一種分離純化epa和dha的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種分離純化EPA和DHA的制備方法，采用含EPA和DHA混合物的魚油提取物粗品為原料，通過SFC優(yōu)化條件得到合適的流動相和色譜柱分離條件，進一步放大到半制備SFC分離系統(tǒng)，得到EPA和DHA單體。本發(fā)明的優(yōu)點是，由魚油中提取的EPA和DHA混合物粗品直接使用半制備SFC分離系統(tǒng)獲得EPA和DHA單體，即可達到較好的分離純化效果，操作簡單，周期短，效率高，純度可達99.2%以上，單雜可控制在0.2%以下。
【專利說明】—種分離純化EPA和DHA的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及海洋生物中脂肪、油等生物分子提取分離【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種分離純化EPA和DHA的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]1978年Dyerberg等首次報道格陵蘭愛斯基摩人的心血管發(fā)病率低與食魚有關(guān)，魚油中EPA和DHA引起了人們的重視。大量研究證實，EPA、DHA具有降血脂、抗血小板聚集、緩和血栓形成、保護腦血管等作用，尤其是DHA還可以增加大腦功能，提高辨別力，增強記憶力和注意力。在大腦和視網(wǎng)膜上DHA還可通過膜聯(lián)蛋白的活性對神經(jīng)細胞核視網(wǎng)膜光感受中的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生作用，這有助于胎兒、嬰幼兒大腦椎體細胞核視網(wǎng)膜桿細胞生長、發(fā)育，孕婦服用DHA有助于胎兒腦細胞發(fā)育，特別是早產(chǎn)兒服用DHA以維護其視桿細胞的正常發(fā)育，保證不致產(chǎn)生由于缺少DHA所造成的視力減弱的遺憾。由于EPA、DHA的功效顯著，含DHA、EPA的產(chǎn)品大量上市，但現(xiàn)售產(chǎn)品由于含量不高，雜質(zhì)較多，服用后會引起過氧化物中毒、腹瀉、消化不良，兒童服用會引起性早熟，服用劑量大等副作用，尤其不利于嬰幼兒服用。
[0003]為了提高EPA、DHA純度，國內(nèi)外學(xué)者和生產(chǎn)廠家進行了廣泛地研究?，F(xiàn)在主要的分離方法有:脂肪酶法、低溫結(jié)晶法、金屬鹽沉淀法、減壓分餾法、硝酸銀溶液萃取法等。但是，以上現(xiàn)有技術(shù)中 的方法或因成本較高或因操作復(fù)雜都不能輕易的到高純度的DHA、EPA
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對目前在分離純化DHA、EPA過程中所存在的成本高、操作復(fù)雜以及純度不高的問題，提供一種采用半制備SFC分離系統(tǒng)制備高純度DHA、EPA單體的新方法，該方法包括以下步驟:
a.將含EPA和DHA混合物的魚油提取物粗品用甲醇或乙醇溶解，樣品濃度為l_200mg/ml，具體實施時，可根據(jù)實際溶解效果進行調(diào)整，過濾除去微小的固體不溶物，得到濾液作為分離粗品；
b.采用分析型SFC優(yōu)化EPA和DHA單體的最佳分離洗脫條件，將其等比例放大，應(yīng)用在填充硅膠填料的色譜柱上進行分離，在線收集EPA、DHA對應(yīng)譜帶的餾分；
c.將步驟b中收集的EPA、DHA對應(yīng)譜帶的洗脫液中的溶劑蒸干，即可得到色譜純?yōu)?9.2% 的 EPA、DHA0
[0005]本發(fā)明的有益效果是可直接采用含EPA和DHA混合物的魚油提取物粗品來制備EPA、DHA單體，使用CO2作為主要流動相，綠色環(huán)保，不用或使用少量有機試劑作為改性劑，生產(chǎn)成本低，且后處理簡單，適用于大規(guī)模制備。
【具體實施方式】[0006]實施例1
1.取含EPA和DHA混合物的魚油提取物粗品，甲醇溶解，樣品溶度為5mg/ml，置于過濾裝置中，過濾除去固體顆粒；
2.將樣品溶液注入半制備SFC分離系統(tǒng)，色譜柱尺寸為Φ10Χ250πιπι，C18填料，粒徑為5~45um，上樣量10mg，CO2流速為0.8~3.0ml/min,甲醇作為改性劑，流速為(T0.5ml/min,溫度為40°C，背壓為iTl5MPa。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為210nm，收集保留時間在5~27min (與EPA對應(yīng))和6~30min (與DHA對應(yīng))的餾分，經(jīng)HPLC分析純度≥99.8%。
[0007]實施例2
1.取含EPA和DHA混合物的魚油提取物粗品，甲醇溶解，樣品溶度為10mg/ml，置于過濾裝置中，過濾除去固體顆粒；
2.將樣品溶液注入半制備SFC分離系統(tǒng)，色譜柱尺寸為Φ10Χ250πιπι，C18填料，粒徑為5~45um，上樣量20mg，CO2流速為1.0~5.0ml/min,甲醇作為改性劑，流速為(Tl.0ml/min,溫度為40°C，背壓為iTl5MPa。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為210nm，收集保留時間在5~25min (與EPA對應(yīng))和6~30min (與DHA對應(yīng))的餾分，經(jīng)HPLC分析純度≥99.5%。
[0008]實施例3 1.取含EPA和DHA混合物的魚油提取物粗品，甲醇溶解，樣品溶度為10mg/ml，置于過濾裝置中，過濾除去固體顆粒；
2.將樣品溶液注入半制備SFC分離系統(tǒng)，色譜柱尺寸為Φ25X250mm，C18填料，粒徑為5~45um，上樣量50mg，CO2流速為1.0-l0.0ml/min,甲醇作為改性劑，流速為0~2.0ml/min,溫度為40°C，背壓為l(Tl8MPa。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為210nm，收集保留時間在5~25min (與EPA對應(yīng))和6~30min (與DHA對應(yīng))的餾分，經(jīng)HPLC分析純度≥99.7%。
【權(quán)利要求】
1.一種分離純化EPA和DHA的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將含EPA和DHA混合物的魚油提取物粗品用甲醇或乙醇溶解，過濾除去微小的固體不溶物，得到濾液作為分離粗品； (2)將過濾產(chǎn)物通過進樣泵或者進樣閥注入半制備SFC分離系統(tǒng)； (3)采用CO2和改性劑做流動相，調(diào)節(jié)系統(tǒng)溫度、壓力等條件，等度洗脫得到EH)和DHA單體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述步驟(1)中，配制含EPA和DHA混合物的魚油提取物粗品的濃度為l_200mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述步驟(2)中，在半制備SFC分離系統(tǒng)中，采用色譜柱的規(guī)格:內(nèi)徑l(T300mm、長度15(T300mm，且所填充固定相為硅膠填料。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述步驟(3)中，采用等度洗脫時，甲醇或乙醇作為改性劑，流動相中CO2與改性劑的體積比(V/V)范圍為100Α80/20。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述步驟(3)中，系統(tǒng)溫度范圍為300C~90°C，壓力范圍為9MPa~2OMPa。
【文檔編號】C07C51/47GK103787862SQ201210425297
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2012年10月31日
【發(fā)明者】王冰冰, 劉根水, 張大兵 申請人:江蘇漢邦科技有限公司