專利名稱：一種利普司他汀的提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利普司他汀的提純方法。
背景技術(shù)：
利普司他汀(Lipstatin)是毒三素鏈霉菌(Streptomyces toxytricini )的代謝產(chǎn)物，能選擇性抑制胃腸道中胰腺肪酶的活性，減少人體對(duì)食物中脂肪的分解和吸收，從而達(dá)到控制體重的目的。由于利普司他汀性質(zhì)不穩(wěn)定，在空氣中容易被氧化，而它的四氫衍生物奧利司他(Orlistat)具有相對(duì)穩(wěn)定的特性，已經(jīng)被羅氏公司成功開發(fā)為減肥藥-賽尼可，是目前唯一一個(gè)作為非中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用而上市的治療肥胖癥的藥物。目前，奧利司他的制備主要通過兩種方法，一種是全合成法，其成本較高；另一種 是半合成法，即利用毒三素鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生利普司他汀，再通過加氫反應(yīng)生成奧利司他。發(fā)酵法生產(chǎn)利普司他汀成本相對(duì)較低。對(duì)于發(fā)酵法生產(chǎn)利普司他汀，近年來發(fā)展了很多利普司他汀的提純方法，一般主要包括以下步驟發(fā)酵液預(yù)處理、有機(jī)溶媒浸提、萃取、色譜純化后得到產(chǎn)品。目前提純利普司他汀的方法主要存在以下缺點(diǎn)1、由于毒三素鏈霉菌發(fā)酵液粘度大，含有一定量的油性物質(zhì)，發(fā)酵液的預(yù)處理大多采用板框壓濾技術(shù)，直接壓濾往往容易堵塞濾布，因此在發(fā)酵液中加入大量的助濾劑如硅藻土、珍珠巖等，使其勞動(dòng)強(qiáng)度比較大，而且在過濾過程中還容易造成利普司他汀的損失；2、浸提所用的有機(jī)溶媒大多為丙酮和乙醇，由于這兩種溶劑的親水、親脂性，造成提取到的利普司他汀水溶性雜質(zhì)較多，從而增加了后續(xù)的純化難度，也容易引起利普司他汀的降解；3、使用的溶媒種類偏多；4、提純得到的利普司他汀純度和收率偏低。胡為民等在《毒三素鏈霉菌生產(chǎn)利普司他汀的發(fā)酵與提取工藝》(《中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志》，2007年第38卷第10期，705-708)—文中公開了利普司他汀提取工藝，該技術(shù)方案包括了丙酮萃取與超聲破碎細(xì)胞、乙酸乙酯萃取、正相柱色譜粗分離及半制備柱分離純化后，獲得的利普司他汀達(dá)到94%，然而對(duì)收率及含量均沒有提及，并且該方案比較繁瑣，成本較高。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公開說明書CN102558104A公開了一種利用超臨界CO2流體萃取，并通過短程蒸餾提純得到的利普司他汀，其純度約為94%，收率僅約為50%。如果利普司他汀的純度偏低，會(huì)造成氫化后的奧利司他中有很多雜質(zhì)，使得現(xiàn)有方法很難制備符合醫(yī)用標(biāo)準(zhǔn)的高純度奧利司他。因此，這就對(duì)利普司他汀的純度提出了較高的要求，如中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公開說明書CN102070568A公開了一種奧利司他的制備方法，即用一種基于動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱的半制備或制備型高效液相系統(tǒng)進(jìn)行奧利司他純化的方法，制備出了單雜小于O. 1%，含量大于99. 0%的奧利司他，但它要求利普司他汀的純度>85%,含量約50% 70%。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有工藝技術(shù)上的缺點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)提取純化利普司他汀過程的高效率、低成本，減輕對(duì)環(huán)境的污染，并且為后期制備高純度的奧利司他提供方便。發(fā)明人經(jīng)過大量試驗(yàn)研究提供了一種從毒三素鏈霉菌發(fā)酵液中提純利普司他汀的工藝。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下①萃取含有利普司他汀的發(fā)酵液中加入乙酸乙酯，在攪拌的條件下萃取2 5小時(shí)，靜置分相后，上清液濃縮至干，得黃褐色利普司他汀粗品；②溶解、過濾將①所得的黃褐色利普司他汀粗品用有機(jī)溶媒進(jìn)行溶解，過濾除去不溶性雜質(zhì)，將濾液減壓濃縮至原體積的1/4 1/6，得濃縮液；③硅膠柱層析將硅膠填料裝入層析柱，用庚烷平衡好后，將②所得的濃縮液上到硅膠柱，上樣量為柱體積的10% 20%，用庚烷和乙酸乙酯的混合溶媒作為流動(dòng)相進(jìn)行洗雜和洗脫，流速控制在O. 5 1. 5倍柱體積/小時(shí)，收集純度> 94%的利普司他汀洗脫液，將洗脫液減壓濃縮至干，得淺黃色油狀利普司他汀粗品；④結(jié)晶將③所得的淺黃色油狀利普司他汀粗品用有機(jī)溶媒溶解，降溫法結(jié)晶，過濾后得利普司他汀白色晶體。本發(fā)明對(duì)步驟①中乙酸乙酯的加入量與發(fā)酵液的體積比進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選地，乙酸乙酯的加入量與發(fā)酵液體積比為2 4:1。本發(fā)明對(duì)步驟②中有機(jī)溶媒進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述有機(jī)溶媒為環(huán)己烷、庚烷或正己烷，更優(yōu)選地，上述有機(jī)溶媒為庚烷。庚烷溶解液過濾濃縮后可直接作為上柱液進(jìn)行硅膠柱層析，操作更加方便，且減少了溶媒使用種類。本發(fā)明對(duì)步驟②中有機(jī)溶媒的用量進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述有機(jī)溶媒與利普司他汀按重量體積比為20 40:1。在此條件下，溶解液粘度較小，容易過濾。本發(fā)明對(duì)步驟③中所用的硅膠填料進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述硅膠填料為100 200目、200 300目或300 400目中的一種，更優(yōu)選地，上述硅膠填料為200 300目。硅膠填料太粗，吸附量較小。硅膠填料太細(xì)，雖然吸附量大，但洗脫速度較慢。本發(fā)明對(duì)步驟③中所用的流動(dòng)相進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述洗雜所用的流動(dòng)相中庚烷與乙酸乙酯的體積比為95:5 88:12，洗脫所用的流動(dòng)相中庚烷與乙酸乙酯的體積比為85:15 70:30，在此條件下，更有利于雜質(zhì)，特別是色素類物質(zhì)的去除，對(duì)利普司他汀純度和含量的提高起到關(guān)鍵性作用。本發(fā)明對(duì)步驟④中的有機(jī)溶媒進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述有機(jī)溶媒為石油醚、庚烷或正己烷，更優(yōu)選地，上述有機(jī)溶媒為庚烷。本發(fā)明對(duì)步驟④中的有機(jī)溶媒進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述有機(jī)溶媒，按重量體積比計(jì)，有機(jī)溶媒的加入量與利普司他汀的比為15 25:1。有機(jī)溶媒加入量太多，造成利普司他汀濃度偏低，結(jié)晶收率太低；有機(jī)溶媒加入量太少，會(huì)使得利普司他汀在結(jié)晶過程中出現(xiàn)粘稠狀態(tài)，從而影響結(jié)晶效果。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)勢(shì)①本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)研究后，省略對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行預(yù)處理的步驟，而選用非水溶性有機(jī)溶媒乙酸乙酯直接萃取的方法，得到的利普司他汀純度較高，而且萃取收率可達(dá)92%以上； ②本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)證明，獲得了純度≥97%，含量在75% 85%的利普司他汀，總收率達(dá)72%，為后期制備高純度的奧利司他提供方便；在最優(yōu)選的條件下，僅使用乙酸乙酯和庚烷兩種溶媒，即可獲得純度> 97%，含量達(dá)84%的利普司他??；③本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，操作方便，溶媒回收后可重復(fù)使用，生產(chǎn)成本比較低，減輕了對(duì)環(huán)境的污染。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例中。實(shí)施例1取發(fā)酵液2. OL (發(fā)酵單位6. 6g/L)，加入乙酸乙酯8. 0L，在攪拌條件下，萃取5h。靜置Ih后分相，將上層萃取液減壓濃縮至干，得到黃褐色利普司他汀粗品66. 2g。用240mL庚烷將黃褐色利普司他汀粗品溶解、過濾后，將濾液減壓濃縮至體積為60. OmL，得濃縮液。 硅膠柱選用100 200目的硅膠作為填料，用庚烷平衡好后，將濃縮液上柱。先用庚烷與乙酸乙酯體積比為95:5的流動(dòng)相洗雜3倍柱體積，再用庚烷與乙酸乙酯體積比為70:30的流動(dòng)相洗脫，流速為O. 5倍柱體積/小時(shí)，收集利普司他汀HPLC檢測(cè)純度> 94%(按峰面積歸一化法計(jì)算)的洗脫液。將洗脫液合并后，減壓濃縮至干，得到淺黃色利普司他汀粗品。用230mL石油醚溶解利普司他汀粗品后，通過降溫法進(jìn)行結(jié)晶，過濾后得到利普司他汀白色晶體12. 7g (含利普司他汀9. 6g)，HPLC檢測(cè)純度97. 1%，含量75. 6%，總收率72. 7%。實(shí)施例2取發(fā)酵液2. OL (發(fā)酵單位6. 5g/L)，加入乙酸乙酯4. 0L，在攪拌條件下，萃取4h。靜置Ih后分相，將上層萃取液減壓濃縮至干，得到黃褐色利普司他汀粗品64. Sg。用350mL庚烷將黃褐色利普司他汀粗品溶解、過濾后，將濾液減壓濃縮至體積為64. OmL，得濃縮液。硅膠柱選用200 300目的硅膠作為填料，用庚烷平衡好后，將濃縮液上柱。先用庚烷與乙酸乙酯體積比為88:12的流動(dòng)相洗雜3倍柱體積，再用庚烷與乙酸乙酯體積比為80:20的流動(dòng)相洗脫，流速為O. 8倍柱體積/小時(shí)，收集利普司他汀HPLC檢測(cè)純度> 94%(按峰面積歸一化法計(jì)算)的洗脫液。將洗脫液合并后，減壓濃縮至干，得到淺黃色利普司他汀粗品。用160mL庚烷溶解利普司他汀粗品后，通過降溫法進(jìn)行結(jié)晶，過濾后得到利普司他汀白色晶體11. 5g(含利普司他汀9. 7g)，HPLC檢測(cè)純度97. 8%，含量84. 3%，總收率73. 5%。實(shí)施例3取發(fā)酵液2. OL(發(fā)酵單位6. 2g/L)，加入乙酸乙酯6. OL,在攪拌條件下，萃取2h。靜置Ih后分相，將上層萃取液減壓濃縮至干，得到黃褐色利普司他汀粗品63. Sg。用460mL正己烷將黃褐色利普司他汀粗品溶解、過濾后，將濾液減壓濃縮至體積為76. OmL，得濃縮液。硅膠柱選用300 400目的硅膠作為填料，用庚烷平衡好后，將濃縮液上柱。先用庚烷與乙酸乙酯體積比為90:10的流動(dòng)相洗雜3倍柱體積，再用庚烷與乙酸乙酯體積比為75:25的流動(dòng)相洗脫，流速為1. 2倍柱體積/小時(shí)，收集利普司他汀HPLC檢測(cè)純度> 94%(按峰面積歸一化法計(jì)算)的洗脫液。將洗脫液合并后，減壓濃縮至干，得到淺黃色利普司他汀粗品。
用240mL庚烷溶解利普司他汀粗品后，通過降溫法進(jìn)行結(jié)晶，過濾后得到利普司他汀白色晶體11. lg(含利普司他汀9. 0g)，HPLC檢測(cè)純度97. 5%，含量81. 1%，總收率72. 6%。實(shí)施例4取發(fā)酵液2. OL(發(fā)酵單位6. 9g/L)，加入乙酸乙酯8. 0L,在攪拌條件下，萃取3h。靜置Ih后分相，將上層萃取液減壓濃縮至干，得到黃褐色利普司他汀粗品75. 5g。用380mL環(huán)己烷將黃褐色利普司他汀粗品溶解、過濾后，將濾液減壓濃縮至體積為70. OmL，得濃縮液。硅膠柱選用200 300目的硅膠作為填料，用庚烷平衡好后，將濃縮液上柱。先用庚烷與乙酸乙酯體積比為90:10的流動(dòng)相洗雜3倍柱體積，再用庚烷與乙酸乙酯體積比為85:15的流動(dòng)相洗脫，流速為1. 5倍柱體積/小時(shí)，收集利普司他汀HPLC檢測(cè)純度> 94%(按峰面積歸一化法計(jì)算)的洗脫液。將洗脫液合并后，減壓濃縮至干，得到淺黃色利普司他汀粗品。
用210mL正己烷溶解利普司他汀粗品后，通過降溫法進(jìn)行結(jié)晶，過濾后得到利普司他汀白色晶體12. 9g (含利普司他汀10. 0g), HPLC檢測(cè)純度97. 0%，含量77. 6%，總收率72. 5%。
權(quán)利要求
1.一種利普司他汀的提純方法，其特征在于包括如下步驟①萃取含有利普司他汀的發(fā)酵液中加入乙酸乙酯，在攪拌的條件下萃取2 5小時(shí)， 靜置分相后，上清液濃縮至干，得黃褐色利普司他汀粗品；②溶解、過濾將①所得的黃褐色利普司他汀粗品用有機(jī)溶媒進(jìn)行溶解，過濾除去不溶性雜質(zhì)，將濾液減壓濃縮至原體積的1/4 1/6，得濃縮液；③硅膠柱層析將硅膠填料裝入層析柱，用庚烷平衡好后，將②所得的濃縮液上到硅膠柱，上樣量為柱體積的10% 20%，用庚烷和乙酸乙酯的混合溶媒作為流動(dòng)相進(jìn)行洗雜和洗脫，流速控制在O. 5 1. 5倍柱體積/小時(shí)，收集純度> 94%的利普司他汀洗脫液，將洗脫液減壓濃縮至干，得淺黃色油狀利普司他汀粗品；④結(jié)晶將③所得的淺黃色油狀利普司他汀粗品用有機(jī)溶媒溶解，降溫法結(jié)晶，過濾后得利普司他汀白色晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟①所述乙酸乙酯的加入量與發(fā)酵液體積比為2 4:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟②所述有機(jī)溶媒為環(huán)己烷、庚烷或正己燒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟②所述有機(jī)溶媒為庚烷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟②所述有機(jī)溶媒，按重量體積比計(jì)，有機(jī)溶媒的加入量與利普司他汀的比為20 40:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟③所述硅膠填料為100 200目、 200 300目或300 400目中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟③所述洗雜所用的流動(dòng)相中庚烷與乙酸乙酯的體積比為95:5 88:12。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟③所述洗脫所用的流動(dòng)相中庚烷與乙酸乙酯的體積比為85:15 70:30。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟④所述的有機(jī)溶媒為石油醚、庚烷或正己烷。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟④所述的有機(jī)溶媒，按重量體積比計(jì)，其加入量與利普司他汀的比為15 25:1。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利普司他汀的提純方法。本發(fā)明的技術(shù)方案主要包括發(fā)酵液直接萃取濃縮、有機(jī)溶媒溶解過濾、硅膠柱層析以及結(jié)晶等步驟，從而得到重量含量75%-85%，HPLC檢測(cè)純度≥97%的利普司他汀，總收率達(dá)72%。本發(fā)明的提純方法具有步驟簡(jiǎn)單、周期短、產(chǎn)品收率高、質(zhì)量好，所用溶媒均可以回收再利用，大大降低了生產(chǎn)成本，減輕了對(duì)環(huán)境的污染。
文檔編號(hào)C07D305/12GK102993134SQ20121059418
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者趙志全, 梁紅寶 申請(qǐng)人:魯南新時(shí)代生物技術(shù)有限公司