專利名稱：用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針、用途及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針、用途及制備方法。
背景技術(shù)：
乙酰膽堿酯酶(AChE)活性快速檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于促進(jìn)人體健康以及環(huán)境保護(hù)
具有重大意義。目前用于治療老年癡呆癥的藥物主要是乙酰膽堿酯酶抑制劑，通過(guò)抑制乙酰膽堿酯酶(AChE)活性來(lái)控制患者體內(nèi)乙酰膽堿含量，因此乙酰膽堿酯酶(AChE)活性檢測(cè)劑的開發(fā)對(duì)于相關(guān)藥物的篩選具有重要作用。此外，某些有機(jī)磷農(nóng)藥、氨基甲酸酯農(nóng)藥會(huì)對(duì)乙酰膽堿酯酶(AChE)活性產(chǎn)生抑制作用，因此乙酰膽堿酯酶(AChE)活性檢測(cè)劑的研制對(duì)于檢測(cè)環(huán)境中有機(jī)磷農(nóng)藥、氨基甲酸酯農(nóng)藥也能夠發(fā)揮重要作用。傳統(tǒng)乙酰膽堿酯酶(AChE)活性檢測(cè)技術(shù)主要采用間接監(jiān)控法，該方法采用硫代膽堿作為底物，乙酰膽堿酯酶(AChE)水解該底物生成硫代膽堿，后者與二硫代硝基苯甲酸(Ellman)反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物，通過(guò)吸收光譜監(jiān)控黃色物質(zhì)的生成速度來(lái)確定酶活性。但是，該方法在使用過(guò)程中往往會(huì)有背景干擾，且靈敏度較低。據(jù)發(fā)明人了解，應(yīng)用熒光探針的檢測(cè)方法具有良好的靈敏性，應(yīng)當(dāng)由此角度入手，研發(fā)更好的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:克服現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針、用途及制備方法。本發(fā)明技術(shù)構(gòu)思如下:據(jù)發(fā)明人所知，氯化肉豆蘧酰膽堿(Myristoylcholinechloride)在乙酰膽堿酯酶(AChE)作用下裂解為酸和膽堿，只要制備出能與氯化肉豆蘧酰膽堿發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生熒光的探針即可。本發(fā)明解決其技術(shù)問題的技術(shù)方案如下:本發(fā)明一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針前體，其特征是，具有如式I所示的結(jié)構(gòu):
權(quán)利要求
1.一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針前體，其特征是，具有如式I所示的結(jié)構(gòu):
2.一種制備權(quán)利要求1所述探針前體的方法，其特征是，包括以下步驟:第一步、將10，12-二炔二十五酸與氯化亞砜反應(yīng)得到式II化合物；
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征是，第一步的具體過(guò)程為:先將10，12-二炔二十五酸溶解于二氯甲烷、再加入氯化亞砜得到反應(yīng)液，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下持續(xù)攪拌該反應(yīng)液直至反應(yīng)結(jié)束；然后，減壓蒸餾去除溶劑，即得式II化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征是，第二步的具體過(guò)程為:先將式II化合物溶解于四氫呋喃中得到式II化合物溶液，再將式II化合物溶液加至含有三乙二醇的四氫呋喃溶液中、得到反應(yīng)液，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下持續(xù)攪拌該反應(yīng)液直至反應(yīng)結(jié)束；然后，減壓蒸餾去除溶劑獲得粗產(chǎn)物，并將粗產(chǎn)物以層析柱純化，即得式I所示探針前體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4 所述方法，其特征是，第二步中，在層析柱純化過(guò)程中采用體積比100:2的二氯甲烷:甲醇為洗脫液。
6.一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的囊泡探針，其特征是，由重量比為7:3的10，12-二炔二十五酸和式I化合物聚合而成。
7.一種制備權(quán)利要求6所述囊泡探針的方法，其特征是，包括以下步驟: 將10，12- 二炔二十五酸和式I化合物按重量比7:3溶解于二甲基亞砜得到DMSO溶液，將DMSO溶液加至溫度為至少80°C的4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中得到反應(yīng)液，冷卻反應(yīng)液，以紫外光照射反應(yīng)液進(jìn)行聚合反應(yīng)，即得囊泡探針。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征是，冷卻反應(yīng)液前，將反應(yīng)液超聲、并用濾器過(guò)濾。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征是，采用254nm紫外燈作為紫外光源。
10.權(quán)利要求6所述囊泡探針用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針、用途及制備方法。該探針由重量比為7:3的10，12-二炔二十五酸和式Ⅰ化合物聚合而成，本發(fā)明的囊泡探針在4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中呈藍(lán)色且無(wú)熒光，與氯化肉豆蔻酰膽堿發(fā)生反應(yīng)后變?yōu)榧t色并發(fā)出熒光(熒光發(fā)射波長(zhǎng)約550nm)，靈敏度高，易于操作，采用該探針的熒光檢測(cè)方法在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有極大的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C07C69/606GK103073427SQ20121046177
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月16日
發(fā)明者陳小強(qiáng), 周國(guó)棟, 王芳, 王惠琳 申請(qǐng)人:南京工業(yè)大學(xué)