組合疫苗的制作方法
【專利摘要】本公開涉及包含兩種或更多種免疫原性葡萄球菌多肽的組合物，以及包含免疫原性葡萄球菌多肽的多價疫苗組合物。
【專利說明】組合疫苗
[0001]本公開涉及預(yù)防或治療人和動物體內(nèi)葡萄球菌感染的、包含兩種或更多種免疫原性葡萄球菌多肽的組合物和包含免疫原性葡萄球菌多肽的多價疫苗組合物。
[0002]疫苗可預(yù)防多種傳染性疾病。因此，許多現(xiàn)代疫苗由病原體的預(yù)防性抗原制得，這些抗原通過分子克隆分離并純化。這些疫苗被稱為“亞單位疫苗”。亞單位疫苗的開發(fā)已經(jīng)成為最近幾年中大量研究的焦點。新的病原體的出現(xiàn)和抗生素抗性的發(fā)展已經(jīng)產(chǎn)生了開發(fā)新的疫苗及鑒別用于開發(fā)亞單位疫苗的其他候選分子的需求。同樣，基因組和蛋白質(zhì)組研究中發(fā)現(xiàn)的新的疫苗抗原使得能夠開發(fā)新的亞單位疫苗候選者，尤其是針對細菌的病原體。然而，盡管亞單位疫苗傾向于消除滅活或減毒病原體疫苗的副作用，它們的“純”態(tài)意味著亞單位疫苗不總是具有充足的免疫原性以給予防護。
[0003]一種提高疫苗組合物效力的方法為提供包含顯性抗原的多價疫苗，該顯性抗原能引發(fā)B細胞和T細胞應(yīng)答從而在接受疫苗的個體內(nèi)發(fā)起更強烈的免疫應(yīng)答。典型的多價疫苗可以是包含多種抗原分子的全細胞疫苗。例如，卡介苗(“BGG”)包含能在人體內(nèi)引發(fā)預(yù)防性免疫的減毒牛結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium bovis)菌株。對于許多病原體，化學(xué)滅活或熱滅活雖然可以產(chǎn)生給予預(yù)防性免疫的疫苗免疫原，其也產(chǎn)生諸如發(fā)燒和注射部位反應(yīng)的副作用。就細菌而言，滅活的生物體傾向于具有如此的毒性，使得其副作用限制了這類天然的疫苗免疫原的應(yīng)用，因此使得疫苗開發(fā)滯后于藥物開發(fā)。而且，使用全細胞滅活生物體的有效的疫苗開發(fā)遇到表位掩蔽、免疫顯性、低抗原濃度和抗原過剩的問題。
[0004]目前還沒有預(yù)防或治療金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染的有效的疫苗接種方法。金黃色葡萄球菌為一種細菌，其在約20-40%的正常健康人群中的一般棲所為鼻子的上皮層，并且其還常見于人的皮膚上，一般不產(chǎn)生危害。然而，在某些情形下，尤其是當皮膚受到損傷時，該病原體可以引起感染。在患者可能接受手術(shù)治療和/或服用免疫抑制藥物的醫(yī)院，這是一個突出的問題。由于他們已接受的治療，這些患者更易于受到金黃色葡萄球菌感染。由于抗生素在控制微生物感染中的廣泛使用，金黃色葡萄球菌的耐抗生素菌株已經(jīng)出現(xiàn)。耐甲氧西林的菌株已普遍存在，且這些耐性菌株中的許多還耐幾種其他的抗生素。
[0005]因此，金黃色葡萄球菌是能引起許多種疾病的主要的人病原體，其中的一些疾病為可危害生命的疾病，包括敗血癥、心內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎和中毒性休克。這種能力由生物體的多樣性及其參與毒力的組分庫決定。在感染的開始階段及隨著感染的進行，生物體的需求和環(huán)境會發(fā)生變化，且這可以通過金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的毒性決定因子的相應(yīng)變化反映。在感染開始時，病原體附著到宿主組織上并因此產(chǎn)生大量的細胞表面相關(guān)的附著蛋白，這一點非常重要。病原體還具有通過產(chǎn)生這樣的因子而逃避宿主防御的能力，該因子減少吞噬作用或干擾細胞被循環(huán)抗體識別的能力。
[0006]因此，越來越需要鑒別具有預(yù)防性并可用于多價疫苗中的葡萄球菌抗原。這種組合可以與諸如多聚糖抗原的非蛋白的免疫原性分子和抗菌劑組合使用，以提供用于控制葡萄球菌感染的治療策略。也在本公開范圍內(nèi)的是，改良治療方案以便用作為包含多種抗原的單一疫苗給藥的備選方案的一系列短暫分開的給藥來免疫個體。[0007]因此，本公開涉及組合或多價免疫原性組合物和疫苗，以及它們在預(yù)防和治療葡萄球菌感染中的用途。我們公開了這樣的多肽，其單獨具有預(yù)防性且通常為包含胞外結(jié)構(gòu)域的跨膜蛋白并為葡萄球菌細胞生長所必需。例如，divIB為包含胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞外結(jié)構(gòu)域的整膜蛋白。divIB及其片段，提供了對動物模型中至少一種金黃色葡萄球菌感染的預(yù)防。相關(guān)的基因divIC也是一種整膜蛋白，其胞外結(jié)構(gòu)域可引發(fā)對葡萄球菌感染的預(yù)防性免疫。本公開還涉及由基因PheP、YdiE和FtsL編碼的抗原，所述抗原的每一種都具有胞外結(jié)構(gòu)域。
[0008]根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了包含選自以下的兩種或更多種不同多肽的免疫原性組合物，其中所述多肽由不同的葡萄球菌基因編碼:
[0009]i)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列或由SEQ IDNO:20所示的氨基酸序列組成；
[0010]ii)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQ ID NO: 21所示的氨基酸序列或由SEQ IDNO:21所示的氨基酸序列組成；
[0011]iii)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQ ID NO: 22所示的氨基酸序列或由SEQ IDNO:22所示的氨基酸序列組成；
[0012]iv)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQ ID NO: 23所示的氨基酸序列或由SEQ IDNO:23所示的氨基酸序列組成；
[0013]V)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列或由SEQ IDNO: 24所示的氨基酸序列組成；或
[0014]vi)修飾的葡萄球菌多肽，其中所述多肽為SEQ ID NO: 20、21、22、23或24所示的氨基酸序列的葡萄球菌多肽變體，其中所述序列通過一個或多個氨基酸殘基的插入、缺失或取代而被修飾，其中修飾的多肽與SEQ ID N0:20、21、22、23或24所示的多肽相比時，具有保留的或增強的免疫原性。
`[0015]修飾的葡萄球菌多肽或變異的葡萄球菌多肽在氨基酸序列上可以相差一個或多個取代、插入、缺失、截斷，，所述一個或多個取代、插入、缺失、截斷可以以任何組合存在。其中，優(yōu)選的變體為通過保守氨基酸取代而從參考多肽衍生而來的變體。此類取代為用具有相似特性的另一種氨基酸取代給定氨基酸的取代。下列非限制性的取代列表被認為是保守型取代(類似的):a)丙氨酸、絲氨酸和蘇氨酸；b)谷氨酸和天冬氨酸；c)天冬酰胺和谷氨酰胺；d)精氨酸和賴氨酸；e)異亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸和纈氨酸；以及f)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。最優(yōu)選的是與衍生變體的參考多肽相比，保留或增強免疫原性和/或活性的變體。
[0016]在一個實施方案中，變體多肽與本文中闡述的全長氨基酸序列具有至少80-89%的序列同一性，更優(yōu)選至少90%的同一性，甚至更優(yōu)選至少95%的同一性，更優(yōu)選至少97%的同一性，且最優(yōu)選至少99%的同一性。
[0017]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述免疫原性組合物包含2、3、4或5種葡萄球菌多肽或基本上由2、3、4或5種葡萄球菌多肽組成。
[0018]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0019]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0020]ii)包含SEQ ID NO:21的多肽，或該多肽的抗原性片段。[0021]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0022]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0023]ii)包含SEQ ID NO:22的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0024]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0025]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0026]ii)包含SEQ ID NO:23的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0027]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的組合物:
[0028]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0029]ii)包含SEQ ID NO:24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0030]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0031]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0032]ii)包含SEQ ID NO: 23和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0033]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0034]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0035]ii)包含SEQ ID NO: 21和22的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0036]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0037]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0038]ii)包含SEQ ID NO: 22和23的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0039]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0040]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0041]ii)包含SEQ ID NO:21和23的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0042]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0043]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0044]ii)包含SEQ ID NO: 22和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0045]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0046]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0047]ii)包含SEQ ID NO: 21和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0048]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0049]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0050]ii)包含SEQ ID N0:21、23和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0051]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0052]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0053]ii)包含SEQ ID N0:22、23和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0054]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0055]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0056]ii)包含SEQ ID N0:21、22和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0057]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0058]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0059]ii)包含SEQ ID N0:21、22和23的多肽，或該多肽的抗原性片段。[0060]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0061]i)包含SEQ ID NO:20的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0062]ii)包含SEQ ID N0:21、22、23和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0063]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0064]i)包含SEQ ID NO:21的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0065]ii)包含SEQ ID NO:22的多肽，或該多肽的抗原性片段。 [0066]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0067]i)包含SEQ ID NO:21的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0068]ii)包含SEQ ID NO:23的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0069]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0070]i)包含SEQ ID NO:21的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0071]ii)包含SEQ ID NO:24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0072]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0073]i)包含SEQ ID NO:21的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0074]ii)包含SEQ ID NO: 23和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0075]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0076]i)包含SEQ ID NO:21的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0077]ii)包含SEQ ID NO: 22和23的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0078]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0079]i)包含SEQ ID NO:21的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0080]ii)包含SEQ ID NO: 22和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0081]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0082]i)包含SEQ ID NO:21的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0083]ii)包含SEQ ID N0:22、23和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0084]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0085]i)包含SEQ ID NO:22的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0086]ii)包含SEQ ID NO: 23和24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0087]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0088]i)包含SEQ ID NO:22的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0089]ii)包含SEQ ID NO:23的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0090]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0091]i)包含SEQ ID NO:22的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0092]ii)包含SEQ ID NO:24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0093]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了包含以下的免疫原性組合物:
[0094]i)包含SEQ ID NO:23的多肽，或該多肽的抗原性片段；和
[0095]ii)包含SEQ ID NO:24的多肽，或該多肽的抗原性片段。
[0096]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述組合物為疫苗組合物，且包含至少一種載體和/或佐劑。
[0097]佐劑(免疫增強劑或免疫調(diào)節(jié)劑)已經(jīng)被使用了幾十年，用于增強對疫苗抗原的免疫應(yīng)答。將佐劑并入疫苗制劑中旨在增強、促進和延長對疫苗抗原的特異性免疫應(yīng)答。佐劑的優(yōu)勢包括較弱抗原的免疫原性的增強、成功免疫所需要的抗原量的減少、所需加強免疫的頻率的減少以及老年和免疫功能不全的接種者內(nèi)免疫應(yīng)答的提高?？蛇x擇地，佐劑還可以用來優(yōu)化期望的免疫應(yīng)答，如涉及免疫球蛋白類別和誘導(dǎo)細胞毒性應(yīng)答或輔助T淋巴細胞應(yīng)答。此外，某些佐劑可以用于增強黏膜表面處的抗體應(yīng)答。氫氧化鋁和磷酸鋁或磷酸鈣通常被用于人類疫苗中。
[0098]可以根據(jù)佐劑的來源、作用機制和理化性質(zhì)，對它們進行分類。最常描述的佐劑類別為凝膠型、微生物、油乳劑和乳化劑基的、微粒、合成物和細胞因子。根據(jù)本發(fā)明，多于一種佐劑可以存在于最終的疫苗產(chǎn)品中。可以將它們與存在于疫苗中的單一抗原或所有抗原組合在一起，或者可以將每種佐劑與一種特定的抗原組合。當前使用或開發(fā)的佐劑的起源和性質(zhì)是高度不同的。例如，鋁基佐劑由簡單的無機化合物組成，而PLG是聚合的碳水化合物。MDP來源于細菌細胞壁；皂苷為植物來源，鯊烯來源于鯊魚肝，而重組內(nèi)源性免疫調(diào)節(jié)劑來源于重組細菌、酵母或哺乳動物細胞。存在幾種被批準用于獸用疫苗的佐劑，如對人類使用來說太具反應(yīng)性的礦物油乳劑。同樣地，弗氏完全佐劑，盡管為已知的最有效的佐劑之一，卻不適合用于人類。
[0099]載體為免疫原性的分子，當其結(jié)合到第二分子上時，可增加對后者的免疫應(yīng)答。術(shù)語“載體”以以下方式解釋。載體為免疫原性的分子，當其結(jié)合到第二分子上時，增加對后者的免疫應(yīng)答。一些抗原本質(zhì)上不具有免疫原性，然而當與諸如鑰孔戚血藍蛋白或破傷風(fēng)類毒素的外來蛋白分子聯(lián)合時，可能能產(chǎn)生抗體應(yīng)答。這類抗原含有B細胞表位，但沒有T細胞表位。這樣的綴合物(“載體”蛋白)的蛋白部分提供T細胞表位，其刺激輔助T細胞，依次刺激抗原特異性B細 胞分化為漿細胞并產(chǎn)生針對該抗原的抗體。
[0100]可以通過任何常規(guī)途徑給予本發(fā)明的疫苗組合物，包括注射、通過吸入，例如氣霧劑或滴鼻劑經(jīng)鼻噴霧。所述給予可以為，例如，靜脈內(nèi)給予、腹膜內(nèi)給予、肌肉內(nèi)給予、腔內(nèi)給予、皮下給予或皮內(nèi)給予。本發(fā)明的疫苗組合物以有效量給予。“有效量”是這樣量的疫苗組合物，其單獨或與其他劑量一起，產(chǎn)生期望的反應(yīng)。就治療特定細菌性疾病而言，期望的反應(yīng)是當受到傳染物威脅時提供預(yù)防作用。
[0101]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述疫苗組合物適用于作為鼻用噴霧給予。
[0102]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述疫苗組合物以吸入劑形式提供，并作為氣霧劑遞送。
[0103]當然，疫苗的量將取決于個體患者的參數(shù)，包括年齡、身體狀況、尺寸和重量、治療持續(xù)時間、同時進行的治療的性質(zhì)(如果存在)、具體給藥途徑及健康從業(yè)者的知識和專長內(nèi)的類似因素。這些因素是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的，且可以僅僅用常規(guī)試驗解決。通常優(yōu)選使用足以引發(fā)免疫的最大劑量的個別組分或其組合；即，根據(jù)合理的醫(yī)學(xué)判斷的最高安全劑量。然而，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解，由于醫(yī)療原因、心理原因或幾乎任何其他的原因，患者可能堅持較低劑量或可耐受劑量。
[0104]可以依照不同的參數(shù)，具體來說，依照使用的給藥模式和個體的狀態(tài)，選擇給予個體的疫苗的劑量。如果在施加的初始劑量下，個體內(nèi)的應(yīng)答不夠，可以采用更高的劑量(或通過不同的、更集中的遞送途徑有效實現(xiàn)更高的劑量)達到患者耐受力允許的程度。
[0105]一般來說，根據(jù)本領(lǐng)域內(nèi)的任何標準程序，以有效免疫劑量配制和給予疫苗劑量。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員了解用于給予疫苗組合物的其他方案，其中劑量、注射安排、注射部位、給藥模式等與上文不同。可在與上述大體相同的條件下進行對除人之外的哺乳動物的疫苗組合物的給藥，(例如，為了測試目的或獸用治療目的)。本文中使用的個體為哺乳動物，優(yōu)選人，且包括除人外的靈長類、奶牛、馬、豬、綿羊或山羊。
[0106]抗原的比值可以以成對方式發(fā)生改變。每種抗原的比值可以為1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1或10:1，以優(yōu)化個體對特定抗原組合的應(yīng)答。例如，如上文所述，divIB和YdiE的比值可以發(fā)生改變。
[0107]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，提供了本發(fā)明的疫苗組合物，其包含至少一種另外的抗菌劑。
[0108]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述藥劑為第二種不同的疫苗和/或免疫原性藥劑(例如細菌多肽和/或多糖抗原)。
[0109]根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含選自以下的核酸分子的組合物，所述核酸分子包含兩個或更多個不同的葡萄球菌基因的核苷酸序列或由兩個或更多個不同的葡萄球菌基因的核苷酸序列組成，并編碼免疫原性多肽:
[0110]i)核酸分子，其包含SEQ ID NO: 1或6所示的核苷酸序列或由SEQ ID NO: 1或6所示的核苷酸序列組成；
[0111]ii)核酸分子，其包含SEQ ID N0:2或7所示的核苷酸序列或由SEQ ID N0:2或7所示的核苷酸序列組成；
[0112]iii)核酸分子，其包含SEQ ID N0:3或8所示的核苷酸序列或由SEQ ID NO:3或8所示的核苷酸序列組成；
[0113]iv)核酸分子，其包含SEQ ID NO:4或9所示的核苷酸序列或由SEQ ID N0:4或9所示的核苷酸序列組成；`
[0114]v)核酸分子，其包含SEQ ID NO:5或10所示的核苷酸序列或由SEQ ID N0:5或10所示的核苷酸序列組成；
[0115]vi)包含核苷酸序列或由核苷酸序列組成的核酸分子，其中所述序列對于以上1-v中限定的核苷酸序列是遺傳密碼簡并的；或
[0116]vii)核酸分子，其互補鏈在嚴緊雜交條件下能與SEQ ID NO: 1、2、3、4、5、6、7、8、9或10的序列雜交，且其中所述核酸分子編碼葡萄球菌抗原性多肽。
[0117]當兩個互補的核酸分子彼此經(jīng)歷一定量的氫鍵結(jié)合時，核酸分子發(fā)生了雜交。雜交的嚴緊性可以根據(jù)核酸周圍的環(huán)境條件、雜交方法的性質(zhì)以及使用的核酸分子的組成和長度而不同。關(guān)于獲得特定的嚴緊性程度所需要的雜交條件的計算描述于 Sambrook et al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual(Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 2001)和 Tijssen, Laboratory Techniquesin Biochemistry and Molecular Biology—Hybridization with Nucleic Probes Part
I,Chapter2 (Elsevier, New York, 1993)。Tm為核酸分子的給定鏈的50%與其互補鏈雜交時的溫度。以下為雜交條件的示例性設(shè)置，且不具有限制性:
[0118]非常高的嚴緊性(允許共有至少90%同一性的序列雜交)
[0119]雜交:5XSSC，65°C，16小時
[0120]漂洗兩次:2XSSC，室溫(RT)，每次15分鐘[0121]漂洗兩次:0.5X SSC，65 V，每次20分鐘
[0122]高嚴緊性(允許共有至少80%同一性的序列雜交)
[0123]雜交:5X-6XSSC,65°C_70°C，16-20 小時
[0124]漂洗兩次:2XSSC，RT，每次5-20分鐘
[0125]漂洗兩次:1XSSC，55°C_70°C，每次 30 分鐘
[0126]低嚴'緊性(允許共有至少50%同一性的序列雜交)
[0127]雜交:6XSSC,RT 至 55。。，16-20 小時
[0128]漂洗至少兩次:2 X -3 X SSC，RT至55°C，每次20-30分鐘。
[0129]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述組合物為疫苗組合物，且包含至少一種載體和/或佐劑。
[0130]核酸或DNA組合疫苗包含編碼本文中公開的抗原性多肽的核酸分子。在制備DNA疫苗中，可以用本文中公開的相應(yīng)的核苷酸SEQ ID替代用氨基酸SEQ ID表示的多肽抗原的具體組合。
[0131]根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明的用于預(yù)防或治療遭受葡萄球菌感染或葡萄球菌感染引起的病癥的個體動物的組合疫苗。
[0132]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述葡萄球菌感染由選自以下的葡萄球菌引起:表皮葡萄球菌(S.印idermidis)、金黃色葡萄球菌、人葡萄球菌(S.hominis)、溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)、沃氏葡萄球菌(S.warneri)、頭狀葡萄球菌(S.capitis)、解糖葡萄球菌(S.saccharolyticus)、耳葡萄球菌(S.auricularis)、模仿葡萄球菌(S.simulans)、腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)、科氏葡萄球菌(S.cohnii)、木糖葡萄球菌(S.xylosus)、豬葡萄球菌(S.hyicus)、山羊葡萄球菌(S.caprae)、雞葡萄球菌(S.gal I inarum)、中間葡萄球菌(S.1ntermedius)。
[0133]在本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案中，所述葡萄球菌為金黃色葡萄球菌或表皮葡萄球菌。
[0134]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述個體為人。
[0135]在本發(fā)明的可供選擇的優(yōu)選實施方案中，所述個體為除人外的動物，優(yōu)選家畜，例如牛。
[0136]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述家畜被針對葡萄球菌細菌細胞引起的細菌性乳腺炎進行疫苗接種。
[0137]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述家畜為羊類動物(例如，綿羊、山羊)。
[0138]在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，所述家畜為?？苿游?例如，奶牛)。
[0139]葡萄球菌性乳腺炎是一種嚴重的病癥，其可影響家畜并可在通過給予抗生素來控制疾病方面以及減少產(chǎn)奶量方面產(chǎn)生相當大的費用。本發(fā)明的疫苗提供了對細菌，尤其是葡萄球菌性乳腺炎的具有成本效益的控制。
[0140]在本說明書的全部描述和權(quán)利要求中，詞語“包括(comprise)”和“含有(contain) ”及這些詞的變型,例如“包括(comprising) ”和“包括(comprises) ”,指“包括但不限于”，且不意圖(且不)排除其他的部分、添加物、組分、整數(shù)或步驟。
[0141]在本說明書的全部描述和權(quán)利要求中，單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)，除非上下文另有要求。具體來說，如果使用了不定冠詞，應(yīng)將本說明書理解為考慮復(fù)數(shù)以及單數(shù)，除非上下文要求并非如此。
[0142]應(yīng)將所描述的特性、整數(shù)、特征、化合物、化學(xué)部分或組連同本發(fā)明的具體方面、實施方案或?qū)嵗斫鉃檫m合于本文中描述的任何其他的方面、實施方案或?qū)嵗桥c其不相容。
[0143]現(xiàn)在將僅僅通過實例并參考以下的附圖來描述本發(fā)明的實施方案。
[0144]表3和表4闡述了，使用YdiE和divIB的胞外結(jié)構(gòu)域的組合抗原對小鼠模型的疫苗接種與一種抗原的疫苗接種的比較。
[0145]材料和方法
[0146]用于在大腸桿菌內(nèi)過表達金黃色葡萄球菌蛋白的膜外片段的質(zhì)粒的構(gòu)建
[0147]合成了選擇的PheP肽，并通過其C端的半胱氨酸將其綴合至載體蛋白KLH上，以充當用于疫苗接種的嵌合蛋白。用表1中顯示的寡核苷酸對，根據(jù)以下PCR反應(yīng)條件，從菌株金黃色葡萄球菌 SH1000 (Horsburgh MJ’Aish JL, White IJ, Shaw L, LithgowJK, Foster SJ:sigmaB modulates virulence determinant expression and stressresistance:characterization of a functional rsbU strain derived fromStaphylococcus aureus8325-4.J Bacterid 2002, 184:5457-5467)的染色體，PCR 擴增了YdiE、divIB、DivIC和FtsL的膜外片段:1個94°C的初始變性循環(huán)4分鐘；30個擴增循環(huán)的94°C變性30秒、45°C退火30秒和72°C延伸多達2.5分鐘；最后，72°C下，允許完成4分鐘的持續(xù)的擴增循環(huán)。
[0148]寡核苷酸內(nèi)設(shè)計的限制位點也被顯示在表1中(畫有下劃線的；Ncol或Xhol)。用相應(yīng)的限制酶(5’末端用Ncoi，且3’末端用Xhol)消化擴增片段，并將其克隆到來自Novagen的pET_21d(+)表達載體(Cat.N0.69743-3)的等同位點內(nèi)，并產(chǎn)生表1中顯示的過表達質(zhì)粒，生成T7標記的(部分的，位于N末端)和6XHis標記的(位于C末端)膜外片段形式。在SEQ ID中，T7標簽和His標簽以粗體表示，且目標蛋白的膜外部分被畫上了下劃線。過表達質(zhì)粒被轉(zhuǎn)入到大腸桿菌BL21內(nèi)，用于重組蛋白片段的過表達。
[0149]將上文中指出的PCR擴增片段在Ncol和Xhol位點處克隆到感受態(tài)pET21cK+)感受態(tài)質(zhì)粒載體內(nèi)，需要在T7標簽和膜外片段間，以及在后者和His標簽間加入鉸鏈氨基酸。在SEQ ID中，這些氨基酸既沒有被加粗，也沒有被畫上下劃線。
[0150]SEQ ID NO:25-28 的過表達
[0151]利用腦心浸出液肉湯(CM0225,Oxoid, United Kingdom),在 100 μ g/ml 氨節(jié)青霉素和Plac啟動子安慰誘導(dǎo)物IPTG(異丙基β-D-l-硫代半乳糖苷，ImM)的存在下，在37°C和強烈振蕩下，使SEQ ID N025至28從大腸桿菌BL21菌株內(nèi)的質(zhì)粒pGL597、pGL601、pALB26和PALB27過表達， 持續(xù)4至6小時。通過離心(5，000Xg，4°C，15分鐘)收獲細胞后，隨后用lmg/ml的溶于磷酸緩沖液的溶菌酶(緩沖液A ；0.1M ρΗ7.2)含有0.5MNaCl)裂解1小時，隨后進行超聲處理(在超聲波水浴中，3個循環(huán)的10秒脈沖)，通過13，OOOXg離心10分鐘分離目標蛋白的可溶形式和不可溶形式。接著通過凍融法(_80°C冷凍10分鐘和隨后解凍到室溫，3個循環(huán))和超聲處理法(在超聲波水浴中，3個循環(huán)的10秒脈沖)，將沉淀物重懸浮在含有8M尿素的緩沖液A中，隨后在18，OOOXg下離心25分鐘。通過首先特異性結(jié)合(通過它們的His標簽)至鎳(NiS04)結(jié)合的瓊脂糖層析柱(N1-瓊脂糖)，并用咪唑溶液洗脫，來純化上清液中的過表達的目標蛋白和溶解的沉淀，其中咪唑溶液以以下的階梯式方式穿過柱子:5%，5分鐘、30%，60分鐘、35%，60分鐘、50%，100分鐘和55%，100分鐘。用4%的丙烯酰胺/雙丙烯酰胺堆積層和12%的丙烯酰胺/雙丙烯酰胺分離層，在丙烯酰胺變性凝膠中分析來自該梯度洗脫的部分。將含有過表達的目標蛋白的部分合并并用無菌的磷酸緩沖液(8g NaCU0.2g KCl、1.44g Na2HP04、0.24g KH2PO4,每升蒸餾 H2O, pH7.4)透析。
[0152]所有的目標蛋白都從指定的菌株和指定的條件下成功地過表達。隨后還將它們從過表達的大腸桿菌菌株的總細胞蛋白內(nèi)容物中提取出來，其具有大于95%的純度。得到每種蛋白的純化的實例如下所示。
[0153]對Balb/C小鼠針對金黃色葡萄球菌感染的疫苗接種介導(dǎo)的預(yù)防的評估
[0154]第二次加強后一周，用1.V.(尾靜脈)注射100微升無內(nèi)毒素的含有
1.1 X IO7 (±0.5 X IO7)細胞的金黃色葡萄球菌Newman株的PBS感染每一動物。后者由腦心液浸出培養(yǎng)基(BHI)中生長到初穩(wěn)定期的培養(yǎng)物制得，接著用相同體積的PBS將其清洗3次。
[0155]10至14天后，根據(jù)時間表1脫頸處死動物。無菌條件下摘取每一動物的一對腎，并在無菌的PBS中勻漿。在PBS中進行腎勻漿液的連續(xù)稀釋并將其涂布在BHI瓊脂板上。對含有10至150個葡萄球菌集落的平板進行計數(shù)并進行稀釋校正。從平板上集落形成單位(CFU)的數(shù)目推斷出腎臟中活細胞的數(shù)目。從接種KLH的動物與接種divIB-2的動物的腎臟中金黃色葡萄球菌細胞的數(shù)目的差異確定接種divIB-2所賦予的預(yù)防感染可能性的評估。用曼-惠特尼檢驗計算差異的統(tǒng)計顯著性。與接種divIB-2的動物相比，接種KLH的動物中金黃色葡萄球菌的顯著更高(p〈0.05)的數(shù)目被認為具有預(yù)防作用。
[0156]疫苗接種:多價疫苗的一般策略
[0157]包含抗原的變體(綴合的所選的PheP肽、YdiE、divIB、divIC和FtsL)的組合(或多價)疫苗遵循相同的策略，但具有以下修改。疫苗引發(fā)混合物和加強混合物包含2種或更多種組分，而非單一組分。用于引發(fā)`和加強注射的混合疫苗的總體積在每只動物50-100微升的范圍內(nèi)波動。類似地，每次注射的總量可以在50-100微克之間變化。每種抗原貢獻給引發(fā)或加強混合物中疫苗總量的量在總量的20%至80%之間變化。
[0158]根據(jù)表2中的矩陣進行待評價的抗原的不同組合作為疫苗混合物。將組合分成3個層次。根據(jù)第I層實驗的結(jié)果，相應(yīng)地進行第2層實驗，且根據(jù)后者的結(jié)果，進行第3層。在每一層次中，疫苗接種實驗含有Y軸中的抗原，和沿X軸標記的抗原，并用相同的顏色標記。每次疫苗接種實驗用不同的顏色標記。
[0159]實施例1
[0160]實驗樣品為YdiE和divIB的胞外結(jié)構(gòu)域的組合抗原。給予每只小鼠(雌性Balb/C，約5-6周齡)的抗原的量為5 μ g的YdiE加上50 μ g的divIB。這些量包含在100 μ I的由50:50ν: V的PBS(磷酸鹽緩沖液)和弗氏完全佐劑(用于疫苗接種引發(fā))或弗氏不完全佐劑(用于疫苗接種加強)組成的洗脫液中。第O天進行引發(fā)，第14天時進行I次加強，并在第21天時進行2次加強。隨后，7天后，即，在第28天時，用金黃色葡萄球菌Newman株感染動物。每個測試組(對照組和實驗組)有10只動物。給予動物(兩者，對照組和實驗組)的細菌劑量為含有4Χ IO6個細菌的100 μ I PBS。感染期維持3天，且每天監(jiān)測動物的重量(我們還摘取了器官來評估器官中的細菌負荷，表4)。在此時處死了動物。對于每一動物，將實驗的輸出計算為第3天和第O天間的％體重減輕。這些實驗的結(jié)果顯示在表3中。表3中數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析:
[0161]檢驗:非參數(shù)統(tǒng)計假設(shè)檢驗-曼-惠特尼U
[0162]選用的選擇:雙尾，非配對，95%置信區(qū)間。
[0163]結(jié)果:(兩組比較)
[0164]II 和 Ι:ρ=0.622
[0165]III 和 1:ρ=0.039*
[0166]IV 和 Ι:ρ=0.001*
[0167]II 和 ΙΙΙ:ρ=0.061
[0168]II 和 IV:ρ=0.008*
[0169]III 和 IV:ρ=0.158
[0170]*具有組間統(tǒng)計學(xué)顯著差異的比較
[0171]表4中的統(tǒng)計分析:
[0172]檢驗:非參數(shù)統(tǒng)計假設(shè)檢驗-曼-惠特尼U
[0173]選用的選擇:雙尾，非配對，95%置信區(qū)間。
[0174]結(jié)果:(兩組比較)
[0175]II 和 1:ρ=0.2
[0176]III 和 Ι:ρ=0.105
[0177]IV 和 1:ρ=0.009*
[0178]II 和 ΙΙΙ:ρ=0.378
[0179]II 和 IV:p=0.131
[0180]III 和 IV:ρ=0.504
[0181]*具有組間統(tǒng)計學(xué)顯著差異的比較
【權(quán)利要求】
1.包含選自以下的兩種或更多種不同多肽的免疫原性組合物，其中所述多肽由不同的葡萄球菌基因編碼:i)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQID NO:21所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO: 21所示的氨基酸序列組成；ii)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQID N0:22所示的氨基酸序列或由SEQ IDNO:22所示的氨基酸序列組成；iii)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQID NO: 23所示的氨基酸序列或由SEQ IDNO:23所示的氨基酸序列組成；iv)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQID N0:24所示的氨基酸序列或由SEQ IDNO: 24所示的氨基酸序列組成；v)多肽或其免疫原性片段，其包含SEQID NO: 20所示的氨基酸序列或由SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列組成； vi)修飾的葡萄球菌多肽，其中所述葡萄球菌多肽為圖SEQID N0:21、22、23、24或20所示的氨基酸序列的多肽變體，其中所述序列通過一個或多個氨基酸殘基的插入、缺失或取代而被修飾，其中修飾的多肽與SEQ ID N0:21、22、23、24和20所示的多肽相比時，具有保留的或增強的免疫原性。
2.如權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其包含2、3、4或5種葡萄球菌多肽或基本上由2、3、4或5種葡萄球菌多肽組成。
3.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:21的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:22的多肽或該多肽的抗原性片段。
4.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:21的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:23的多肽或該多肽的抗原性片段。
5.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:21的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:24的多肽或該多肽的抗原性片段。
6.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID N0:21的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:23和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
7.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID N0:21的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:22和23的多肽或該多肽的抗原性片段。
8.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID N0:21的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:22和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
9.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID N0:21的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID N0:22、23和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
10.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:21的多肽或該多肽的抗原性片段。
11.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:22的多肽或該多肽的抗原性片段。
12.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:23的多肽或該多肽的抗原性片段。
13.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:24的多肽或該多肽的抗原性片段。
14.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:23和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
15.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:21和22的多肽或該多肽的抗原性片段。
16.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:22和23的多肽或該多肽的抗原性片段。
17.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:21和23的多肽或該多肽的抗原性片段。
18.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:22和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
19.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:21和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
20.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:21、23和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
21.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:22、23和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
22.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:21、22和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
23.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID N0:21、22和23的多肽或該多肽的抗原性片段。
24.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:20的多肽或該多肽的抗原性片段；和 ii)包含SEQID N0:21、22、23和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
25.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:22的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:23和24的多肽或該多肽的抗原性片段。
26.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:22的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:23的多肽或該多肽的抗原性片段。
27.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:22的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:24的多肽或該多肽的抗原性片段。
28.如權(quán)利要求1或2所述的免疫原性組合物，其包含:i)包含SEQID NO:23的多肽或該多肽的抗原性片段；和ii)包含SEQID NO:24的多肽或該多肽的抗原性片段。
29.如權(quán)利要求1-28中任一項所述的免疫原性組合物，其還包含至少一種載體和/或佐劑。
30.如權(quán)利要求1-29中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述組合物為疫苗。
31.如權(quán)利要求30所述的疫苗組合物，其中所述組合物適用于作為鼻用噴霧給予。
32.如權(quán)利要求31所述的疫苗組合物，其中組合物以吸入劑形式提供，并且作為氣霧劑遞送。
33.如權(quán)利要求30-32中任一項所述的疫苗組合物，其包含至少一種另外的抗菌劑。
34.如權(quán)利要求33所述的疫苗組合物，其中所述抗菌劑為第二種不同的疫苗和/或免疫原性藥劑。
35.包含選自以下的核酸分子的組合物，所述核酸分子包含兩個或更多個不同的葡萄球菌基因的核苷酸序列或由兩個或更多個不同的葡萄球菌基因的核苷酸序列組成，并編碼免疫原性多肽:i)核酸分子，其包含SEQID NO:7所示的核苷酸序列或由SEQ ID N0:7所示的核苷酸序列組成；ii)核酸分子，其包含SEQID N0:8所示的核苷酸序列或由SEQ ID N0:8所示的核苷酸序列組成；iii)核酸分子，其包含SEQID NO:9所示的核苷酸序列或由SEQ ID N0:9所示的核苷酸序列組成；iv)核酸分子，其包含SEQID NO: 10所示的核苷酸序列或由SEQ ID N0:10所示的核苷酸序列組成；v)核酸分子，其包含SEQID N0:6所示的核苷酸序列或由SEQ ID N0:6所示的核苷酸序列組成；Vi)核酸分子，其包含核苷酸序列或由核苷酸序列組成，其中所述序列對于以上1-v中限定的核苷酸序列是遺傳密碼簡并的；或vii)核酸分子，其互補鏈在嚴緊的雜交條件下可與SEQ ID NO: 7、8、9、10或6中的序列雜交，并且其中所述核酸分子編碼葡萄球菌抗原性多肽。
36.如權(quán)利要求35所述的組合物，其包含至少一種載體和/或佐劑。
37.如權(quán)利要求35或36所述的組合物，其中所述組合物為疫苗。
38.如權(quán)利要求30-34或37中任一項所述的組合疫苗，其用于個體動物葡萄球菌感染或葡萄球菌感染引起的病癥的預(yù)防或治療。
39.如權(quán)利要求38所述的組合疫苗，其中所述葡萄球菌感染由選自以下的葡萄球菌引起:表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、金黃色葡萄球菌(S.aureus)、人葡萄球菌(S.hominis)、溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)、沃氏葡萄球菌(S.warneri)、頭狀葡萄球菌(S.capitis)、解糖葡萄球菌(S.saccharolyticus)、耳葡萄球菌(S.auricularis)、模仿葡萄球菌(S.simulans)、腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)、科氏葡萄球菌(S.cohnii)、木糖葡萄球菌(S.xylosus)、豬葡萄球菌(S.hyicus)、山羊葡萄球菌(S.caprae)、雞葡萄球菌(S.gall inarum)、中間葡萄球菌(S.1ntermedius)。
40.如權(quán)利要求39所述的組合疫苗，其中所述葡萄球菌為金黃色葡萄球菌(S.aureus)或表皮葡萄球菌(S.epidermidis)。
41.如權(quán)利要求38-40中任一項所述的組合疫苗，其中所述個體為人。
42.如權(quán)利要求38-40中任一項所述的組合疫苗，其中所述個體為除人外的動物。
43.如權(quán)利要求42所述的組合疫苗，其中所述除人外的動物為家畜，并且所述家畜針對細菌性乳腺炎進行疫苗接種。
【文檔編號】C07K14/31GK103702684SQ201280018487
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2012年4月11日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月12日
【發(fā)明者】喬治·加西亞拉臘, 西蒙·福斯特 申請人:阿博森斯生物制劑公司