。v/v的HCl水溶液調(diào)pH至2_3，用等體積乙酸乙酯萃取3-4次，除去雜質(zhì)；有機(jī)相乙酸乙酯棄去或回收，酸水相即為凈化提取液； (3)長(zhǎng)柄石杉總生物堿的制備 將凈化提取液用I :l(v/v)的氨水調(diào)PH至9-10，用等體積的氯仿萃取4-5次，合并氯仿萃取液，減壓蒸餾除去氯仿得長(zhǎng)柄石杉總生物堿； (4)石杉?jí)A甲粗品的制備 將長(zhǎng)柄石杉總生物堿用MPLC (RP-18)法，以甲醇水為溶劑系統(tǒng)進(jìn)行洗脫，先用水洗脫，除去水溶性成分，再用5-30% v/v的甲醇水洗脫，通過HPLC檢測(cè)合并含有石杉?jí)A甲的組分，將甲醇水洗脫液濃縮、真空干燥得淡黃色固體，即為石杉?jí)A甲粗品； (5)高純度石杉?jí)A甲的制備 加適量丙酮或乙醇于上述石杉?jí)A甲粗品中，加熱使其溶解并趁熱過濾，濾液于室溫下結(jié)晶，如此反復(fù)重結(jié)晶2-3次,使石杉?jí)A甲純度為98-99%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種從長(zhǎng)柄石杉中提取石杉?jí)A甲的新方法，其特征是各步驟工藝條件是 (I)提取液的制備將自然干燥的長(zhǎng)柄石杉樣品粉碎至40目，加入20倍重的20% v/v乙醇水，于75°C水浴加熱回流提取提取3次，第I次5小時(shí)，第2次4小時(shí)，第3次4小時(shí)，合并3次提取液； (2)提取液的凈化 上述提取液于50°C下減壓濃縮至原體積的10%，濃縮液用5%。v/v的HCl水溶液調(diào)pH至2-3，用等體積乙酸乙酯萃取3次，除去雜質(zhì)；有機(jī)相乙酸乙酯棄去或回收，酸水相即為凈化提取液； (3)長(zhǎng)柄石杉總生物堿的制備 將凈化提取液用I :l(v/v)的氨水調(diào)PH至9-10，用等體積的氯仿萃取4次，合并氯仿萃取液，減壓蒸餾除去氯仿得長(zhǎng)柄石杉總生物堿； (4)石杉?jí)A甲粗品的制備 將長(zhǎng)柄石杉總生物堿用MPLC (RP-18)法，以甲醇水為溶劑系統(tǒng)進(jìn)行洗脫，先用水洗脫，除去水溶性成分，再用5-30% v/v的甲醇水洗脫，通過HPLC檢測(cè)合并含有石杉?jí)A甲的組分，將甲醇水洗脫液濃縮、真空干燥得淡黃色固體，即為石杉?jí)A甲粗品； (5)高純度石杉?jí)A甲的制備 加適量丙酮或乙醇于上述石杉?jí)A甲粗品中，加熱使其溶解并趁熱過濾，濾液于室溫下結(jié)晶，如此反復(fù)重結(jié)晶3次,使石杉?jí)A甲純度為98-99%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的一種從長(zhǎng)柄石杉中提取石杉?jí)A甲的新方法，其特征是步驟(3)-(5)所用試劑為分析純AR，水為蒸餾水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的一種從長(zhǎng)柄石杉中提取石杉?jí)A甲的新方法，其特征是MPLC (RP-18)法所用的中壓柱為江蘇利穗(蘇州)科技公司生產(chǎn)，編號(hào)S-1101-3000 ;柱規(guī)格內(nèi)徑 156mm、高度 410mm、體積 7800 (mm)3。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的一種從長(zhǎng)柄石杉中提取石杉?jí)A甲的新方法，其特征是步驟(5)重結(jié)晶所用的溶劑為丙酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從蕨類植物長(zhǎng)柄石杉Huperziaserrataf.longipetiolata(Spring)Ching中提取石杉?jí)A甲的新方法，涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明依次采用下列技術(shù)方案(1)提取液的制備；(2)提取液的凈化；(3)長(zhǎng)柄石杉總生物堿的制備；(4)石杉?jí)A甲粗品的制備；(5)高純石杉?jí)A甲的制備。以上方法得到石杉?jí)A甲白色固體純度98%-99%。上述技術(shù)提取石杉?jí)A甲的優(yōu)點(diǎn)(1)以新資源長(zhǎng)柄石杉為原料，擴(kuò)展了單一從蛇足石杉中提取石杉?jí)A甲的藥材來源及技術(shù)方法；(2)采用20%-60%乙醇水提取，對(duì)儀器設(shè)備損害小，毒副作用低；(3)通過反相MPLC法富集石杉?jí)A甲，成本低、純度高、得率高，易于規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D221/22GK102863381SQ20121039694
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月18日
發(fā)明者張敬杰, 趙勤實(shí), 吳興德, 劉亞華, 李齊激, 潘爐臺(tái) 申請(qǐng)人:貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院