一種從含10-去乙?；涂ㄍあ蟮慕喾蛛x和提純10-去乙?；涂ㄍあ蟮姆椒?br> 【專利摘要】一種從含10-去乙?；涂ㄍあ蟮慕喾蛛x和提純10-去乙?；涂ㄍあ蟮姆椒?，涉及分離純化10-去乙?；涂ㄍあ蟮摹炯夹g(shù)領(lǐng)域】，該方法包括如下步驟：萃取、正相層析、結(jié)晶、反相層析和結(jié)晶，本發(fā)明有益效果是既保證了高純度又保證了高收率，萃取用有機(jī)溶劑、層析用填料和層析用有機(jī)溶劑都可以重復(fù)使用。
【專利說明】—種從含10-去乙?；涂ㄍII的浸膏分離和提純10-去乙?；涂ㄍII的方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及分離純化10-去乙酰基巴卡亭III的【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種從含10-去乙?；涂ㄍII的浸膏分離和提純10-去乙?；涂ㄍII的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紫杉醇是紅豆杉屬植物中的一種復(fù)雜的次生代謝產(chǎn)物，也是目前所了解的惟一一種可以促進(jìn)微管聚合和穩(wěn)定已聚合微管的藥物。同位素示蹤表明，紫杉醇只結(jié)合到聚合的微管上，不與未聚合的微管蛋白二聚體反應(yīng)。細(xì)胞接觸紫杉醇后會(huì)在細(xì)胞內(nèi)積累大量的微管，這些微管的積累干擾了細(xì)胞的各種功能，特別是使細(xì)胞分裂停止于有絲分裂期，阻斷了細(xì)胞的正常分裂。通過I1-1II臨床研究，紫杉醇主要適用于卵巢癌和乳腺癌，對(duì)肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。
[0003]10-去乙酰基巴卡亭III可以通過化學(xué)方法轉(zhuǎn)化為紫杉醇，所以制備10-去乙酰基巴卡亭III是有重大的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]現(xiàn)有技術(shù)中如果想得到高純度10-去乙?；涂ㄍII，必然10-去乙酰基巴卡亭III收率會(huì)降低。實(shí)際生產(chǎn)中純度和收率是一對(duì)矛盾。本發(fā)明提供了一種既能保證高純度又能保證高收率的分離和提純10-去乙?；涂ㄍII的方法。
[0005]本發(fā)明提供了一種 從含10-去乙?；涂ㄍII的浸膏分離和提純10-去乙?；涂ㄍII的方法，所述方法包括如下步驟:
[0006]⑴用乙醇水溶液溶解含10-去乙?；涂ㄍII的浸膏；
[0007]⑵用有機(jī)溶劑萃取步驟⑴溶解10-去乙?；涂ㄍII的溶液；
[0008]⑶干燥萃取相，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末I ;
[0009]⑷用正相色譜純化固體粉末I，收集含10-去乙?；涂ㄍII的餾分；
[0010](5)干燥步驟⑷得到的含10-去乙?；涂ㄍII的餾分，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末II ；
[0011](6)結(jié)晶固體粉末II ；
[0012](7)干燥步驟(6)得到的晶體，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末III ；
[0013](8)用反相色譜純化固體粉末III，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的餾分；
[0014](9)干燥步驟(8)得到的含10-去乙酰基巴卡亭III的餾分，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末IV ；
[0015](1Φ結(jié)晶固體粉末IV ；
[0016](11)干燥步驟(1Φ得到的晶體，得到高純度10-去乙酰基巴卡亭III。
[0017]所述方法步驟⑴中浸膏優(yōu)選為含有紫杉醇、7-木糖-10-去乙?；仙即肌?0-去乙?；仙即?、10-去乙酰基巴卡亭II1、巴卡亭II1、三尖衫寧堿和13-乙?；?9-羥基巴卡亭III。
[0018]所述方法步驟⑴中乙醇水溶液的酒精度優(yōu)選為40~60，用該酒精度乙醇水溶液溶解浸膏，優(yōu)點(diǎn)是在步驟⑵中萃取時(shí)易分層。
[0019]所述方法步驟⑵中有機(jī)溶劑優(yōu)選為二氯甲烷或乙酸乙酯，萃取溫度20~25°C，等體積萃取三次，合并萃取相，萃余相HPLC檢測(cè)不含紫杉烷類化合物時(shí)廢棄。
[0020]所述方法步驟⑶優(yōu)選為將萃取相先用減壓蒸餾方法，后用真空干燥方法得到固體粉末I，回收的有機(jī)溶劑可以做下次萃取時(shí)重復(fù)利用。
[0021]所述方法步驟⑷中正相色譜條件優(yōu)選為:固定相是硅膠，流動(dòng)相是二氯甲烷和無水乙醇，體積比是二氯甲烷/無水乙醇=100/5~10，上樣量是每100g的硅膠單次純化I~20g的固體粉末I。
[0022]所述方法步驟⑷中正相色譜條件最優(yōu)選為:固定相是200~300目的非球型硅膠，流動(dòng)相是二氯甲烷和無水乙醇，體積比是二氯甲烷/無水乙醇=100/6，上樣量是每100g的硅膠單次純化IOg的固體粉末I，收集含10-去乙?；涂ㄍII的餾分，硅膠使用后用體積比是二氯甲烷/無水乙醇=100/20再生，洗脫至紫外檢測(cè)沒有雜質(zhì)。
[0023]所述方法步驟(5)優(yōu)選為將含10-去乙?；涂ㄍII的餾分先用減壓蒸餾方法，后用真空干燥方法得到固體粉末II，回收的流動(dòng)相用GC檢測(cè)后，配成體積比是二氯甲烷/無水乙醇=100/2的流動(dòng)相可以做下次層析時(shí)重復(fù)利用。
[0024]所述方法步驟(6)優(yōu)選為用甲醇-水結(jié)晶。
[0025]所述方法步驟(7)優(yōu)選為用真空干燥方法得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末 III。`
[0026]所述方法步驟(8)中反相色譜條件優(yōu)選為:固定相是C18，流動(dòng)相是乙腈和超純水，體積比是乙腈/超純水=100/80~120，上樣量是每100g的C18單次純化I~IOg的固體粉末III。
[0027]所述方法步驟(8)中反相色譜條件最優(yōu)選為:固定相是5 μ m的C18,流動(dòng)相是乙腈和超純水，體積比是乙腈/超純水=100/100，上樣量是每100g的C18單次純化2g的固體粉末III，收集含10-去乙?；涂ㄍII的餾分，C18使用后用體積比是乙腈/超純水=100/10再生，洗脫至紫外檢測(cè)沒有雜質(zhì)。
[0028]所述方法步驟(9)優(yōu)選為將含10-去乙?；涂ㄍII的餾分先用減壓蒸餾方法，當(dāng)蒸發(fā)到一定程度時(shí)自然結(jié)晶析出，最后用真空干燥方法得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末IV，回收的流動(dòng)相用GC檢測(cè)后，配成體積比是乙腈/超純水=100/100的流動(dòng)相可以做下次層析時(shí)重復(fù)利用。
[0029]所述方法步驟(K))優(yōu)選為用丙酮-石油醚結(jié)晶。
[0030]所述方法步驟(11)優(yōu)選為用真空干燥方法得到高純度10-去乙?；涂ㄍII。
[0031]本發(fā)明有益效果為:
[0032]1、本發(fā)明最大的有益效果是最后得到的10-去乙?；涂ㄍII產(chǎn)品純度高到98.5%以上，雜質(zhì)總含量小于1%，單一雜質(zhì)含量小于0.5%。最后得到的10-去乙?；涂ㄍII收率95%以上。既保證了高純度又保證了高收率。
[0033]2、工藝中萃取用的有機(jī)溶劑、正相層析用的二氯甲烷/無水乙醇、反相層析用的乙腈/超純水都可以回收利用，降低了工藝成本。[0034]3、工藝中正相硅膠、反相C18都可以再生利用，降低了工藝成本。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0035]圖1是從含10-去乙?；涂ㄍII的浸膏分離和提純10-去乙?；涂ㄍII的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0036]下述非限制性實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0037]實(shí)施例1
[0038]⑴用酒精度50的乙醇水溶液溶解含紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙?；仙即肌?0-去乙?；涂ㄍI1、巴卡亭II1、三尖衫寧堿和13-乙?；?9-羥基巴卡亭III的浸膏，浸膏中10-去乙?；涂ㄍII含量2% ；
[0039]⑵用二氯甲烷萃取步驟⑴溶解10-去乙酰基巴卡亭III的溶液，萃取溫度25°C，等體積萃取三次，合并三次二氯甲烷相，HPLC檢測(cè)萃余相，當(dāng)萃取相不含紫杉烷化合物時(shí)廢棄處理；
[0040]⑶蒸干二氯甲烷相，減壓蒸餾的條件是真空度0.4MPa、水浴溫度35°C，蒸干至不再減重，真空干燥的條件是真空度0.8MPa、干燥溫度60°C，干燥產(chǎn)品至不再減重，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末I，固體粉末I中10-去乙?；涂ㄍII含量20% ； [0041]⑷正相色譜純化，色譜條件是制備柱規(guī)格是Φ 200 X 300，固定相是4kg的200~300目非球型硅膠，流動(dòng)相是60L的二氯甲烷和無水乙醇，體積比是二氯甲烷/無水乙醇=100/6，上樣量是400g的固體粉末I，洗脫流速是lL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)是227nm，收集含10-去乙?；涂ㄍII的餾分；
[0042](5)蒸干含10-去乙?；涂ㄍII的餾分，減壓蒸餾的條件是真空度0.4MPa、水浴溫度35°C，蒸干至不再減重，真空干燥的條件是真空度0.8MPa、干燥溫度60°C，干燥產(chǎn)品至不再減重，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末II，固體粉末II中10-去乙酰基巴卡亭III含量 50% ；
[0043](6)用甲醇-水結(jié)晶固體粉末II ；
[0044](7)干燥步驟(6)得到的晶體，真空干燥的條件是真空度0.8MPa、干燥溫度60°C，干燥廣品至不再減重，得到含10-去乙酸基巴卡亨III的固體粉末III，固體粉末III中10-去乙酸基巴卡亭III含量70% ；
[0045]⑶反相色譜分離，色譜條件是制備柱規(guī)格是Φ 200 X 300，固定相是4kg的5 μ m的C18，流動(dòng)相是80L乙臆和超純水，體積比是乙臆/超純水=100/100,上樣量是80g的固體粉末III，洗脫流速是lL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)是227nm，收集含10-去乙?；涂ㄍII的餾分；
[0046](9)蒸發(fā)含10-去乙?；涂ㄍII的餾分，減壓蒸餾的條件是真空度0.8MPa、水浴溫度55°C，蒸發(fā)至有晶體析出，真空干燥析出晶體，真空干燥的條件是真空度0.8MPa、干燥溫度60°C，干燥產(chǎn)品至不再減重，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固體粉末IV，固體粉末IV中10-去乙酰基巴卡亭III含量95% ；
[0047](1Φ用丙酮-石油醚結(jié)晶固體粉末IV ;[0048](11)干燥步驟(1Φ得到的晶體，真空干燥的條件是真空度0.8MPa、干燥溫度60°C，干燥產(chǎn)品至不再減重，得到高純度10-去乙?；涂ㄍII含量99%、收率90%。
【權(quán)利要求】
1.一種從含10-去乙酰基巴卡亭III的浸膏分離和提純10-去乙?；涂ㄍII的方法，所述方法包括如下步驟: ⑴用乙醇水溶液溶解含10-去乙?；涂ㄍII的浸膏； ⑵用有機(jī)溶劑萃取步驟⑴溶解10-去乙?；涂ㄍII的溶液； ⑶干燥萃取相，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末I ; ⑷用正相色譜純化固體粉末I，收集含10-去乙?；涂ㄍII的餾分； (5)干燥步驟⑷得到的含10-去乙?；涂ㄍII的餾分，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末II ； (6)結(jié)晶固體粉末II； (7)干燥步驟(6)得到的晶體，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末III； ⑶用反相色譜純化固體粉末III，收集含10-去乙?；涂ㄍII的餾分； ⑶干燥步驟⑶得到的含10-去乙?；涂ㄍII的餾分，得到含10-去乙?；涂ㄍII的固體粉末IV ； (10)結(jié)晶固體粉末IV； (11)干燥步驟(1Φ得到的晶體，得到高純度10-去乙酰基巴卡亭III。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑴中浸膏含有紫杉醇、7-木糖-10-去乙?；仙即肌?0-去乙?；仙即肌?0-去乙?；涂ㄍI1、巴卡亭II1、三尖衫寧堿和13-乙酰基-9-羥基巴卡亭III。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑴中乙醇水溶液的酒精度是40~60。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑵中有機(jī)溶劑是二氯甲烷或乙酸乙酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑷中正相色譜條件:固定相是硅膠，流動(dòng)相是二氯甲烷和無水乙醇，體積比是二氯甲烷/無水乙醇=100/5~10，上樣量是每100g的硅膠單次純化I~20g的固體粉末I。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步驟⑶中反相色譜條件:固定相是C18,流動(dòng)相是乙臆和超純水,體積比是乙臆/超純水=100/80~120,上樣量是每100g的C18單次純化1~10g的固體粉末III。
【文檔編號(hào)】C07D305/14GK103804326SQ201210460414
【公開日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2012年11月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月15日
【發(fā)明者】劉勝遠(yuǎn) 申請(qǐng)人:劉勝遠(yuǎn)