制備型高效液相色譜法制備epa的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種制備型高效液相色譜法提純EPA的方法。該方法采用反相硅膠作為DAC制備柱填料，甲醇和水的混合溶劑為流動相的方法分離純化了EPA，分離工藝簡單，提取率高，所得產(chǎn)品純度高，無污染，適用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】制備型高效液相色譜法制備EPA的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是動態(tài)軸向壓縮柱分離純化EPA的方法，具體是采用動態(tài)軸向壓縮制備柱進行分離純化EPA的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]二十碳五烯酸(EPA),化學名稱為5、8、11、14、17-全順-二十碳五烯酸,屬于ω-3系列不飽和脂肪酸，是人體重要不飽和脂肪酸，具有重要的生理活性功能，在治療和防治心腦血管疾病、炎癥、抑制腫瘤以及預防老年癡呆等方面具有良好的療效。二十碳五烯酸的開發(fā)應用已受到世界各國科學家的關(guān)注與重視。傳統(tǒng)的分離方法有有機溶劑萃取、高效液相層析等，最近又有尿素包合法、真空蒸餾法、分子蒸餾法、低溫結(jié)晶法以及超臨界流體分離法，這些方法中大多存在著產(chǎn)品純度低、成本高、工藝復雜等缺點。
[0003]隨著制藥、生物化工等行業(yè)的迅速發(fā)展，制備型液相色譜分離技術(shù)得到越來越廣泛的開發(fā)和應用，已成為分離和純化復雜混合物的重要方法，尤其適用于天然產(chǎn)物的分離。動態(tài)軸向壓縮(DAC)法具有多方面的優(yōu)越性，因而得到了更為深入的研究和發(fā)展。動態(tài)軸向壓縮柱的核心技術(shù)是通過活塞的上下運動來裝柱、維持柱壓和卸柱，簡化了大直徑色譜柱的填卸過程，填裝的色譜柱性能穩(wěn)定、效率高。DAC柱柱效高，重復性好，填裝所用的時間短，可以采用粒徑更小的填料，減小柱長，增加柱徑，從而減小管壁效應，得到幾乎接近分析柱的柱效。
[0004]本發(fā)明采用反相動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜法分離純化了 ΕΡΑ，分離工藝簡單，提取率高，所得產(chǎn)品純度高，無污染，適用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種用動態(tài)軸向壓縮柱分離純化EPA的生產(chǎn)方法，包括樣品溶解、動態(tài)軸向壓縮柱分離、重結(jié)晶以及成品的純度檢測。
[0006]本發(fā)明為實現(xiàn)上述發(fā)明目的采用如下步驟:
a、樣品的溶解:EPA粗品用甲醇溶解，過濾，備用；
b、流動相的配制:流動相采用甲醇與水的混合溶劑，甲醇的濃度為80-95%之間；
c、DAC柱分離:用進樣泵向填裝好填料的動態(tài)軸向壓縮柱中泵入上述溶解的樣品溶液，再用步驟b配制好的流動相洗脫，收集目標成分，取樣HPLC檢測；
d、濃縮:將c步驟中收集 到的目標組分進行濃縮處理，得到EPA純品；
e、成品的純度檢測:泵:NewstyleNP7000型泵；色譜柱(0DS填料4.6*250mm, 5 μ m);檢測器:漢邦紫外檢測器NewStyleNU3000，檢測波長:210nm，檢測溫度:室溫；流動相:甲醇:水=90:10,流速:1.0mL/min
【具體實施方式】
[0007]實施方案一1、樣品的溶解:EPA粗品用甲醇溶解，濃度為200g/mL，過濾，備用；
2、流動相的配制:流動相為甲醇:水=87:13；
3、DAC柱分離:用進樣泵向填裝好粒徑為20um填料的動態(tài)軸向壓縮柱(50*500mm)中泵入樣品溶液，進樣流速為60mL/min,用流動相洗脫,流速為100mL/min,收集目標成分,取樣HPLC檢測；
4、濃縮:將收集到的目標組分進行濃縮處理，得到EPA純品，經(jīng)HPLC檢測純度為98.8%。
[0008]實施方案二
1、樣品的溶解=EPA粗品用甲醇溶解，濃度400g/mL，過濾，備用；
2、流動相的配制:流動相為甲醇:水=88:12；
3、DAC柱分離:用進樣泵向填裝好粒徑為20um填料的動態(tài)軸向壓縮柱(50*500mm)中泵入樣品溶液，進樣流速為60mL/min,用流動相洗脫,流速為100mL/min,收集目標成分,取樣HPLC檢測；
4、濃縮:將收集到的目標組分進行濃縮處理，得到EPA純品，經(jīng)HPLC檢測純度為98.5%。
[0009]實施方案三
1、樣品的溶解=EPA粗品用甲醇溶解，濃度為500g/mL，過濾，備用；
2、流動相的配制:流動相為甲醇:水=88:12；
3、DAC柱分離:用進樣泵向填裝`好粒徑為20um填料的動態(tài)軸向壓縮柱(50*500mm)中泵入樣品溶液，進樣流速為60mL/min,用流動相洗脫,流速為80mL/min,收集目標成分,取樣HPLC檢測；
4、濃縮:將收集到的目標組分進行濃縮處理，得到EPA純品，經(jīng)HPLC檢測純度為98.6%。
[0010]上述實施實例用來解釋說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明進行限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)利要求的保護范圍內(nèi)，對本發(fā)明做出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種分離純化EPA的方法，包括: a、樣品的溶解:將EPA粗品用甲醇溶解，過濾，備用； b、流動相的配制:流動相采用甲醇與水的混合溶劑，甲醇的濃度為80-95%之間； C、上柱洗脫:用進樣泵向裝好填料的動態(tài)軸向壓縮制備柱中泵入步驟a溶解好的樣品，再用步驟b配制好的流動相洗脫，收集目標成分，取樣用HPLC檢測純度； d、濃縮:對收集到的目標組分進行濃縮處理，得EPA純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于a步驟樣品的濃度在0-500mg/mL之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于c步驟中采用單針上柱吸附、解析并進行分段收集；或采用多針分批連續(xù)方式上柱、解析的連續(xù)進樣方式，且對每批解析液進行分段收集。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采用的動態(tài)軸向壓縮柱為50-1000mm各系列不同直徑的制備柱，所述填料為C18或C8，填料粒徑為20-40um。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于c步驟樣品溶液的上樣流速為0.02BV/mirT0.10BV/min，洗脫流速為 0.10 BV/mirT0.20BV/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的 方法，其特征在于d步驟濃縮時的溫度不能高于40°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求f6任一項所述的方法，其特征在于重復進行c步驟，直到所得EPA用HPLC檢測含量達到98%以上。
【文檔編號】C07C57/03GK103787863SQ201210430958
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年11月2日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月2日
【發(fā)明者】張大兵, 張寧, 羅軍俠, 劉玉明, 李勝迎 申請人:江蘇漢邦科技有限公司