漿細(xì)胞或成漿細(xì)胞的選擇方法、靶抗原特異性抗體的制備方法、新的單克隆抗體的制作方法
【專利摘要】提供由廣泛的動(dòng)物物種高效率地制作抗原特異性單克隆抗體的技術(shù)，利用該技術(shù)提供新的抗原特異性單克隆抗體。用靶抗原對(duì)非人動(dòng)物進(jìn)行免疫，從免疫成立后的非人動(dòng)物中采集淋巴液等，或者，從具有抗靶抗原抗體的人采集淋巴液等，將采集的淋巴液等和(1)標(biāo)記的靶抗原以及(2)選擇性地與漿細(xì)胞和/或成漿細(xì)胞結(jié)合的標(biāo)記物質(zhì)混合，選擇上述(1)標(biāo)記的靶抗原和(2)標(biāo)記物質(zhì)所結(jié)合的細(xì)胞。根據(jù)上述方法，選擇與靶抗原特異性結(jié)合的漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞中的至少一種細(xì)胞，從選擇的細(xì)胞中采集抗靶抗原抗體基因，鑒定其核苷酸序列，根據(jù)鑒定的基因的核苷酸序列制備所述抗體或抗體片段，并制備靶抗原特異性抗體或抗體片段。
【專利說明】漿細(xì)胞或成漿細(xì)胞的選擇方法、靶抗原特異性抗體的制備方法、新的單克隆抗體
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的相互參照
本申請(qǐng)主張于2011年3月30日申請(qǐng)的日本特愿2011 — 075135號(hào)的優(yōu)先權(quán)，其全部?jī)?nèi)容作為公開而特別引用于此。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及漿細(xì)胞或成漿細(xì)胞的選擇方法、靶抗原特異性抗體的制備方法、新的單克隆抗體。更詳細(xì)而言，本發(fā)明涉及與靶抗原特異性結(jié)合的漿細(xì)胞或成漿細(xì)胞的選擇方法、使用利用該方法得到的漿細(xì)胞或成漿細(xì)胞制備靶抗原特異性抗體的方法、以及利用該抗體制備方法新得到的新的單克隆抗體。
【背景技術(shù)】
[0003]目前，抗體藥品開發(fā)中使用的單克隆抗體，大多是將小鼠抗體人源化而得到的抗體。其原因在于，作為單克隆抗體制作方法，確立了小鼠雜交瘤法。但是，對(duì)于作為抗體藥物的靶標(biāo)的人蛋白的功能性抗原表位中的多數(shù)，人-小鼠間的氨基酸序列同源性高，即使用這樣的抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，由于 免疫耐受，也難以得到特異性高的抗體。因此，必須制作數(shù)量巨大的雜交瘤并進(jìn)行篩選，直至獲得具有高能力的抗體。于是，為了開發(fā)新的抗體藥品，人們對(duì)盡可能與人的抗原具有不同的氨基酸序列的動(dòng)物物種進(jìn)行免疫，回避免疫耐受的限制，從而尋求用于高效率地生產(chǎn)具有高能力的單克隆抗體的方法。
[0004]以往的單克隆抗體制作廣泛采用下述方法:通過使抗體產(chǎn)生細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，制作具有自主增殖能力的雜交瘤，再從中篩選具有產(chǎn)生具備靶標(biāo)特異性的抗體的能力的克隆。但是，雜交瘤方法存在幾個(gè)缺點(diǎn)。其中一個(gè)缺點(diǎn)是，由于雜交瘤技術(shù)是限于小鼠抗體產(chǎn)生細(xì)胞的方法，所以難以在其他動(dòng)物物種中應(yīng)用。而且，雜交瘤的篩選費(fèi)時(shí)費(fèi)事，這也是缺點(diǎn)。另外，即使進(jìn)行篩選，也無法保證得到具有抗原特異性抗體產(chǎn)生能力的克隆，這也是個(gè)問題。
[0005]為了克服上述缺點(diǎn)，在人單克隆抗體的制作中，開發(fā)了應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISP0T)的具有抗原特異性抗體產(chǎn)生能力的漿細(xì)胞(抗原特異性漿細(xì)胞)的鑒定法(日本特開 2009 - 34047 號(hào)公報(bào):專利文獻(xiàn) I (W02009/017226、US2011/0294678A1)(它們的全部?jī)?nèi)容作為公開而特別引用于此))。該方法是將由人淋巴細(xì)胞純化的漿細(xì)胞放入實(shí)施了特殊加工的微孔中，將由漿細(xì)胞大量分泌的抗體固定在漿細(xì)胞周圍的底座上，使標(biāo)記抗原與其反應(yīng)，從而進(jìn)行抗原特異性漿細(xì)胞的鑒定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]但是，在上述專利文獻(xiàn)I記載的方法中，抗原特異性漿細(xì)胞的鑒定需要特殊的裝置，細(xì)胞的回收也需要非常繁雜的操作。而且，在該方法中，必須進(jìn)行使用細(xì)胞表面抗原的漿細(xì)胞的純化操作，所以無法由尚未確立漿細(xì)胞鑒定法的動(dòng)物物種制作抗原特異性單克隆抗體。
[0007]因此，本發(fā)明的目的在于:克服上述缺點(diǎn)，提供由廣泛的動(dòng)物物種高效率地制作抗原特異性單克隆抗體的技術(shù)。
[0008]而且，本發(fā)明的目的還在于:利用上述新開發(fā)的制作抗原特異性單克隆抗體的技術(shù)，提供新的抗原特異性單克隆抗體。
[0009]B細(xì)胞在細(xì)胞膜上表達(dá)抗體(膜型抗體)，抗原與其結(jié)合，從而引起免疫球蛋白基因的類別轉(zhuǎn)換和體細(xì)胞高頻率突變，其結(jié)果，選出與抗原的親和性增強(qiáng)的B細(xì)胞。該高親和性B細(xì)胞中的一部分分化成漿細(xì)胞，成為抗體產(chǎn)生細(xì)胞。已知隨著該分化，漿細(xì)胞通過免疫球蛋白基因的選擇性剪接使膜型抗體的表達(dá)消失，使分泌型抗體大量表達(dá)(ImmunologicalReviews, Sarah A.0racki, Jennifer A.Walker, Margaret L.Hibbs, Lynn M.Corcoran, David M.Tarlinton, Special Issue: B-Lymphocyte Biology,第 237 卷，第I期，第140-159頁，September 2010:非專利文獻(xiàn)2 (其全部?jī)?nèi)容作為公開而特別引用于此))。
[0010]在進(jìn)行大鼠、豚鼠、兔的漿細(xì)胞分析的過程中，發(fā)明人新發(fā)現(xiàn)了:在由這些動(dòng)物得到的漿細(xì)胞表面，有能夠進(jìn)行抗原結(jié)合分析的量的膜型抗體分子在表達(dá)。由此認(rèn)為:通過使標(biāo)記抗原與在漿細(xì)胞表面表達(dá)的高親和性膜型抗體直接結(jié)合，有可能可以鑒定抗原特異性漿細(xì)胞。但是，在漿細(xì)胞膜上表達(dá)的抗體分子的量少，因此即使存在與標(biāo)記抗原特異性結(jié)合的漿細(xì)胞，由于標(biāo)記抗原的非特異性吸附而產(chǎn)生的噪音，也難以鑒定抗原特異性漿細(xì)胞。
[0011]作為通過使用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性熒光色素來高效率地鑒定漿細(xì)胞的方法，發(fā)明人開發(fā)了“漿細(xì)胞鑒定和分離用熒光探針以及使用該探針的漿細(xì)胞的鑒定或分離方法”，并申請(qǐng)了專利[W02011/118579 (其全部?jī)?nèi)容作為公開而特別引用于此)]。
[0012]發(fā)明人發(fā)現(xiàn):利用只是使熒光標(biāo)記抗原和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)親和性熒光色素與由免疫動(dòng)物制備的細(xì)胞懸浮溶液作用的單純的操作，可以鑒定抗原特異性漿細(xì)胞，完成了本發(fā)明。
[0013]本發(fā)明如下。
[0014][I]選擇與靶抗原特異性結(jié)合的漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞中的至少一種的方法，該方法包括:
從非人動(dòng)物中采集來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，在體外用靶抗原致敏所采集的來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，或者，用靶抗原對(duì)非人動(dòng)物進(jìn)行免疫，
從免疫成立后的非人動(dòng)物中采集來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，將上述致敏的或采集的來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞和(I)標(biāo)記的靶抗原以及(2)選擇性地與漿細(xì)胞和/或成漿細(xì)胞結(jié)合的標(biāo)記物質(zhì)混合，
選擇上述⑴標(biāo)記的靶抗原和⑵標(biāo)記物質(zhì)所結(jié)合的細(xì)胞。
[0015][2]選擇與靶抗原特異性結(jié)合的人的漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞中的至少一種的方法，該方法包括:
從人中采集來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，在體外用靶抗原致敏所采集的來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，或者，從具有抗靶抗原抗體的人中采集來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，
將上述致敏的或采集的來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞和(I)標(biāo)記的靶抗原以及(2)選擇性地與漿細(xì)胞和/或成漿細(xì)胞結(jié)合的標(biāo)記物質(zhì)混合，
選擇上述(I)標(biāo)記的靶抗原和(2)標(biāo)記物質(zhì)所結(jié)合的細(xì)胞。
[0016][3]靶抗原特異性抗體或抗體片段的制備方法，該方法包括:
利用權(quán)利要求1或2所述的方法選擇與靶抗原特異性結(jié)合的漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞中的至少一種細(xì)胞，
從選擇的細(xì)胞中采集抗靶抗原抗體基因，鑒定其核苷酸序列，
根據(jù)鑒定的基因的核苷酸序列，制備上述抗體或抗體片段。
[0017][4]權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，
選擇性地與漿細(xì)胞和/或成漿細(xì)胞結(jié)合的標(biāo)記物質(zhì)是用于漿細(xì)胞和/或成漿細(xì)胞的鑒定或分離的熒光探針，該熒光探針對(duì)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色選擇性高于其對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以外的細(xì)胞器的染色選擇性，通過利用該熒光探針進(jìn)行的染色，可以識(shí)別漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞與漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞以外的細(xì)胞。
[0018][5]權(quán)利要求4所述的方法，其中，上述熒光探針選自(I)兩親性、陽離子型且具有中等程度的脂溶性的物質(zhì)、以及(2)對(duì)顯示出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布的蛋白具有一定以上的親和性的物質(zhì)。
[0019][6]權(quán)利要求5所述的方法，其中，上述兩親性的兩親性指數(shù)(Al)為+6>AI>0，中等程度的脂溶性的疏水性指數(shù)(1gP)為+6>l ogP>0，一定以上的親和性的解離常數(shù)為0.?μΜ~0.1nM的范圍。
[0020][7]權(quán)利要求4~6中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以外的細(xì)胞器是質(zhì)膜、線粒體、高爾基體、溶酶體、過氧化物酶體、核、中心體、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、吞噬體、核內(nèi)體或聚集體。
[0021][8]權(quán)利要求4~7中任一項(xiàng)所述的方法,其中，上述突光探針選自突光標(biāo)記格列本脲、熒光標(biāo)記布雷菲德菌素Α、熒光探針和熒光蛋白。
[0022][9]序列表的SEQ ID NO:1所示抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈恒定區(qū)的基因或編碼具有序列表的SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈恒定區(qū)的妝的基因。
[0023][10]序列表的SEQ ID NO: 2所示抗人胰島素的豚鼠抗體的κ鏈恒定區(qū)的基因或編碼具有序列表的SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的κ鏈恒定區(qū)的妝的基因。
[0024][11]序列表的SEQ ID NO: 3所示抗人胰島素的豚鼠抗體的λ鏈恒定區(qū)的基因或編碼具有序列表的SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的λ鏈恒定區(qū)的妝的基因。
[0025][12]具有序列表的SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈恒定區(qū)的肽。
[0026][13]具有序列表的SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的κ鏈恒定區(qū)的肽。
[0027][14]具有序列表的SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的λ鏈恒定區(qū)的肽。
[0028][15]序列表的SEQ ID NO: 7~SEQ ID NO: 18中任一個(gè)所示的抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈可變區(qū)的基因或編碼具有SEQ ID NO: 19~SEQ ID NO: 30和SEQ ID NO:89~SEQ ID NO: 91中任一個(gè)所示的氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的、鏈可變區(qū)的妝的基因。
[0029][16]序列表的SEQ ID NO: 31~SEQ ID NO: 42中任一個(gè)所示的抗人胰島素的豚鼠抗體的κ鏈可變區(qū)的基因或編碼具有SEQ ID NO: 43~SEQ ID NO: 54和SEQ ID NO:86~SEQ ID NO: 88中任一個(gè)所示的氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的κ鏈可變區(qū)的妝的基因。
[0030][17]具有 SEQ ID NO: 19 ~SEQ ID NO: 30 和 SEQ ID NO: 89 ~SEQ ID NO: 91中任一個(gè)所示的氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈可變區(qū)的肽。
[0031][18]具有 SEQ ID NO: 43 ~SEQ ID NO: 54 和 SEQ ID NO: 86 ~SEQ ID NO: 88中任一個(gè)所示的氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的κ鏈可變區(qū)的肽。
[0032][19]抗人胰島素的豚鼠單克隆抗體，該抗體具有Y鏈，所述Y鏈具有SEQ ID NO:19~SEQ ID NO: 30和SEQ ID NO: 89~SEQ ID NO: 91中任一個(gè)所示的氨基酸序列作為可變區(qū)，并且具有SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列作為恒定區(qū)。
[0033][20]抗人胰島素的豚鼠單克隆抗體，該抗體具有κ鏈，所述κ鏈具有SEQ ID NO:43~SEQ ID NO: 54和SEQ ID NO: 86~SEQ ID NO: 88中任一個(gè)所示的氨基酸序列作為可變區(qū)，并且具有SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列作為恒定區(qū)。
[0034][21]抗人胰島素的 豚鼠單克隆抗體，該抗體包含κ鏈或者Υ鏈，所述κ鏈包含下述κ鏈⑶R1、κ鏈⑶R2和κ鏈⑶R3中各一個(gè)的任意組合，所述Y鏈包含下述Y鏈⑶R1、Y鏈⑶R2和Y鏈⑶R3中各一個(gè)的任意組合。
【權(quán)利要求】
1.選擇與靶抗原特異性結(jié)合的漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞中的至少一種的方法，該方法包括: 從非人動(dòng)物中采集來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，在體外用靶抗原致敏所采集的來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，或者，用靶抗原對(duì)非人動(dòng)物進(jìn)行免疫； 從免疫成立后的非人動(dòng)物中采集來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞；將上述致敏的或采集的來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞和(I)標(biāo)記的靶抗原以及(2)選擇性地與漿細(xì)胞和/或成漿細(xì)胞結(jié)合的標(biāo)記物質(zhì)混合；以及選擇上述(I)標(biāo)記的靶抗原和(2)標(biāo)記物質(zhì)所結(jié)合的細(xì)胞。
2.選擇與靶抗原特異性結(jié)合的人的漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞中的至少一種的方法，該方法包括: 從人中采集來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，在體外用靶抗原致敏所采集的來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞，或者，從具有抗靶抗原抗體的人中采集來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞； 將上述致敏的或采集的來自淋巴液、淋巴組織、血細(xì)胞樣品或骨髓的細(xì)胞和(I)標(biāo)記的靶抗原以及(2)選擇性地與漿細(xì)胞和/或成漿細(xì)胞結(jié)合的標(biāo)記物質(zhì)混合；以及選擇上述⑴標(biāo)記的靶抗原和⑵標(biāo)記物質(zhì)所結(jié)合的細(xì)胞。
3.靶抗原特異性抗體或抗體片段的制備方法，該方法包括: 利用權(quán)利要求1或2所述的方法選擇與靶抗原特異性結(jié)合的漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞中的至少一種細(xì)胞； 從選擇的細(xì)胞中采集抗靶抗原抗體基因，鑒定其核苷酸序列；以及 根據(jù)鑒定的基因的核苷酸序列，制備上述抗體或抗體片段。
4.權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的方法，其中， 選擇性地與漿細(xì)胞和/或成漿細(xì)胞結(jié)合的標(biāo)記物質(zhì)是用于漿細(xì)胞和/或成漿細(xì)胞的鑒定或分離的熒光探針，該熒光探針對(duì)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色選擇性高于其對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以外的細(xì)胞器的染色選擇性，通過利用該熒光探針進(jìn)行的染色，可以識(shí)別漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞與漿細(xì)胞和成漿細(xì)胞以外的細(xì)胞。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述熒光探針選自:(1)兩親性、陽離子型且具有中等程度的脂溶性的物質(zhì)；以及(2)對(duì)顯示出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布的蛋白具有一定以上的親和性的物質(zhì)。
6.權(quán)利要求5所述的方法，其中，上述兩親性的兩親性指數(shù)(Al)為+6>AI>0，中等程度的脂溶性的疏水性指數(shù)(1gP)為+6>logP>0，一定以上的親和性的解離常數(shù)為0.?μΜ~0.1nM的范圍。
7.權(quán)利要求4~6中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以外的細(xì)胞器是質(zhì)膜、線粒體、高爾基體、溶酶體、過氧化物酶體、核、中心體、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、吞噬體、核內(nèi)體或聚集體。
8.權(quán)利要求4~7中任一項(xiàng)所述的方法,其中，上述突光探針選自突光標(biāo)記格列本脲、熒光標(biāo)記布雷菲德菌素Α、熒光探針和熒光蛋白。
9.具有序列表的SEQID NO:1所示核苷酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈恒定區(qū)的基因或編碼具有序列表的SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈恒定區(qū)的肽的基因。
10.具有序列表的SEQID NO: 2所示核苷酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的κ鏈恒定區(qū)的基因或編碼具有序列表的SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的K鏈恒定區(qū)的肽的基因。
11.具有序列表的SEQID NO: 3所示核苷酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的λ鏈恒定區(qū)的基因或編碼具有序列表的SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的λ鏈恒定區(qū)的肽的基因。
12.具有序列表的SEQID NO: 4所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的gamma鏈恒定區(qū)的肽。
13.具有序列表的SEQID NO: 5所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的κ鏈恒定區(qū)的肽。
14.具有序列表的SEQID NO: 6所示氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的λ鏈恒定區(qū)的肽。
15.序列表的SEQID NO: 7~SEQ ID NO: 18中任一個(gè)所示的抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈可變區(qū)的基因或編碼SEQ ID NO: 19~SEQ ID NO: 30和SEQ ID NO: 89~SEQID NO: 91中任一個(gè)所示的抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈可變區(qū)的肽的基因。
16.序列表的SEQID NO: 31~SEQ ID NO: 42中任一個(gè)所示的抗人胰島素的豚鼠抗體的K鏈可變區(qū)的基因或編碼SEQ ID NO: 43~SEQ ID NO: 54和SEQ ID NO: 86~SEQID NO: 88中任一個(gè)所示的抗人胰島素的豚鼠抗體的K鏈可變區(qū)的肽的基因。
17.具有SEQ ID NO: 19 ~SEQ ID NO: 30 和 SEQ ID NO: 89 ~SEQ ID NO: 91 中任一個(gè)所示的氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的Y鏈可變區(qū)的肽。
18.具有SEQ ID NO: 43 ~SEQ ID NO: 54 和 SEQ ID NO: 86 ~SEQ ID NO: 88 中任一個(gè)所示的氨基酸序列的抗人胰島素的豚鼠抗體的K鏈可變區(qū)的肽。
19.抗人胰島素的豚鼠單克隆抗體，該抗體具有Y鏈，所述Y鏈具有SEQID NO: 19~SEQ ID NO: 30和SEQ ID NO: 89~SEQ ID NO: 91中任一個(gè)所示的氨基酸序列作為可變區(qū)，并且具有SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列作為恒定區(qū)。
20.抗人胰島素的豚鼠單克隆抗體，該抗體具有K鏈，所述K鏈具有SEQID NO: 43~SEQ ID NO: 54和SEQ ID NO: 86~SEQ ID NO: 88中任一個(gè)所示的氨基酸序列作為可變區(qū)，并且具有SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列作為恒定區(qū)。
21.抗人胰島素的豚鼠單克隆抗體，該抗體包含K鏈或gamma鏈，所述Κ鏈包含下述K鏈⑶R1、K鏈⑶R2和K鏈⑶R3中各一個(gè)的任意組合，所述Y鏈包含下述Y鏈⑶R1、Y鏈⑶R2和Y鏈⑶R3中各一個(gè)的任意組合:
【文檔編號(hào)】C07K16/18GK103534352SQ201280016777
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2012年3月28日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月30日
【發(fā)明者】黑澤信幸, 磯部正治 申請(qǐng)人:國立大學(xué)法人富山大學(xué)