雞腸道抗菌肽的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雞腸道抗菌肽的提取方法，它包括如下具體步驟：（1）取腸黏膜和菌株；(2)抗菌肽粗制品的制備；(3)抗菌肽粗制品的純化。該提取方法簡單易懂，提取的抗菌肽廣泛存在于生物體中，具有抗菌、抗病毒、殺寄生蟲、抗腫瘤等活性，是先天性免疫系統(tǒng)極其重要的組成成分，可以抵抗外來微生物的入侵。
【專利說明】雞腸道抗菌肽的提取方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于抗菌肽的提取方法，具體涉及一種雞腸道抗菌肽的提取方法。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]抗菌肽原指昆蟲體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)而產(chǎn)生的一類分子量在4KD左右，具有抗菌活性的堿性多肽物質(zhì)。迄今為止，在不同動物組織中已發(fā)現(xiàn)了很多具有抗菌作用的蛋白質(zhì)和多肽，已有70多種抗菌多肽的結(jié)構(gòu)被測定，抗菌肽的概念得到了極大的擴展。
[0005]抗菌肽是生物體內(nèi)誘導(dǎo)表達具有廣譜抗菌活性的小分子多肽，這些多肽是生物體非專一性的免疫應(yīng)答產(chǎn)物，是生物體內(nèi)免疫系統(tǒng)的重要成分。最近研究發(fā)現(xiàn)，抗菌肽在機體腸道黏膜天然免疫中具有特殊意義，是抗菌免疫的直接效應(yīng)分子，消化道抗菌肽主要由黏膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生，在保護整個消化道黏膜完整，調(diào)節(jié)微生物區(qū)系平衡等方面發(fā)揮重要作用。目前提取抗菌肽的方法為硫酸銨沉淀法，由于腸道中含雜蛋白種類繁多，抗菌肽在生物體組織中含量較低，分離和純化比較困難，硫酸銨沉淀法比較復(fù)雜。
[0006]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了克服現(xiàn)有【技術(shù)領(lǐng)域】存在的上述問題，本發(fā)明的目的在于，提供一種雞腸道抗菌肽的提取方法，解決目前提取抗菌肽的方法比較復(fù)雜，分離和純化比較困難的問題。
[0008]本發(fā)明提供的雞腸道抗菌肽的提取方法，它包括如下具體步驟:
(O 取腸黏膜和菌株:取某雞場飼養(yǎng)的60日齡三黃雞的雞腸黏膜、大腸桿菌菌株；
(2)抗菌肽粗制品的制備:取新鮮雞腸黏膜用滅菌生理鹽水沖洗，經(jīng)組織搗碎機搗碎后按1:1比例加入5%乙酸，100°C水浴lOmin，迅速冷卻后4°C、8000r/min離心30min，取上清超聲波裂解30s，4°C攪拌浸提24h后重復(fù)上述離心過程，取上清，調(diào)整pH7.0值，再次離心，上清液冷凍干燥；
(3)抗菌肽粗制品的純化:將上清液上樣于SephadexG-50過濾層析柱,用0.1mol/L乙酸鈉溶液，pH7.0進行洗脫，恒流泵的速度為3X1，紫外檢測儀檢測其在280nm處的吸光值，記錄儀記錄，量程200mV，紙速度為6cm/h，自動部分收集器收集，每管約2ml，檢測各收集管洗脫液對大腸桿菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脫液，用截留分子量為IOKD的超濾離心管于5000g條件下離心30min，有抑菌活性的濾過過濾層析與超濾離心，將上清液上樣于SephadexG-50過濾層析柱,用0.lmol/L乙酸鈉溶液，pH7.0進行洗脫,物冷凍干燥，-20°C保存。
[0009]本發(fā)明提供的雞腸道抗菌肽的提取方法，其有益效果在于，該提取方法簡單易懂，提取的抗菌肽廣泛存在于生物體中，具有抗菌、抗病毒、殺寄生蟲、抗腫瘤等活性，是先天性免疫系統(tǒng)極其重要的組成成分，可以抵抗外來微生物的入侵。
[0010]
【具體實施方式】
[0011]下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明提供的雞腸道抗菌肽的提取方法，進行詳細(xì)的說明。實施例
[0012]本實施例的雞腸道抗菌肽的提取方法，它包括如下具體步驟:
(O 取腸黏膜和菌株:取某雞場飼養(yǎng)的60日齡三黃雞的雞腸黏膜、大腸桿菌菌株；
(2)抗菌肽粗制品的制備:取新鮮雞腸黏膜用滅菌生理鹽水沖洗，經(jīng)組織搗碎機搗碎后按1:1比例加入5%乙酸，100°C水浴lOmin，迅速冷卻后4°C、8000r/min離心30min，取上清超聲波裂解30s，4°C攪拌浸提24h后重復(fù)上述離心過程，取上清，調(diào)整pH7.0值，再次離心，上清液冷凍干燥；
(3)抗菌肽粗制品的純化:將上清液上樣于SephadexG-50過濾層析柱,用0.1mol/L乙酸鈉溶液，pH7.0進行洗脫，恒流泵的速度為3X1，紫外檢測儀檢測其在280nm處的吸光值，記錄儀記錄，量程 200mV，紙速度為6cm/h，自動部分收集器收集，每管約2ml，檢測各收集管洗脫液對大腸桿菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脫液，用截留分子量為IOKD的超濾離心管于5000g條件下離心30min，有抑菌活性的濾過過濾層析與超濾離心，將上清液上樣于SephadexG-50過濾層析柱,用0.lmol/L乙酸鈉溶液，pH7.0進行洗脫,物冷凍干燥，-20°C保存。
【權(quán)利要求】
1.一種雞腸道抗菌肽的提取方法，其特征在于:它包括如下具體步驟: 一、取腸黏膜和菌株:取某雞場飼養(yǎng)的60日齡三黃雞的雞腸黏膜、大腸桿菌菌株； 二、抗菌肽粗制品的制備:取新鮮雞腸黏膜用滅菌生理鹽水沖洗，經(jīng)組織搗碎機搗碎后按1:1比例加入5%乙酸，100°C水浴lOmin，迅速冷卻后4°C、8000r/min離心30min，取上清超聲波裂解30s，4°C攪拌浸提24h后重復(fù)上述離心過程，取上清，調(diào)整pH7.0值，再次離心，上清液冷凍干燥； 三、抗菌肽粗制品的純化:將上清液上樣于SephadexG-50過濾層析柱,用0.lmol/L乙酸鈉溶液，PH7.0進行洗脫，恒流泵的速度為3X1，紫外檢測儀檢測其在280nm處的吸光值，記錄儀記錄，量程200mV，紙速度為6cm/h，自動部分收集器收集，每管約2ml，檢測各收集管洗脫液對大腸桿菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脫液，用截留分子量為IOKD的超濾離心管于5000g條件下離心30min，有抑菌活性的濾過過濾層析與超濾離心，將上清液上樣于SephadexG-50過濾層 析柱，用0.lmol/L乙酸鈉溶液，pH7.0進行洗脫，物冷凍干燥，_20°C保存。
【文檔編號】C07K1/36GK103880917SQ201210553288
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月19日
【發(fā)明者】張述智, 夏偉, 朱紹輝, 張 浩, 王曉麗, 徐權(quán)汗, 李之詳, 許團輝 申請人:青島中仁藥業(yè)有限公司