專利名稱：一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法。
背景技術(shù)：
氧化芪三酚是一種環(huán)烯醚萜葡萄糖苷，具有多種有益的生物活性如具有酪氨酸酶抑制活性、果蔬防腐抗菌活性、抗單純皰疹病毒活性、抗水痘帶狀皰疹病毒活性及抗艾滋病病毒等活性，同時還具有抗炎消腫、抗氧化、抗細胞凋亡及神經(jīng)保護等作用。桑枝為桑科植物桑的嫩枝，桑枝占桑園年產(chǎn)干物質(zhì)量的64%左右，是蠶桑資源中生物量占有比例最高的物質(zhì)。然而，在傳統(tǒng)的蠶桑生產(chǎn)中，少部分用作燃料，大部分桑枝條被廢棄，不僅其資源價值沒有得到很好開發(fā)，還污染了環(huán)境。已知，桑枝隨產(chǎn)地的不同而含有不同含量的氧化芪三酚(一般為O. 01%。 1%。，極少數(shù)品種能達到1%。 4%。)。提供從桑枝中高效提取氧化芪三酚的方法將具有重要的經(jīng)濟和環(huán)境效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種從桑枝中高效提取氧化芪三酚的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案
一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其以桑枝為原料，包括依次進行的如下步驟
(1)、用醇體積含量為65wt9T75wt%的醇水溶液對桑枝進行提取，濃縮提取液，干燥，得粗提物；
(2)、用石油醚對步驟(I)所得粗提物進行脫脂處理，之后使用乙酸乙酯多次萃取，合并乙酸乙酯萃取液，真空減壓回收溶劑，得到流體狀物質(zhì)，40°C以下真空干燥得半成品；
(3)、將步驟(2)所得半成品用乙醇-水溶液完全溶解，與大孔樹脂DlOl混合，吸收充分后，上柱，以乙醇-水溶液為洗脫液，進行梯度洗脫或等度分段洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，使用丙酮與石油醚的混合溶劑進行重結(jié)晶，得到氧化芪三酚晶體。優(yōu)選地，所述作為原料的桑枝為干燥的桑枝粉末。粉末大小可以為例如3(Tl00目。優(yōu)選地，步驟(I)中，醇可以是甲醇、乙醇等常用于植物提取的醇，但優(yōu)選為乙醇。所述提取可以在常溫下進行。優(yōu)選地，步驟(2)中，所述真空干燥的溫度為25°C 30°C。優(yōu)選地，在步驟(3)中，使用大孔樹脂DlOl之前，對其進行預處理。預處理過程如下先用一定量純凈水漂洗，再用95%(體積)乙醇浸泡12 36小時，然后用小流量的水淋洗，終點以流出的乙醇加水不顯渾濁為標準，大量水洗凈乙醇后，用2-3倍樹脂體積的3-5wt%鹽酸處理，水洗到接近中性，再用2-4倍樹脂體積的3-5wt%的氫氧化鈉處理，然后大量水洗至中性。根據(jù)本發(fā)明的一個具體和優(yōu)選方面，步驟(3)中，進行梯度洗脫，且將收集的氧化芪三酚質(zhì)量分數(shù)為409Γ 70%的洗脫液與收集的氧化芪三酚質(zhì)量分數(shù)大于70%的洗脫液分別合并，濃縮，干燥以及重結(jié)晶。根據(jù)本發(fā)明的又一具體和優(yōu)選方面，步驟(3)中，進行等度分段洗脫，以10%的濃度差為一個間隔段，每段的洗脫體積為2 3個柱體積，洗脫液流速為Γ2個柱體積/小時。優(yōu)選地，步驟(3)中進行重結(jié)晶時，向經(jīng)過濃縮干燥后的洗脫液中，先加入純丙酮，并加熱至40°C飛(TC，待溶解完全，勻速攪拌狀態(tài)下加入分析純石油醚，至溶液達到1°渾濁狀態(tài)，加熱至40°C 55°C并在該溫度下靜置8 12小時后過濾，結(jié)晶體用丙酮與石油醚的混合溶劑至少洗滌2次，過濾，抽干，真空干燥，即得。進一步優(yōu)選地，前95%石油醚加入速度為40(T500ml/min，后5%石油醚的加入速度為 100 200ml/min。優(yōu)選地，步驟(3)中，加入的石油醚的溫度為40°C 50°C。優(yōu)選地，步驟(3)中，重結(jié)晶時所用丙酮與石油醚的體積比為1:2 5。進一步地，在步驟(3)中，向重結(jié)晶過程所產(chǎn)生的濾液中，加少許氧化芪三酚結(jié)晶，置室溫以下靜置，使重復析晶和過濾結(jié)晶，至結(jié)晶不再析出，過濾，得到高純度的氧化芪三酚晶體。根據(jù)本發(fā)明，步驟(I)中，醇水溶液的用量一般為桑枝的1(Γ15倍(V/G);步驟(3)中，丙酮的用量一般為洗脫液干重的8 12倍(V/G)，結(jié)晶體真空干燥的溫度為25°C 30°C，真空干燥時間為72 108小時。由于以上技術(shù)方案的實施，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點
(1)制備過程簡單，易于操作；
(2)成本低廉，適合大規(guī)模生產(chǎn)，具有應用潛力。
具體實施例方式以下結(jié)合具體的實施例，對本發(fā)明做進一步詳細的說明，但本發(fā)明不限于以下實施例。以下實施例中氧化芪三酚的含量測定方法均采用液質(zhì)聯(lián)用。儀器島津LCMS-2010高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀。包括2臺LC-lOADvp泵，F(xiàn)CV-1OALvp四元低壓梯度流路閥，D⑶-14AM線真空脫氣機，CTO-lOAvp柱溫箱，7725i進樣閥(Rheodyne，USA), SPD-MlOAvp 二極管陣列檢測器，質(zhì)譜為LCMS-2010單級四極桿，電噴霧電離(ESI)離子源，數(shù)據(jù)采集和處理由LCMS solution 2. 02軟件完成。色譜柱為ThermoHypersil-Keystone (Bellefonte, PA, USA) C18 (5 Mm, 150 X 2. I mm),柱溫 40 °C。流動相使用前經(jīng)0. 22 Mm濾膜過濾并超聲脫氣，流速為0. 2 mL min-l0電噴霧電離(ESI )，離子極性positive ion (+);全離子掃描(SCAN),掃描范圍50-1000 (m/z);探針(probe)溫度250 V (ESI);曲型脫溶劑裝置(CDL)溫度250 V (ESI +);加熱塊(block)溫度200 °C;曲型脫溶劑裝置(CDL)電壓-45 V (ESI+);探針(probe)電壓4. 5 kV (ESI+);檢測電壓 1.5 kV ；Q-array 電壓DC 0V, RF 150V ;霧化氣體流速 2· 5 L min-l(ESI)。紫外光譜掃描范圍為200到300 nm。實施例I一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其包括依次進行的下列步驟
(I)、桑枝(湖南，黃魯頭老枝，氧化芪三酚含量I. 1%。)陰涼處晾干(水分含量10%)，稱取粉碎過篩(40目)后的粉末500kg，70%乙醇-水溶液室溫浸提3次(4000LX1、2500LX2、12hrX3，每2hr溶液循環(huán)/攪拌lOmin)，合并3次乙醇提取液，55°C真空減壓濃縮至IOOL流體。(2)、將步驟(I)所得IOOL流體用石油醚脫脂后，乙酸乙酯萃取3次(100LX3)，合并三次乙酸乙酯萃取液，真空減壓回收溶劑，得到流體狀物質(zhì)，30°C下真空干燥，得到固體粉末4. 7kg，測其氧化芪三酚含量為11.3%。(3)、將步驟(2)所得固體粉末6.5kg加35°C的30%乙醇水溶液，至完全溶解，與預處理(先用一定量純凈水漂洗，再用95%乙醇浸泡24小時，然后用小流量的水淋洗，終點以流出的乙醇加水不顯渾濁為標準，大量水洗凈乙醇后，用2-3倍樹脂體積的3-5wt%鹽酸處理，水洗到接近中性，再用2-4倍樹脂體積的3-5wt%的氫氧化鈉處理，然后大量水洗至中 性)的大孔樹脂DlOl混合，吸收充分，上柱；以乙醇-水溶液為洗脫液，進行梯度洗脫，收集氧化芪三酚質(zhì)量分數(shù)40% 70%的洗脫液，合并，濃縮，干燥，得310g粉末狀的A洗脫組份；收集氧化芪三酚質(zhì)量分數(shù)大于70%的洗脫液，合并濃縮，干燥，得500g粉末狀的B洗脫組份；之后，對前述所得的A洗脫組份和B洗脫組份分別進行重結(jié)晶。重結(jié)晶過程如下按洗脫組份干重計算，加入8 12倍量(V/G)的分析純丙酮，加熱至4(T50°C，待溶解完全，勻速攪拌狀態(tài)下加入體積為丙酮體積的3倍的分析純石油醚，石油醚滴加速度為前95%石油醚加入速度約400 500ml/min，后5%石油醚加入速度約100 200ml/min，滴加的石油醚的溫度為約50°C，至溶液達到1°渾濁狀態(tài)，加熱至50°C，在該溫度下靜置8 12小時后，過濾，結(jié)晶體用I 3倍量丙酮-石油醚混合溶液至少洗滌2次，過濾，抽干，真空干燥72小時，得氧化芪三酚晶體500克，經(jīng)HPLC檢測，氧化芪三酚含量為97.5%。實施例2
一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其基本同實施例1，不同的是，在步驟(3)的重結(jié)晶過程中，全部石油醚以400 500ml/min的速率勻速加入。最后得到氧化芪三酚晶體487克，經(jīng)HPLC檢測，氧化芪三酚含量為97. 5%。實施例3
一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其基本同實施例1，不同的是，步驟(3)洗脫采用的是等度分段洗脫，以10%的濃度差為一個間隔段，每段的洗脫體積為2個柱體積，洗脫液流速為I個柱體積/小時。最后得到氧化芪三酚晶體約500克，經(jīng)HPLC檢測，氧化芪三酚含量為97.5%。實施例4
一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其基本同實施例1，不同的是，重結(jié)晶過程添加的石油醚與丙酮的體積比為2:1。最后得氧化芪三酚晶體490克，經(jīng)HPLC檢測，氧化芪三酚含量為97.5%。實施例5
一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其基本同實施例3，不同的是，重結(jié)晶過程添加的石油醚與丙酮的體積比為5:1。最后得氧化芪三酚晶體505克，經(jīng)HPLC檢測，氧化芪三酚含量為97.5%。
以上對本發(fā)明做了詳盡的描述，其目的在于讓熟悉此領(lǐng)域技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并加以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍，凡根據(jù)本發(fā)明的精神實質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發(fā)明的保 護范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其特征在于以桑枝為原料，包括依次進行的如下步驟 (1)、用醇體積含量為659Γ75%的醇水溶液對桑枝進行提取，濃縮提取液，干燥，得粗提物； (2)、用石油醚對步驟(I)所得粗提物進行脫脂處理，之后使用乙酸乙酯多次萃取，合并乙酸乙酯萃取液，真空減壓回收溶劑，得到流體狀物質(zhì)，40°C以下真空干燥得半成品； (3)、將步驟(2)所得半成品用乙醇-水溶液完全溶解，與大孔樹脂DlOl混合，吸收充分后，上柱，以乙醇-水溶液為洗脫液，進行梯度洗脫或等度分段洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，使用丙酮與石油醚的混合溶劑進行重結(jié)晶，得到氧化芪三酚晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述作為原料的桑枝為干燥的桑枝粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(I)中，所述的醇為乙醇，所述提取在常溫下進行。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(2)中，所述真空干燥的溫度為250C 30O。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中，進行梯度洗脫，且將收集的氧化芪三酚質(zhì)量分數(shù)為409Γ 70%的洗脫液與收集的氧化芪三酚質(zhì)量分數(shù)大于70%的洗脫液分別合并，濃縮，干燥以及重結(jié)晶。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中，進行等度分段洗脫，以10%的濃度差為一個間隔段，每段的洗脫體積為2 3個柱體積，洗脫液流速為Γ2個柱體積/小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中進行重結(jié)晶時，向經(jīng)過濃縮干燥后的洗脫液中，先加入純丙酮，并加熱至40°C 50°C，待溶解完全，勻速攪拌狀態(tài)下加入分析純石油醚，至溶液達到1°渾濁狀態(tài)，加熱至40°C 55°C并在該溫度下靜置8 12小時后過濾，結(jié)晶體用丙酮與石油醚的混合溶劑至少洗滌2次，過濾，抽干，真空干燥，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于前95%石油醚加入速度為40(T500ml/min,后5%石油醚的加入速度為100 200ml/min。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于步驟(3)中，加入的石油醚的溫度為40 0C 50。。。
10.根據(jù)權(quán)利要求I或7或8或9所述的方法，其特征在于步驟(3)中，重結(jié)晶時所用丙酮與石油醚的體積比為1:2 5。
全文摘要
本發(fā)明涉及從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其以桑枝為原料，包括(1)、用醇體積含量為65%~75%的醇水溶液對桑枝進行提取，濃縮，干燥，得粗提物；(2)、用石油醚對所得粗提物進行脫脂處理，之后使用乙酸乙酯多次萃取，合并乙酸乙酯萃取液，真空減壓回收溶劑，得流體狀物質(zhì)，40℃以下真空干燥得半成品；(3)、將步驟(2)所得半成品用乙醇-水溶液完全溶解，與大孔樹脂D101混合，吸收充分后，上柱，以乙醇-水溶液為洗脫液，進行梯度洗脫或等度分段洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，使用丙酮與石油醚的混合溶劑進行重結(jié)晶，得氧化芪三酚晶體。本發(fā)明能夠從桑枝中高效提取氧化芪三酚，操作簡單，成本低廉，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號C07C37/70GK102942455SQ20121048633
公開日2013年2月27日 申請日期2012年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月26日
發(fā)明者余雁 申請人:蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學院