專利名稱：大豆中異黃酮的提取與純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從大豆中提取與純化異黃酮的方法。
背景技術(shù)：
大豆異黃酮是大豆生長(zhǎng)中的次級(jí)代謝產(chǎn)物，存在于大豆胚芽及子葉中包括大豆異黃酮甙和大豆異黃酮甙元。經(jīng)過(guò)多年的研究，發(fā)現(xiàn)大豆異黃酮有多種重要的生理功能和營(yíng)養(yǎng)作用，并逐漸成為研 究的一個(gè)主要方向，特別是對(duì)諸多病癥的預(yù)防和抑制作用。流行病學(xué)調(diào)查研究表明，一些疾病如乳腺癌、前列腺炎、結(jié)腸炎、心臟病和骨質(zhì)疏松癥等在西方國(guó)家的發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于東方國(guó)家?？茖W(xué)家對(duì)這種現(xiàn)象進(jìn)行了分析后認(rèn)為東、西方的飲食差異是造成這種疾病發(fā)病率的主要原因。亞洲人大量食用豆制品，其人均消費(fèi)量是西方國(guó)家的20-40倍，并發(fā)現(xiàn)亞洲人食物中含有大量異黃酮類物質(zhì)。亞洲人血或尿中的異黃酮類物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的水平均是西方人的20倍以上。在做了大批對(duì)照實(shí)驗(yàn)之后，他們提出飲食中的異黃酮類物質(zhì)具有防癌和治療乳腺癌、前列腺炎、結(jié)腸癌、心血管病和骨質(zhì)疏松癥等疾病的功效。證實(shí)異黃酮類物質(zhì)是造成這種差異的原因。有關(guān)大豆異黃酮提取工藝的研究，如美國(guó)專利US5679806公開(kāi)的分離與純化大豆異黃酮的方法，該方法以大豆糖蜜或脫脂大豆粉為原料，經(jīng)過(guò)三步反應(yīng)分別得到較純的大豆異黃酮甙和大豆異黃酮甙元，沒(méi)有得到純度較高的總大豆異黃酮。且該工藝存在以下不足
I.用甲醇進(jìn)行浸提，浸提后大豆廢渣不能再做飼料或他用。2.柱層析時(shí)用甲醇作淋洗劑，殘留甲醇對(duì)人體有害。3.用聚甲基丙烯酸甲酯進(jìn)行柱層析，價(jià)格較高，不易于工業(yè)化生產(chǎn)。公開(kāi)號(hào)為CN 1174839A的中國(guó)專利公開(kāi)了從大豆廢糖蜜中回收異黃酮的方法。該方法主要目的是得到大豆異黃酮甙元，但該工藝采用離心分離進(jìn)行濃縮，用昂貴的酶水解，工業(yè)化不易實(shí)現(xiàn)。公開(kāi)號(hào)為CN 1211573的中國(guó)專利公開(kāi)了一種提取大豆異黃酮的方法，該方法以大豆粉為原料，用正己烷脫去脂肪，再經(jīng)兩步水解得到大豆異黃酮甙和大豆異黃酮甙元，主要目的為得到不同的甙和甙元，但是該方法得到的大豆異黃酮純度有待進(jìn)一步提聞。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要涉及從大豆中提取并純化異黃酮的方法，主要目的是得到和天然大豆成分一致的大豆異黃酮產(chǎn)品，能夠符合國(guó)家中藥生產(chǎn)的要求，進(jìn)而開(kāi)發(fā)出中藥產(chǎn)品。本發(fā)明的方法包括以下步驟
(1)原料準(zhǔn)備取干燥大豆粉碎成粒徑為40-80目；
(2)醇提按每2000 4000mL50 80%乙醇加入IOkg原料的比例回流提取2 4h，過(guò)80^500目孔徑篩，取濾液，上述的提取重復(fù)2飛次；
(3)合并濾液，濃縮至乙醇濃度<2. 5%濃縮液；(4)萃取將濃縮液在濃縮體積2飛倍的乙酸乙酯中萃取2 4h，過(guò)8(Γ500目孔徑篩，上述萃取重復(fù)2飛次；
(5)將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度<2. 5% ；
(6)硅膠柱層析按硅膠柱體體積8 12倍量取乙酸乙酯萃取液經(jīng)硅膠柱層析；所述硅膠粒徑100-300目；
(7)洗脫用丙酮含量為1(Γ50%的石油醚-丙酮混合液洗脫；
(8)收集洗脫液，經(jīng)過(guò)ODS高效液相制備柱，將所得到的流動(dòng)相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。(9)干燥、計(jì)算大豆異黃酮的提取率。其中上述步驟(6)中的硅膠粒徑優(yōu)選為100-200目。其中上述步驟(8)中，所述的制備柱直徑和長(zhǎng)度分別為直徑為1.5cm長(zhǎng)度為70cm
其中上述步驟(8)中的ODS是十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，一般直接寫0DS。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明的提取方法簡(jiǎn)單，設(shè)備要求低，經(jīng)醇提后進(jìn)行萃取并經(jīng)硅膠柱層析，可以使大豆異黃酮的提取率超過(guò)50%，為從大豆中提取異黃酮化合物提供了一種新途徑，對(duì)于充分利用植物資源和開(kāi)發(fā)高天然藥物具有重要意義。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。實(shí)施例I
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL60%的乙醇加入IOkg原料回流提取
2.Oh,過(guò)80目的孔徑篩，取過(guò)濾液，截留物再按10kg/2500mL60%的乙醇比例重復(fù)回流提取2次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2倍的乙酸乙酯中萃取2h，過(guò)140目篩，截留物重復(fù)進(jìn)行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%,按娃膠柱體體積8倍量取乙酸乙酯萃取液經(jīng)100目娃膠柱層析,用丙酮含量為15%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為325目，將所得到的流動(dòng)相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計(jì)算大豆異黃酮的提取率為55%，其提取質(zhì)量為13. 75g。實(shí)施例2
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL65%的乙醇加入IOkg原料回流提取
2.5h，過(guò)80目的孔徑篩，取過(guò)濾液，截留物再按10kg/2500mL65%的乙醇比例重復(fù)回流提取2次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2倍的乙酸乙酯中萃取2. 5h，過(guò)500目篩，截留物重復(fù)進(jìn)行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%，按硅膠柱體體積10倍量取乙酸乙酯萃取液經(jīng)120目硅膠柱層析，用丙酮含量為30%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為500目，將所得到的流動(dòng)相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計(jì)算大豆異黃酮的提取率為63%，其提取質(zhì)量為15. 75g。實(shí)施例3
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL70%的乙醇加入IOkg原料回流提取2.5h，過(guò)80目的孔徑篩，取過(guò)濾液，截留物再按10kg/2500mL70%的乙醇比例重復(fù)回流提取3次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2. 5倍的乙酸乙酯中萃取3h，過(guò)140目篩，截留物重復(fù)進(jìn)行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%，按硅膠柱體體積10倍量取乙酸乙酯萃取液經(jīng)120目硅膠柱層析，用丙酮含量為50%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為800目，將所得到的流動(dòng)相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計(jì)算大豆異黃酮的提取率為75%，其提取質(zhì)量為15. 75g。實(shí)施例4
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL75%的乙醇加入IOkg原料回流提取
3.Oh,過(guò)100目的孔徑篩，取過(guò)濾液，截留物再按10kg/2500mL75%的乙醇比例重復(fù)回流提 取3次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2. 5倍的乙酸乙酯中萃取3. 5h，過(guò)140目篩，截留物重復(fù)進(jìn)行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%，按硅膠柱體體積10倍量取乙酸乙酯萃取液經(jīng)120目硅膠柱層析，用丙酮含量為50%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為800目，將所得到的流動(dòng)相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計(jì)算大豆異黃酮的提取率為90%，其提取質(zhì)量為22. 50g。實(shí)施例5
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL80%的乙醇加入IOkg原料回流提取
3.0h，過(guò)200目的孔徑篩，取過(guò)濾液，截留物再按10kg/2500mL80%的乙醇比例重復(fù)回流提取3次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2. 5倍的乙酸乙酯中萃取4h，過(guò)200目篩，截留物重復(fù)進(jìn)行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%，按硅膠柱體體積8倍量取乙酸乙酯萃取液經(jīng)120目硅膠柱層析，用丙酮含量為25%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為200目，將所得到的流動(dòng)相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計(jì)算大豆異黃酮的提取率為89%，其提取質(zhì)量為22. 25g。
權(quán)利要求
1.大豆中異黃酮的提取與純化方法，其特征在于包括以下步驟 (1)原料準(zhǔn)備取干燥大豆粉碎成粒徑為40-80目； (2)醇提按每200(T4000mL50^80%乙醇加入IOkg原料的比例回流提取2 4h，過(guò)80^500目孔徑篩，取濾液，上述的提取重復(fù)2飛次； (3合并濾液，濃縮至乙醇濃度< 2. 5%濃縮液； (4)萃取將濃縮液在濃縮體積2飛倍的乙酸乙酯中萃取2 4h，過(guò)8(Γ500目孔徑篩，上述萃取重復(fù)2飛次； (5)將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度<2. 5% ； (6)硅膠柱層析按硅膠柱體體積8 12倍量取乙酸乙酯萃取液經(jīng)硅膠柱層析；所述硅膠粒徑100-300目； (7)洗脫用丙酮含量為1(Γ50%的石油醚-丙酮混合液洗脫； (8)收集洗脫液，經(jīng)過(guò)ODS高效液相制備柱，將所得到的流動(dòng)相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物； (9)干燥、計(jì)算大豆異黃酮的提取率。
2.如權(quán)利要求I所述的大豆中異黃酮的提取與純化方法，其特征在于所述的步驟(6)中的硅膠粒徑優(yōu)選為100-200目。
3.如權(quán)利要求I所述的大豆中異黃酮的提取與純化方法，其特征在于所述的步驟(8)中的ODS是十八烷基硅烷鍵合硅膠柱。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從大豆中提取與純化異黃酮的方法。本發(fā)明主要涉及從大豆中提取并純化異黃酮的方法，主要目的是得到和天然大豆成分一致的大豆異黃酮產(chǎn)品，能夠符合國(guó)家中藥生產(chǎn)的要求，進(jìn)而開(kāi)發(fā)出中藥產(chǎn)品。本發(fā)明的提取方法簡(jiǎn)單，設(shè)備要求低，經(jīng)醇提后進(jìn)行萃取并經(jīng)硅膠柱層析，可以使大豆異黃酮的提取率超過(guò)50%，為從大豆中提取異黃酮化合物提供了一種新途徑，對(duì)于充分利用植物資源和開(kāi)發(fā)高天然藥物具有重要意義。
文檔編號(hào)C07D311/40GK102977066SQ201210522278
公開(kāi)日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月7日
發(fā)明者張成如 申請(qǐng)人:山東大學(xué)