專利名稱：一種五味子酚的分離純化方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥活性成分的分離純化方法，具體涉及從五味子中提取一種木脂素即五味子酚的方法，屬于中藥分離純化技術領域。
背景技術：
五味子酌·英文名schisanhenol, schizanhenol, CAS :69363-14-0,分子式為C23H3tlO6,分子量為402. 20，結構式如下
基
-1
五味子作為傳統(tǒng)常用中藥，有斂肺生津、補腎養(yǎng)心、收斂固澀之功效，主治肺虛喘咳、津虧口渴、自汗盜汗、夢遺滑精、久瀉久痢、失眠健忘、心悸怔忡，是常用中藥之一。近年發(fā)現(xiàn)它除了具保肝降酶作用外，還具有抗癌、抗艾滋病毒(HIV)、拮抗血小板活化因子(PAF)和抑制醛糖還原酶等多種活性。五味子含有多種木脂素類化合物，其中的五味子酚為主要的特征性成分。由于五味子酚對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥的作用，因而對于保護腦神經(jīng)細胞，促進腦內蛋白質合成和改善智力、體力有一定功效。同時，對多種實驗動物還有明顯的呼吸興奮作用，使呼吸加深、加快，并能對抗嗎啡的呼吸抑制作用。五味子酚可以降低肝炎患者血清中的谷丙轉氨酶，主要的降酶機制是促進肝細胞修復或抑制肝細胞病變，使細胞膜通透性降低，從而減少漏入血漿中的轉氨酶，臨床上用于治療肝炎。五味子酚能促進肝糖原合成，力口強糖代謝，和增加肝細胞蛋白質的合成；同時有促進淋巴細胞DNA合成的作用，增加淋巴母細胞生成，促進脾免疫功能。因此，從原植物中分離得到該化合物，對質量控制指標、闡明其藥理作用以及為新藥開發(fā)尋找先導化合物具有重要的意義。中國專利CN200910242188. X公開了一種五味子單體成分的分離制備方法，將五味子乙醇提取物用石油醚萃取，將石油醚萃取物采用硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯洗脫，HPLC監(jiān)測，收集洗脫流分粗提物A，粗提物B ;洗脫劑石油醚-乙酸乙酯體積比為
3-5 1 ;粗提物A和粗提物B分別應用高速逆流色譜進行分離，得到五味子酚、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙和五味子酯乙單體，純度均高于98%。該方法制備復雜，步驟多，制備成本高，且不適用于大量制備或者工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內容
本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術的缺陷，提供一種快速簡便、成本低廉、可適用于大量制備或工業(yè)化生產(chǎn)的五味子酚的分離純化方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的?！N五味子酚的分離純化方法，其特征在于以五味子為原料通過提取、萃取、結晶得到五味子酚單體，具體包括如下工藝步驟
A、提取
將五味子粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液，回流提取
3-5次，每次1. 5-3小時，提取液過濾，合并過濾液，濃縮回收乙醇，得50°C下相對密度為1.30-1. 40的濃浸膏；
所述乙醇溶液的加入量為五味子乙醇溶液=IKg: (8 12)L。 B、萃取
將步驟A所得的濃浸膏按體積比加入10量的水進行分散，用正己烷萃取3-5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4-6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品；
C、結晶
按照黃綠色固體物甲醇=Ig: (10-1000) ml計算，將步驟B得到的五味子酚粗品用甲醇完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入2-5倍量體積的蒸餾水，在2-4°C中冷藏結晶，根據(jù)晶體具體純度，重復結晶2 3次，直至純度彡98%，于100°C干燥后即可得到五味子酚單體產(chǎn)品。步驟C所述甲醇可以用乙醇或丙酮替代。本發(fā)明的優(yōu)點在于1、本發(fā)明通過步驟A的提前，確保了提取物中小極性雜質的有效去除。2、本發(fā)明通過步驟B的萃取，使五味子酚達到了很好的富集效果。3、本發(fā)明通過步驟C的結晶，進一步純化了五味子酚，有效保證了五味子酚的純度。4、本發(fā)明通過步驟A、B、C的順序搭配，以及適當?shù)膮?shù)組合，有效分離出了五味子酚單體；整個工藝過程操作簡便、工藝穩(wěn)定、成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)，且分離效率高、產(chǎn)品純度高達98%以上。


圖1是本發(fā)明實施例1五味子酚單體產(chǎn)品的HPLC圖譜。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發(fā)明作進一步的詳細描述，但不應將此理解為本發(fā)明的范圍僅限于下述實施例。下述各實施例中，終產(chǎn)品五味子酚單體的純度復檢均采用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)法，色譜條件如下
以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈水V/V=60:40為流動相；柱溫30°C;流速1.Oml/min ;檢測波長為 254 nm。實施例1一種五味子酚單體的分離純化方法，包括如下工藝步驟
A、提取
將五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液1. 6L，回流提取3次，每次1. 5小時，將提取液過濾，合并過濾液，減壓濃縮回收乙醇，得相對密度為1. 32的濃浸膏150ml ；
B、萃取
將步驟A所得的濃浸膏加1. 5L水分散，用正己烷萃取3次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品1. Sg ；
C、結晶
將步驟B得到的黃綠色固體用55ml甲醇完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入20ml蒸餾水，在4°C中冷藏結晶，重復結晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 2g,純度 >98%。實施例2
一種五味子酚單體的分離純化方法，包括如下工藝步驟
A、提取
將五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液2L，回流提取4次，每次2小時，將提取液過濾，合并過濾液，減壓濃縮回收乙醇，得濃浸膏相對密度為1. 35 (50°C)，體積 120ml ；
B、萃取
將步驟A所得的濃浸膏加1. 2L水分散，用正己烷萃取4次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品2.1g ；
C、結晶
將步驟B得到的黃綠色固體用21ml甲醇完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入20ml蒸餾水，在2 V中冷藏結晶，重復結晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 6g，純度 >98%。實施例3
一種五味子酚單體的分離純化方法，包括如下工藝步驟
A、提取
將五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液2. 4L，回流提取5次，每次3小時，將提取液過濾，合并過濾液，減壓濃縮回收乙醇，得濃浸膏相對密度為1. 30 (50°C)，體積 160ml。B、萃取
將步驟A所得的濃浸膏加1. 6L水分散，用正己烷萃取5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品1. 5g ；
C、結晶
將步驟B得到的黃綠色固體用1500ml甲醇完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入25ml蒸餾水，在，3°C中冷藏結晶，重復結晶3次，在100°C干燥得到五味子酚l.Og，純度 >98%。實施例4一種五味子酚單體的分離純化方法，包括如下工藝步驟
A、提取
將五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液1. 8L，回流提取4次，每次2小時，將提取液過濾，合并過濾液，減壓濃縮回收乙醇，得濃浸膏相對密度為1. 33 (50°C)，體積 145ml。B、萃取
將步驟A所得的濃浸膏加1. 45L水分散，用正己烷萃取4次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品I· 4g ； C、結晶
將步驟B得到的黃綠色固體用140ml乙醇完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入15ml蒸餾水，在4°C冷藏結晶，重復結晶3次，在100°C干燥得到五味子酚1. 2g，純度>98% ο實施例5
一種五味子酚單體的分離純化方法，包括如下工藝步驟
A、提取
將五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液2. 2L，回流提取4次，每次2. 5小時，將提取液過濾，合并過濾液，減壓濃縮回收乙醇，得濃浸膏相對密度為1. 35 (50°C)，體積120ml。B、萃取
將步驟A所得的濃浸膏加1. 2L水分散，用正己烷萃取5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品1. 35g ；C、結晶
將步驟B得到的黃綠色固體用200ml丙酮完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入20ml蒸餾水，在3°C冷藏結晶，重復結晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 18g，純度 >98%。
權利要求
1.一種五味子酚的分離純化方法，其特征在于以五味子為原料通過提取、萃取、結晶得到五味子酚單體，具體包括如下工藝步驟 A、提取 將五味子粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液，回流提取3-5次，每次1. 5-3小時，提取液過濾，合并過濾液，濃縮回收乙醇，得50°C下相對密度為1.30-1. 40的濃浸膏； B、萃取 將步驟A所得的濃浸膏按體積比加入10量的水進行分散，用正己烷萃取3-5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4-6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品； C、結晶 按照黃綠色固體物甲醇=Ig: (10-1000) ml計算，將步驟B得到的五味子酚粗品用甲醇完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入2-5倍量體積的蒸餾水，在2-4°C中冷藏結晶，根據(jù)晶體具體純度，重復結晶2 3次，直至純度> 98%，于100°C干燥后即可得到五味子酚單體產(chǎn)品。
2.根據(jù)權利要求1所述五味子酚的分離純化方法，其特征在于步驟A所述乙醇溶液的加入量為五味子乙醇溶液=IKg: (8 12)L。
3.根據(jù)權利要求1所述五味子酚的分離純化方法，其特征在于步驟C所述甲醇可以用乙醇或丙酮替代。
4.根據(jù)權利要求1所述五味子酚的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟 A、提取 將五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液1. 6L，回流提取3次，每次1. 5小時，將提取液過濾，合并過濾液，減壓濃縮回收乙醇，得相對密度為1. 32的濃浸膏150ml ； B、萃取 將步驟A所得的濃浸膏加1. 5L水分散，用正己烷萃取3次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品1. Sg ； C、結晶 將步驟B得到的黃綠色固體用55ml甲醇完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入20ml蒸餾水，在4°C中冷藏結晶，重復結晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 2g,純度 >98%。
5.根據(jù)權利要求1所述五味子酚的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟 A、提取 將五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液2L，回流提取4次，每次2小時，將提取液過濾，合并過濾液，減壓濃縮回收乙醇，得濃浸膏相對密度為1. 35，體積120ml ； B、萃取 將步驟A所得的濃浸膏加1. 2L水分散，用正己烷萃取4次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品2.1g ；C、結晶 將步驟B得到的黃綠色固體用21ml甲醇完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入20ml蒸餾水，在2 V中冷藏結晶，重復結晶2次，在100°C干燥得到五味子酚1. 6g，純度 >98%。
6.根據(jù)權利要求1所述五味子酚的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟 A、提取 將五味子200g粉碎成I 4mm的粗粉，加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液2. 4L，回流提取5次，每次3小時，將提取液過濾，合并過濾液，減壓濃縮回收乙醇，得濃浸膏相對密度為1. 30，體積160ml ； B、萃取 將步驟A所得的濃浸膏加1. 6L水分散，用正己烷萃取5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，回收濾液至干，得黃綠色的五味子酚粗品1. 5g ； C、結晶 將步驟B得到的黃綠色固體用1500ml甲醇完全溶解，溶解完全后用納米有機膜過濾，濾液加入25ml蒸餾水，在3°C中冷藏結晶，重復結晶3次，在100°C干燥得到五味子酚1. Og,純度>98%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種五味子酚單體的分離純化方法，屬于中藥活性成分的分離純化技術領域。本發(fā)明是以五味子為原料，通過乙醇回流提取、正己烷及乙酸乙酯萃取、溶解結晶得到五味子酚單體。本發(fā)明通過最適宜的工藝及參數(shù)條件，使產(chǎn)品中五味子酚的含量達到98%以上；整個工藝過程操作簡便、工藝穩(wěn)定、成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)，且分離效率高、產(chǎn)品純度高，即可大量實現(xiàn)五味子酚單體的高純度分離制備。
文檔編號C07C43/23GK103012084SQ20121057780
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月27日 優(yōu)先權日2012年12月27日
發(fā)明者李啟發(fā), 夏柯, 文煥松, 郭建華, 劉丁 申請人:成都普思生物科技有限公司