專利名稱：從桑枝中提取氧化芪三酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法。
背景技術(shù)：
氧化芪三酚是一種環(huán)烯醚萜葡萄糖苷，具有多種有益的生物活性如具有酪氨酸酶抑制活性、果蔬防腐抗菌活性、抗單純皰疹病毒活性、抗水痘帶狀皰疹病毒活性及抗艾滋病病毒等活性，同時(shí)還具有抗炎消腫、抗氧化、抗細(xì)胞凋亡及神經(jīng)保護(hù)等作用。桑枝為?？浦参锷５哪壑ΓＶφ忌@年產(chǎn)干物質(zhì)量的64%左右，是蠶桑資源中生物量占有比例最高的物質(zhì)。然而，在傳統(tǒng)的蠶桑生產(chǎn)中，少部分用作燃料，大部分桑枝條被廢棄，不僅其資源價(jià)值沒有得到很好開發(fā)，還污染了環(huán)境。已知，桑枝隨產(chǎn)地的不同而含有不同含量的氧化芪三酚(一般為O. 01%。 1%。，極·少數(shù)品種能達(dá)到1%。 4%。)。提供從桑枝中高效提取氧化芪三酚的方法將具有重要的經(jīng)濟(jì)和環(huán)境效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種從桑枝中高效提取氧化芪三酚的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案
一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其以桑枝為原料，包括依次進(jìn)行的如下步驟
(I )、用醇體積含量為65wt9T75wt%的醇水溶液對(duì)桑枝進(jìn)行提取，濃縮提取液，干燥，得粗提物；
(2)、用石油醚對(duì)步驟(I)所得粗提物進(jìn)行脫脂處理，之后使用乙酸乙酯多次萃取，合并乙酸乙酯萃取液，真空減壓回收溶劑，得到流體狀物質(zhì)，40°C以下真空干燥得半成品；
(3)、將步驟(2)所得半成品用乙醇-水溶液溶解，制成混濁度低于O.5°的上樣溶液，采用大孔樹脂DlOl分離柱，濕法上樣以后，靜置，至樹脂達(dá)到吸附平衡，以乙醇-水溶液為洗脫液，進(jìn)行梯度洗脫或等度分段洗脫，收集氧化芪三酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于40%的洗脫液，合并，濃縮，干燥，得粗品；
(4)、對(duì)步驟(3)所得粗品重復(fù)步驟(3)的提純，收集氧化芪三酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于等于96. 97%的洗脫液，合并，濃縮，干燥，即得所述氧化芪三酚。優(yōu)選地，所述作為原料的桑枝為干燥的桑枝粉末。粉末大小可以為例如3(Tl00目。優(yōu)選地，步驟(I)中，醇可以是甲醇、乙醇等常用于植物提取的醇，但優(yōu)選為乙醇。所述提取可以在常溫下進(jìn)行。優(yōu)選地，步驟(2)中，所述真空干燥的溫度為25°C 30°C。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體和優(yōu)選方面，步驟(3)中，進(jìn)行梯度洗脫。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)具體和優(yōu)選方面，步驟(4)中，進(jìn)行梯度洗脫，且將收集的氧化芪三酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為大于等于96.97%的洗脫液合并，濃縮，干燥。
根據(jù)本發(fā)明的又一具體和優(yōu)選方面，步驟(3)和(4)中，進(jìn)行等度分段洗脫，以10%的濃度差為一個(gè)間隔段，每段的洗脫體積為2 3個(gè)柱體積，洗脫液流速為廣2個(gè)柱體積/小時(shí)。步驟(3)中，所述靜置在室溫下進(jìn)行，靜置的時(shí)間為O. 5 lh。根據(jù)本發(fā)明，步驟(I)中，醇水溶液的用量一般為桑枝的1(Γ15倍(V/G)。由于以上技術(shù)方案的實(shí)施，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)
(1)制備過程簡(jiǎn)單，易于操作；
(2)成本低廉，適合大規(guī)模生產(chǎn)，具有應(yīng)用潛力。


圖I為實(shí)施例I所得氧化芪三酚的HPLC譜圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明不限于以下實(shí)施例。以下實(shí)施例中氧化芪三酚的含量測(cè)定方法均采用液質(zhì)聯(lián)用。儀器島津LCMS-2010高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀。包括2臺(tái)LC-lOADvp泵，F(xiàn)CV-1OALvp四元低壓梯度流路閥，D⑶-14AM線真空脫氣機(jī)，CTO-lOAvp柱溫箱，7725i進(jìn)樣閥(Rheodyne，USA), SPD-MlOAvp 二極管陣列檢測(cè)器，質(zhì)譜為LCMS-2010單級(jí)四極桿，電噴霧電離(ESI)離子源，數(shù)據(jù)采集和處理由LCMS solution 2. 02軟件完成。色譜柱為ThermoHypersil-Keystone (Bellefonte, PA, USA) C18 (5 Mm, 150 X 2. I mm),柱溫 40 °C。流動(dòng)相使用前經(jīng)0.22 Mm濾膜過濾并超聲脫氣，流速為0.2 mL min_l。電噴霧電離(ESI)，離子極性positive ion (+);全離子掃描(SCAN),掃描范圍50-1000 (m/z);探針(probe)溫度250 V (ESI);曲型脫溶劑裝置(CDL)溫度250 V (ESI +);加熱塊(block)溫度200 °C;曲型脫溶劑裝置(CDL)電壓-45 V (ESI+);探針(probe)電壓4. 5 kV (ESI+);檢測(cè)電壓 1.5 kV ；Q-array 電壓DC 0V, RF 150V ;霧化氣體流速 2· 5 L min-l(ESI)。紫外光譜掃描范圍為200到300 nm。實(shí)施例I
一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其包括依次進(jìn)行的下列步驟
(I)、桑枝(湖南，黃魯頭老枝，氧化芪三酚含量I. 1%。)陰涼處晾干(水分含量10%)，稱取粉碎過篩(40目)后的粉末500kg，70%乙醇-水溶液室溫浸提3次(4000LX1、2500LX2、12hrX3，每2hr溶液循環(huán)/攪拌lOmin)，合并3次乙醇提取液，55°C真空減壓濃縮至100L流體。(2)、將步驟(I)所得100L流體用石油醚脫脂后，乙酸乙酯萃取3次(100LX3)，合并三次乙酸乙酯萃取液，真空減壓回收溶劑，得到流體狀物質(zhì)，30°C下真空干燥，得到固體粉末4.7 kg，測(cè)其氧化芪三酚含量為11.3%。(3)、將步驟(2)所得固體粉末4.7 kg加35°C的30%乙醇水溶液，制成澄清或略混濁(混濁度低于0.5° )的上樣溶液，采用大孔樹脂DlOl為分離介質(zhì)，濕法上樣以后，放置一段時(shí)間(約0.5 1小時(shí))，以使樹脂對(duì)化學(xué)成分達(dá)到吸附平衡；以乙醇-水溶液為洗脫液，收集氧化芪三酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于40%的洗脫液，合并，濃縮，干燥，得SlOg粉末狀的粗品O(4)、對(duì)步驟(3)粗品，重復(fù)步驟(3)的提純，收集氧化芪三酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為大于等于96.97%的洗脫液，合并，濃縮，真空干燥72小時(shí)，得氧化芪三酚晶體510克，經(jīng)HPLC檢測(cè)(出峰圖參見圖1)，氧化芪三酚含量為96.97%。實(shí)施例2
一種從桑枝中提取氧化芪三·酚的方法，其基本同實(shí)施例1，不同的是，步驟(3)和(4)洗脫采用的是等度分段洗脫，以10%的濃度差為一個(gè)間隔段，每段的洗脫體積為2個(gè)柱體積，洗脫液流速為I個(gè)柱體積/小時(shí)。最后得到氧化芪三酚晶體510克，經(jīng)HPLC檢測(cè)，氧化芪三酚含量為96.97%。以上對(duì)本發(fā)明做了詳盡的描述，其目的在于讓熟悉此領(lǐng)域技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并加以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡根據(jù)本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其特征在于以桑枝為原料，包括依次進(jìn)行的如下步驟 (1)、用醇體積含量為659Γ75%的醇水溶液對(duì)桑枝進(jìn)行提取，濃縮提取液，干燥，得粗提物； (2)、用石油醚對(duì)步驟(I)所得粗提物進(jìn)行脫脂處理，之后使用乙酸乙酯多次萃取，合并乙酸乙酯萃取液，真空減壓回收溶劑，得到流體狀物質(zhì)，40°C以下真空干燥得半成品； (3)、將步驟(2)所得半成品用乙醇-水溶液溶解，制成混濁度低于O.5°的上樣溶液，采用大孔樹脂DlOl分離柱，濕法上樣以后，靜置，至樹脂達(dá)到吸附平衡，以乙醇-水溶液為洗脫液，進(jìn)行梯度洗脫或等度分段洗脫，收集氧化芪三酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于40%的洗脫液，合并，濃縮，干燥，得粗品；· (4)、對(duì)步驟(3)所得粗品重復(fù)步驟(3)的提純，收集氧化芪三酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于等于96. 97%的洗脫液，合并，濃縮，干燥，即得所述氧化芪三酚。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述作為原料的桑枝為干燥的桑枝粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(I)中，所述的醇為乙醇，所述提取在常溫下進(jìn)行。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(2)中，所述真空干燥的溫度為250C 30O。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中，進(jìn)行梯度洗脫。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)和(4)中，進(jìn)行等度分段洗脫，以10%的濃度差為一個(gè)間隔段，每段的洗脫體積為2 3個(gè)柱體積，洗脫液流速為廣2個(gè)柱體積/小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中，所述靜置在室溫下進(jìn)行，靜置的時(shí)間為O. 5 lh。
全文摘要
本發(fā)明涉及從桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其以桑枝為原料，包括(1)、用醇水溶液對(duì)桑枝進(jìn)行提取，得粗提物；(2)、對(duì)粗提物進(jìn)行脫脂處理，得半成品；(3)、將半成品用乙醇-水溶液溶解，制成混濁度低于0.5°的上樣溶液，采用大孔樹脂D101分離柱，濕法上樣以后，靜置，至樹脂達(dá)到吸附平衡，以乙醇-水溶液為洗脫液，進(jìn)行梯度洗脫或等度分段洗脫，收集氧化芪三酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于40%的洗脫液，合并，濃縮，干燥，得粗品；(4)、對(duì)粗品重復(fù)步驟(3)的提純，收集氧化芪三酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于等于96.97%的洗脫液，合并，濃縮，干燥，即得所述氧化芪三酚。本發(fā)明能夠從桑枝中高效提取氧化芪三酚，操作簡(jiǎn)單，成本低廉，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07C39/21GK102942456SQ20121048750
公開日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2012年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月26日
發(fā)明者余雁 申請(qǐng)人:蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院