制備型高效液相色譜法分離純化蘆薈苷的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種天然產(chǎn)物的提純方法，具體來說，本發(fā)明涉及一種制備高純度蘆薈苷的方法及其工藝。采用乙醇加熱回流提取，反相硅膠作為DAC制備柱填料，甲醇和水的混合溶劑為流動(dòng)相的方法分離純化了蘆薈苷，分離工藝簡(jiǎn)單，提取率高，所得產(chǎn)品純度高，無污染，適用于蘆薈苷的提取分離制備。
【專利說明】制備型高效液相色譜法分離純化蘆薈苷
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱分離純化蘆薈苷的方法，具體是采用加熱回流提取、動(dòng)態(tài)軸向壓縮制備柱進(jìn)行分離純化的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蘆薈為百合科多年生肉質(zhì)草本植物，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明蘆薈具有愈傷、瀉下、抑殺細(xì)菌、消炎、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、降血糖、降血脂、強(qiáng)心等眾多藥理作用。蘆薈中所含主要的天然活性成分為蘆薈苷，是一種蒽醌類化合物。目前分離蘆薈中各種單體的技術(shù)還不成熟，應(yīng)用的蘆薈產(chǎn)品大多數(shù)是蘆薈提取的混合物，如果能制備性分離蘆薈中的有效成分，應(yīng)用于藥品和保健品中，特別對(duì)醫(yī)療行業(yè)將會(huì)是一個(gè)很有利的發(fā)展方向，因此，能夠建立一種提取分離純化蘆薈苷的方法和技術(shù)，在天然藥物研究中將會(huì)是一大進(jìn)步。
[0003]隨著制藥、生物化工等行業(yè)的迅速發(fā)展，制備型液相色譜分離技術(shù)得到越來越廣泛的開發(fā)和應(yīng)用，已成為分離和純化復(fù)雜混合物的重要方法，尤其適用于天然產(chǎn)物的分離。動(dòng)態(tài)軸向壓縮(DAC)法具有多方面的優(yōu)越性，因而得到了更為深入的研究和發(fā)展。動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱的核心技術(shù)是通過活塞的上下運(yùn)動(dòng)來裝柱、維持柱壓和卸柱，簡(jiǎn)化了大直徑色譜柱的填卸過程，填裝的色譜柱性能穩(wěn)定、效率高。DAC柱柱效高，重復(fù)性好，填裝所用的時(shí)間短，可以采用粒徑更小的填料，減小柱長(zhǎng)，增加柱徑，從而減小管壁效應(yīng)，得到幾乎接近分析柱的柱效。
[0004]本發(fā)明采用乙醇加熱回流提取，反相動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備色譜法分離純化了蘆薈苷，分離工藝簡(jiǎn)單，提取率高，所得產(chǎn)品純度高，無污染，為制備性分離純化蘆薈苷提供了基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種從蘆薈中提取并用動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱分離純化蘆薈苷的生產(chǎn)方法，屬于天然產(chǎn)物的提取分離純化領(lǐng)域，包括醇提取、動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱分離、濃縮以及成品的純度檢測(cè)。
[0006]本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的采用如下步驟:
a、提取:將粉末過篩后置于提取器中，50%乙醇為溶劑，70°C水浴回流lh，提取1-2次，合并提取液，減壓濃縮成稠膏狀；
b、樣品的溶解:a步驟的濃縮物用甲醇與水的混合溶劑溶解，過濾，備用；
C、流動(dòng)相的配制:流動(dòng)相采用步驟b的甲醇與水的混合溶劑，甲醇的濃度為40-60%之
間；
d、DAC柱分離:用進(jìn)樣泵向填裝好填料的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱中泵入上述溶解的樣品溶液，再用步驟c配制好的流動(dòng)相洗脫，收集目標(biāo)成分，取樣HPLC檢測(cè)；
e、濃縮:將d步驟中收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得到蘆薈苷純品；
f、成品的純度檢測(cè):泵:NewstyleNP7000型泵；色譜柱(0DS填料4.6*250mm, 5 μ m);檢測(cè)器:漢邦紫外檢測(cè)器NewStyleNU3000，檢測(cè)波長(zhǎng):359nm，檢測(cè)溫度:室溫；流動(dòng)相:甲醇:水:冰醋酸=42:58:0.5,流速:1.0mL/min。
[0007]
【具體實(shí)施方式】
[0008]實(shí)施方案一
1、提取:將粉末過篩后稱取80g置于提取器中，用1000mL50%乙醇提取，70°C水浴回流lh，提取I次，合并提取液，減壓濃縮成膏；
2、樣品的溶解:濃縮物用流動(dòng)相溶解，濃度為10g/mL，過濾，備用；
3、流動(dòng)相的配制:流動(dòng)相為甲醇:水=42:58；
4、DAC柱分離:用進(jìn)樣泵向填裝好粒徑為20um填料的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱(50*500mm)中泵入樣品溶液，進(jìn)樣流速為60mL/min,用流動(dòng)相洗脫,流速為100mL/min,收集目標(biāo)成分,取樣HPLC檢測(cè)；
5、濃縮:將收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得到蘆薈苷純品，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為98.6%。
[0009]
實(shí)施方案二
1、提取:將粉末過篩后稱取100g置于提取器中，用1200mL50%乙醇提取，70°C水浴回流Ih,提取2次，合并提取液，減壓濃縮成膏；` 2、樣品的溶解:濃縮物用流動(dòng)相溶解，濃度為15g/mL，過濾，備用；
3、流動(dòng)相的配制:流動(dòng)相為甲醇:水=45:55；
4、DAC柱分離:用進(jìn)樣泵向填裝好粒徑為20um填料的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱(50*500mm)中泵入樣品溶液，進(jìn)樣流速為60mL/min,用流動(dòng)相洗脫,流速為80mL/min,收集目標(biāo)成分,取樣HPLC檢測(cè)；
5、濃縮:將收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得到蘆薈苷純品，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為98.8%。
[0010]
實(shí)施方案三
1、提取:將粉末過篩后稱取150g置于提取器中，用1800mL50%乙醇提取，70°C水浴回流Ih,提取2次，合并提取液，減壓濃縮成膏；
2、樣品的溶解:濃縮物用流動(dòng)相溶解，濃度為20g/mL，過濾，備用；
3、流動(dòng)相的配制:流動(dòng)相為甲醇:水=44:56；
4、DAC柱分離:用進(jìn)樣泵向填裝好粒徑為20um填料的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱(50*500mm)中泵入樣品溶液，進(jìn)樣流速為60mL/min,用流動(dòng)相洗脫,流速為80mL/min,收集目標(biāo)成分,取樣HPLC檢測(cè)；
5、濃縮:將收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得到蘆薈苷純品，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為98.5%。
[0011]
上述實(shí)施實(shí)例用來解釋說明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)，對(duì)本發(fā)·明做出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種制備蘆薈苷的方法，包括: a、蘆薈苷粗品的制備:將蘆薈粉末過篩后置于提取器中，40%-60%乙醇為溶劑，70°C水浴回流lh，提取1-2次，合并提取液，減壓濃縮成稠膏狀； b、樣品的溶解:將蘆薈苷粗品用甲醇與水的混合溶劑溶解，過濾，備用； C、流動(dòng)相的配制:流動(dòng)相采用步驟a的甲醇與水的混合溶劑，甲醇的濃度為40-60%之間； d、上柱洗脫:用進(jìn)樣泵向裝好填料的動(dòng)態(tài)軸向壓縮制備柱中泵入步驟b溶解好的樣品，再用步驟c配制好的流動(dòng)相洗脫，收集蘆薈苷，取樣用HPLC檢測(cè)純度； e、濃縮:對(duì)收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得蘆薈苷純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是a步驟中每次回流所用乙醇的濃度為40%-60%，用量為蘆薈粉末的10~20倍量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于b步驟樣品的濃度在5-30g/mL之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于d步驟中采用單針上柱吸附、解析并進(jìn)行分段收集；或采用多針分批連續(xù)方式上柱、解析的連續(xù)進(jìn)樣方式，且對(duì)每批解析液進(jìn)行分段收集。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采用的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱為50-1000mm各系列不同直徑的制備柱，所述填料為C18或C8，填料粒徑為15-40um。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的 方法，其特征在于d步驟樣品溶液的上樣流速為0.02BV/mirT0.10BV/min，洗脫流速為 0.10 BV/mirT0.20BV/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1飛任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于重復(fù)進(jìn)行d步驟，直到所得蘆薈苷HPLC檢測(cè)含量達(dá)到98%以上。
【文檔編號(hào)】C07D309/10GK103788040SQ201210430960
【公開日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2012年11月2日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月2日
【發(fā)明者】張大兵, 張寧, 羅軍俠, 劉玉明, 王亞輝 申請(qǐng)人:江蘇漢邦科技有限公司