無精氨酸的tnfr：fc-融合多肽組合物及使用方法
【專利摘要】本發(fā)明的多個方面涉及用于治療與炎癥或自身免疫反應(yīng)相關(guān)的病癥的無精氨酸的含多肽的組合物和方法。
【專利說明】無精氨酸的TNFR:FC-融合多肽組合物及使用方法
[0001]相關(guān)申請
[0002]本申請要求根據(jù)35U.S.C.§ 119(e)要求于2011年7月I日提交的美國臨時專利申請序列號61 / 504，110的權(quán)益，該臨時申請的內(nèi)容據(jù)此整體以引用方式并入。
發(fā)明領(lǐng)域
[0003]本發(fā)明的某些方面涉及基于治療性多肽的組合物。
[0004]發(fā)明背景
[0005]治療性多肽制劑通常在使用前儲藏。然而，如果以水性形式儲藏一段較長的時間，尤其是在不存在諸如精氨酸的穩(wěn)定劑的情況下，多肽將不穩(wěn)定。依賴于水性儲藏的一種替代方法是制備多肽的凍干形式，然而，將干燥的多肽復(fù)溶通常會導(dǎo)致聚集或變性。
發(fā)明概要
[0006]在一些實施方案中，提供了無精氨酸的多肽組合物。已確定了用于制備可長期穩(wěn)定的無精氨酸的多肽溶液的配方。這些配方相對于精氨酸穩(wěn)定的溶液具有若干優(yōu)勢，包括降低的成本和降低的與存在精氨酸相關(guān)的副作用的發(fā)生率。令人驚訝的是，水性多肽制劑可通過使用相對高的鹽濃度而在不存在精氨酸或其他穩(wěn)定性氨基酸(例如賴氨酸或甘氨酸或其他穩(wěn)定性氨基酸，例如具有正電荷的氨基酸)的情況下穩(wěn)定。
[0007]在一些實施方案中，本文提供的是包含以下物質(zhì)(或由以下物質(zhì)組成或基本上由以下物質(zhì)組成)的組合物:分離的多肽(例如，治療性多肽，例如包含免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的治療性多肽)；和鹽，其量足以防止多肽聚集，從而使組合物穩(wěn)定(例如，在不存在精氨酸或其他添加的氨基酸的情況下)。在一些實施方案中，本文提供的組合物是水性組合物(例如，水溶液)。在一些實施方案中，將多肽和鹽在不含緩沖劑的水中提供。在一些實施方案中，組合物包含水性緩沖劑或其他溶劑(例如，有機溶劑)。在一些實施方案中，包含一種或多種賦形劑。
[0008]在一些實施方案中，本發(fā)明的多個方面涉及無精氨酸的多肽組合物，該組合物包含含有人免疫球蛋白(例如，IgGl)的Fe區(qū)的分離的多肽。在一些實施方案中，本發(fā)明的多個方面涉及無精氨酸的多肽組合物，該組合物包含含有人P75腫瘤壞死因子(TNF)的胞外配體結(jié)合部分的分離的多肽。在一些實施方案中，本發(fā)明的多個方面涉及無精氨酸的多肽組合物，該組合物包含含有融合到人IgGl的Fe區(qū)的人p75腫瘤壞死因子(TNF)的胞外配體結(jié)合部分的分離的多肽。
[0009] 在一些方面，本文提供的是包含以下物質(zhì)(或由以下物質(zhì)組成或基本上由以下物質(zhì)組成)的組合物:分離的多肽，其為融合到人IgGl的Fe區(qū)的人p75腫瘤壞死因子受體的胞外配體結(jié)合部分；和鹽，其量足以防止多肽聚集，從而使組合物穩(wěn)定(例如，在不存在精氨酸或其他添加的氨基酸的情況下)。在一些實施方案中，本文提供的組合物是水性組合物(例如，水溶液)。在一些實施方案中，將蛋白和鹽在不含緩沖劑的水中提供。在一些實施方案中，組合物包含水性緩沖劑或其他溶劑(例如，有機溶劑)。在一些實施方案中，包含一種或多種賦形劑。
[0010]在其他方面，本文提供的是方法，包括將以下物質(zhì)合并:分離的多肽，其為融合到人IgGl的Fe區(qū)的人p75腫瘤壞死因子受體的胞外配體結(jié)合部分；水性緩沖劑；和鹽,其量足以防止多肽聚集，從而配制穩(wěn)定的組合物。
[0011]在另外其他方面，本文提供的是方法，包括向個體施用組合物，所述組合物包含:分離的多肽，其為融合到人IgGl的Fe區(qū)的人p75腫瘤壞死因子受體的胞外配體結(jié)合部分；水性緩沖劑；和鹽，其量足以防止分離的多肽聚集，從而使組合物穩(wěn)定。
[0012]在一些實施方案中，組合物包含低于IOmM的游離氨基酸(例如，精氨酸、賴氨酸和/或甘氨酸)。在一些實施方案中，組合物包含低于ImM的游離氨基酸。在一些實施方案中，組合物包含低于ImM的精氨酸。在一些實施方案中，組合物包含低于0.5mM的精氨酸。在一些實施方案中，組合物包含低于0.1mM、低于0.05mM、低于0.01mM、低于0.005mM或低于0.0OlmM的精氨酸。在一些實施方案中，組合物不含游離氨基酸。在一些實施方案中，組合物基本上不含精氨酸。本文所述的組合物的任一種的分離多肽可作為其氨基酸序列的一部分包含精氨酸氨基酸殘基。與其他氨基酸殘基一起形成蛋白的氨基酸序列的精氨酸殘基不視為“游離”氨基酸。因此，“不含氨基酸”的組合物是指不含游離氨基酸但可以含有具有精氨酸氨基酸殘基作為其氨基酸序列一部分的分離多肽的組合物。
[0013]在某些實施方案中，本文所述的組合物包含約IOmg / ml至約IOOmg / ml的分離多肽。在一些實施方案中，分離的多肽為依那西普。
[0014]在一些實施方案中，水性緩沖劑的濃度低于lOOmM、低于50mM或低于25mM。在某些實施方案中，水性緩沖劑的濃度為約ImM至約15mM。在一些實施方案中，水性緩沖劑的濃度為約ImM。在一些實施方案中，水性緩沖劑的濃度低于ImM、低于0.5mM、低于0.25mM、低于
0.1mM、低于0.05mM或低于0.01mM0在一些實施方案中，水性緩沖劑為磷酸鈉、組氨酸、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、馬來酸、乙酸銨、三(羥甲基)氨基甲烷(tris)、乙酸鹽、二乙醇胺或它們的組合。然而，也可以使用其他緩沖劑(例如，以較低的量)，因為本發(fā)明的多個方面不限于此)。在一些實施方案中，本文所述的組合物不含水性緩沖劑。在此類實施方案中，組合物中的蛋白為自緩沖的，例如，適度濃縮的蛋白可以為自緩沖的(例如，在不含外加緩沖劑的水溶液中)。
[0015]在一些實施方案中，鹽以高于50mM或高于IOOmM的濃度存在。在一些實施方案中，鹽以120mM至約150mM的濃度存在。在一些實施方案中，鹽以高于150mM的濃度存在，具體取決于存在于溶液中的水性緩沖劑的量。一般來講，如果水性緩沖劑的量在組合物中降低，則鹽(例如，NaCl)的量增加，以便保持組合物的滲透壓和熱穩(wěn)定性。例如，如果水性緩沖劑以低于15mM的濃度存在于組合物中，則鹽可以高于150mM的濃度存在于組合物中。在一些實施方案中，鹽為氯化鈉。組合物的鹽組分是指除了存在于水性緩沖液中的鹽之外的鹽。
[0016]在其他實施方案中，本文所述的組合物的任一種可包含賦形劑。賦形劑可以為蔗糖、乳糖、甘油、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖、牛血清白蛋白(BSA)、人SA或重組HA、葡聚糖、PVA、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、甘油、二甲基亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、脯氨酸、L-絲氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸鹽酸鹽、肌氨酸、Y-氨
基丁酸、Tween?-20、Tween?-80、SDS、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、三甲胺N-氧化物、甜菜堿、鋅離子、銅離子、鈣離子、錳離子、鎂離子、CHAPS、蔗糖單月桂酸酯、2-0-β -甘露糖甘油酸酯或它們的組合。可以使用其他賦形劑，因為本發(fā)明的多個方面不限于此。在特定實施方案中，賦形劑為蔗糖。在此類實施方案中，蔗糖的濃度可以為約0.5%至約1.5%。在某些實施方案中，本文所述的組合物的任一種可具有濃度為約I重量％的蔗糖。
[0017]在一些實施方案中，本文所述的組合物的任一種可具有約5.5至約7.8的pH。在一些實施方案中，本文所述的組合物的任一種可具有約5.8至約6.5的pH。在一些實施方案中，本文所述的組合物可具有5.8至6.5的pH。在一些實施方案中，組合物可具有5.8、5.9、6.0、6.I>6.2、6.3、6.4 或 6.5 白勺 pH。
[0018]在一個實施方案中，組合物包含以下物質(zhì)(由以下物質(zhì)組成或基本上由以下物質(zhì)組成):50mg / ml的依那西普、約IOmM的磷酸鈉、約140mM的氯化鈉和約1%的鹿糖,其中組合物的PH為約ρΗ6.0至約ρΗ7.0。
[0019]在本文所述的實施方案的每一個中，組合物不含另外的L-精氨酸(無精氨酸)。也就是說，在本文所述的組合物的任一種中，不添加L-精氨酸或與多肽組合。然而，多肽自身可含有精氨酸氨基酸殘基，如本文其他地方所述。
[0020]本文所述的組合物的任一種可具有至少24個月的商業(yè)上可行的儲藏期限。
[0021]本文所述的組合物的任一種還可以適于皮下施用(例如，無毒的、純化的、滅菌的和/或適當?shù)牡葷B性)。
[0022]此外，在本文所述的組合物的任一種中，可對分離的多肽進行純化。
[0023]在某些實施方案中，可對本文所述的組合物進行滅菌。
[0024]本文所述的組合物的任一種可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、韋格納病(肉芽腫)、克羅恩病(或炎性腸病)、慢性阻塞性肺病(COPD)、丙肝、子宮內(nèi)膜異位、哮喘、惡病質(zhì)、牛皮癬或特應(yīng)性皮炎、或其他炎性或自身免疫相關(guān)疾病、病癥或病狀。組合物可以足以治療(緩解癥狀、停止或減緩進展)病癥的量(例如，治療有效量)施用。
【具體實施方式】
[0025]融合到Fe結(jié)構(gòu)域的TNF受體(TNFR:Fc)的市售可溶形式稱為依那西普。依那西普(商品名ENBREL? )通過作為TNF抑制劑干擾腫瘤壞死因子(TNF)。由連接到人IgGl的Fe部分的人75千道爾頓(p75)腫瘤壞死因子受體(TNFR)的胞外配體結(jié)合部分構(gòu)成的該二聚融合多肽當前通過L-精氨酸配制以防止多肽聚集(參見以引用方式并入文本的美國專利號 5，447，851 和 7，648，702)。
[0026]精氨酸雖然為大多數(shù)人耐受但是可在一些人中導(dǎo)致嚴重的副作用。稱為過敏癥的嚴重過敏反應(yīng)可在注射精氨酸后發(fā)生，以及胃不適，包括惡心、胃痙攣或胃絞痛或大便次數(shù)增多。其他潛在的副作用包括低血壓和血液中多種化學(xué)物質(zhì)及電解質(zhì)的變化，諸如高鉀、高氯、低鈉、低磷酸鹽、高血尿素氮和高肌酐水平。在理論上，精氨酸可增加出血風(fēng)險、升高血糖水平、提高鉀水平并可能使鐮狀細胞病的癥狀惡化。因此，患有肝臟或腎臟疾病的個體或使用凝血劑的那些人應(yīng)謹慎使用精氨酸。
[0027] 如美國專利號6，748，702中所討論，包含含有Fe結(jié)構(gòu)域的多肽的水性組合物被認為需要約ImM至約100mM濃度的L-精氨酸以防止多肽聚集。另外據(jù)信，必要的是對此類水性組合物長期儲藏(例如，兩年或更長)。
[0028] 令人驚訝的是，可制備基本上不含L-精氨酸(例如，不含大量L-精氨酸)的穩(wěn)定的水性組合物(例如，藥物組合物)使得它們穩(wěn)定兩年或更長的時期。 申請人:已發(fā)現(xiàn)，通過提高鹽的濃度以及通過降低組合物的緩沖能力，仍可能提供可經(jīng)皮下施用給個體的穩(wěn)定的多肽組合物。相對于長期儲藏的術(shù)語“穩(wěn)定的”應(yīng)理解為意指藥物組合物的活性多肽相對于開始儲藏時的組合物活性不喪失其活性的超過20%、超過15%、超過10%或超過5%。
[0029]在一些實施方案中，本文提供的是包含以下物質(zhì)的組合物:分離的多肽，其為融合到人IgGl的Fe區(qū)的人p75腫瘤壞死因子受體的胞外配體結(jié)合部分；水性緩沖劑；和鹽,其量足以防止多肽聚集，從而使組合物穩(wěn)定，其中組合物包含濃度低于ImM的L-精氨酸。在某些其他實施方案中，含F(xiàn)e的多肽組合物不含或基本上不含L-精氨酸。如本文所用的“基本上不含”是指不含另外的游離氨基酸諸如精氨酸的組合物。應(yīng)當理解，多肽自身可以在其結(jié)構(gòu)中含有氨基酸精氨酸。在一些實施方案中，組合物不含游離精氨酸氨基酸。
[0030]如本文所用，短語“組合物”可指包含多肽的配方，其制備方式使得其適于注射和/或施用給對其有需要的個體?！敖M合物”還可以稱為“藥物組合物”。在某些實施方案中，本文提供的組合物為基本上無菌的并且不含對接受者具有不當毒性或感染性的任何藥劑。另外，如本文所用，溶液或水性組合物可意指包含一種或多種溶于合適的溶劑(例如，水和/或其他溶劑，例如有機溶劑)或天然可混溶溶劑的混合物中的化學(xué)物質(zhì)的流體(液體)制劑。
[0031]此外，如本文所用，術(shù)語“約”可意指在所述組合物的組分濃度中可存在為給定值的5%、10%、15%或至多并包括20%的變化。例如，如果組合物具有約IOmg / ml的含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽，則該組合物可具有8至12mg / ml的所述多肽。在某些實施方案中，組合物包含約IOmg / ml至約IOOmg / ml的多肽。在相關(guān)實施方案中，組合物包含50mg / ml或約50mg / ml的多肽。組合物可包含更多或更少的多肽，因為本發(fā)明的多個方面不限于此。
[0032]在特定實施方案中，含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽是融合到Fe結(jié)構(gòu)域的TNF受體(TNFR:Fc)的可溶形式。市售TNFR:Fc稱為依那西普(Ellbrel?，Immunex Corporation),其為由連接到人IgGl的Fe部分的人75千道爾頓(p75)腫瘤壞死因子受體(TNFR)的胞外配體結(jié)合部分組成的二聚融合多肽。依那西普的Fe組分包含恒定重鏈2 (CH2)結(jié)構(gòu)域、恒定重鏈3 (CH3)結(jié)構(gòu)域和鉸鏈區(qū)，但不含人IgGl的恒定重鏈I (CHl)結(jié)構(gòu)域。在一些實施方案中，F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域可包含上述結(jié)構(gòu)域之一，而在其他實施方案中，F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域可包含上述所有結(jié)構(gòu)域。依那西普通過重組DNA技術(shù)在中國倉鼠卵巢(CHO)哺乳動物細胞表達系統(tǒng)中產(chǎn)生。它由934個氨基酸組成并具有約150千道爾頓的表觀分子量(Physicians’ Desk Reference, 2002,Medical Economics Company Inc.)。
[0033]設(shè)想用于本文所述的特定組合物和方法的其他多肽包括但不限于包含抗體Fe結(jié)構(gòu)域的至少一部分的融合多肽。融合到Fe結(jié)構(gòu)域并與以下多肽之一相同或基本上相似的多肽適用于本發(fā)明的組合物:flt3配體、⑶40配體、促紅細胞生成素、促血小板生成素、降鈣素、Fas配體、NF-K B受體激活劑的配體(RANKL)、腫瘤壞死因子(TNF)相關(guān)細胞凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)、胸腺基質(zhì)源淋巴細胞生成素、粒細胞集落刺激因子、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、肥大細胞生長因子、干細胞生長因子、表皮生長因子、RANTES、生長激素、胰島素、促胰島素、胰島素樣生長因子、甲狀旁腺激素、干擾素、神經(jīng)生長因子、胰高血糖素、白介素I至18、集落刺激因子、淋巴毒素-β、腫瘤壞死因子(TNF)、白血病抑制因子、抑瘤素-M以及細胞表面分子ELK和Hek的各種配體(諸如印h相關(guān)激酶或LERKS的配體)。
[0034]在某些實施方案中，多肽包括但不限于包含抗體的Fe結(jié)構(gòu)域加上任何上述多肽的受體或基本上與此類受體相似的多肽的重組融合多肽。這些受體包括但不限于=TNFI^A兩種形式(稱為p55和p75)、白介素-1受體(I型和2型)、白介素-4受體、白介素-15受體、白介素-17受體、白介素-18受體、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子受體、粒細胞集落刺激因子受體、抑瘤素-M和白血病抑制因子的受體、NF- K B受體激活劑(RANK)、TRAIL的受體(TRAIL受體1、2、3和4)以及包含死亡結(jié)構(gòu)域的受體,諸如Fas或細胞凋亡誘導(dǎo)受體(AIR)。
[0035]在其他實施方案中，多肽包括但不限于融合到抗體的Fe結(jié)構(gòu)域的分化抗原(稱為⑶多肽)或其配體或基本上與它們?nèi)我徽呦嗨频亩嚯?。此類抗原在Leukocyte TypingVI (Proceedings of the VIthInternational Workshop and Conference, Kishimoto,Kikutani et al., eds., Kobe, Japan, 1996)進行了公開。相似的CD多肽在后續(xù)研討會中進行了公開。此類抗原的實例包括⑶27、⑶30、⑶39、⑶40及其配體(⑶27配體、⑶30配體等)。⑶抗原中的多種是TNF受體家族的成員，該家族還包括41BB配體和0X40。配體通常為TNF家族的成員，與41BB配體和0X40配體一樣。因此，TNF和TNFR家族的成員可如本所述進行配制。
[0036]在某些實施方案中，酶活性多肽或其配體可用于本文所述的組合物和方法。實例包括但不限于包含融合到以下多肽或其配體或基本上與這些多肽之一相似的多肽之一的全部或一部分的抗體Fe結(jié)構(gòu)域的重組融合多肽:金屬蛋白酶-解整合蛋白家族成員、各種激酶、葡萄糖腦苷脂酶、過氧化物歧化酶、組織型纖溶酶原激活劑、因子VII1、因子IX、載脂蛋白E、載脂蛋白A-Ι、球蛋白、IL-2拮抗劑、α-1抗胰蛋白酶、TNF-α轉(zhuǎn)化酶、任何上述酶的配體以及多種其他酶及其配體。
[0037]在一些實施方案中，本文所述的組合物和方法用于制備包含抗體、人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體(例如，具有連接到一個或多個鼠可變抗體免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的人恒定抗體免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的抗體)和/或非人類抗體或其片段的組合物。適用于本發(fā)明的組合物的抗體的具體實例包括但不限于市售抗體，諸如莫羅單抗-⑶3 (Orthoclone 0KT-3?,Ortho Biotech)、阿昔單抗(REOPRO?，Lilly)、利妥昔單抗(RITUXAN?, IDEC)、達昔單抗(ZENAPAX?, Roche Laboratories)、巴利昔單抗(SIMULECT?, Novartis)、英夫利西單抗(REM.1CADE?, Centocor)、帕利珠單抗(SYNAGl S?, MedImmune)、曲妥珠單抗(HERCEPTIN?, Genentech)、吉妥珠單抗奧唑米星(MYL0TARG?，Wyeth-Ayerst)和阿侖單抗(CAMPATH?，Berlex)。當前，前述每一種均可作為在施用前需要復(fù)水的凍干粉或需要稀釋的濃縮物獲得。本發(fā)明的組合物不再需要在施用前進行任何操縱，例如復(fù)水或稀釋，而在長期儲藏期間保持活性成分的穩(wěn)定性。
[0038]在特定實施方案中，本文所述的組合物用于儲藏包含偶聯(lián)到細胞毒性或發(fā)光物質(zhì)的抗體的多肽。此類物質(zhì)包括但不限于:美登素衍生物(諸如DMl)、腸毒素(諸如葡萄球菌腸毒素)、碘同位素(諸如碘-125)、锝同位素(諸如Tc-99m)、花菁熒光染料(諸如Cy5.5.18)和核糖體失活多肽(諸如bouganin、白樹毒素或阜草素-S6)。
[0039]設(shè)想在本文使用的抗體或抗體/細胞毒素或抗體/發(fā)光團偶聯(lián)物的實例包括但不限于識別以下抗原中的一種或多種的那些:⑶2、⑶3、⑶4、⑶8、⑶11a、⑶14、⑶18、⑶20、CD22、CD23、CD25、CD33、CD40、CD44、CD52、CD80 (B7.1)、CD86 (B7.2)、CD147、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-2 受體、IL-4 受體、IL-6 受體、IL-13 受體、PDGF — β、VEGF, TGF、TGF—β 2, TGF- β UEGF受體、VEGF受體、C5補體、IgE、腫瘤抗原CA125、腫瘤抗原MUC1、PEM抗原、LCG(其為與肺癌相關(guān)而表達的基因產(chǎn)物)、HER_2、腫瘤相關(guān)糖蛋白TAG-72、SK-1抗原、以高水平存在于患有結(jié)腸和/或胰腺癌的個體的血清中的腫瘤相關(guān)表位、在乳腺、結(jié)腸、鱗狀細胞、前列腺、胰腺、肺和/或腎癌細胞上和/或在黑素瘤、膠質(zhì)瘤或神經(jīng)母細胞瘤細胞上表達的癌相關(guān)表位或多肽、TRAIL受體1、2、3和4、腫瘤壞死核心、整合素α4β7、整合素VLA-4、Β2整合素、TNF-α、粘附分子VAP-1、上皮細胞粘附分子(EpCAM)、細胞間粘附分子-3(ICAM-3)、白細胞整合素粘附分子、血小板糖蛋白gpllb / Ilia、心肌肌球蛋白重鏈、甲狀旁腺激素、rNAPc2(其為因子VIIa-組織因子的抑制劑)、MHC 1、癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、腫瘤壞死因子(TNF)、CTLA-4(其為細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原)、Fe- Y —I受體、HLA-DRlO β、HLA-DR抗原、L-選擇素、IFN- Y、呼吸道合胞病毒、人類免疫缺陷病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)、變異鏈球菌和金黃色葡萄球菌。
[0040]在一些 實施方案中，本文所述的組合物用于抗獨特型抗體或基本上相似的多肽，包括但不限于針對以下物質(zhì)的抗獨特型抗體:靶向腫瘤抗原gp72的抗體；針對神經(jīng)節(jié)苷脂⑶3的抗體；或針對神經(jīng)節(jié)苷脂⑶2的抗體。
[0041]在其他實施方案中，用于本文所述的組合物的含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽通過表達多肽的活宿主細胞(諸如就抗體而言的雜交瘤)或就融合多肽或抗體而言經(jīng)過基因工程改造以產(chǎn)生多肽的宿主細胞產(chǎn)生。對細胞進行基因工程改造以產(chǎn)生多肽的方法是本領(lǐng)域熟知的。參見例如 Ausubel 等人編輯(1990), Current Protocols in Molecular Biology (Wiley,New York)。此類方法包括將編碼多肽并允許多肽表達的核酸引入活宿主細胞。這些宿主細胞可以為但不限于在培養(yǎng)中生長的細菌細胞、真菌細胞或動物細胞。細菌宿主細胞包括但不限于大腸桿菌細胞。合適的大腸桿菌菌株的實例包括但不限于HB101、DH5a、GM2929、JM109、KW251、匪538、匪539和不能裂解外來DNA的任何大腸桿菌菌株?？梢允褂玫恼婢拗骷毎ǖ幌抻卺劸平湍?、巴斯德畢赤酵母、曲霉菌細胞。可以使用的動物細胞系的幾個實例為CH0、VERO, BHK、HeLa, Cos、MDCK、293、3T3和W138?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法建立新的動物細胞系(例如通過轉(zhuǎn)化、病毒感染和/或篩選)。任選地，多肽可通過宿主細胞分泌到培養(yǎng)基中。
[0042]在某些實施方案中，將表達的含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽通過標準方法純化。當含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽在細胞內(nèi)產(chǎn)生時，例如通過離心或超濾而移除顆粒碎片。當多肽分泌到培養(yǎng)基中時，可首先使用標準多肽濃縮過濾器對得自此類表達系統(tǒng)的上清液進行濃縮。也可將蛋白酶抑制劑加入以抑制蛋白水解，并且可以將抗生素包含在內(nèi)以防止微生物生長。
[0043]在一些實施方案中，將含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽使用例如羥基磷灰石色譜、凝膠電泳、滲析和親和色譜和/或已知的或有待發(fā)現(xiàn)的純化技術(shù)的任何組合進行純化。例如，蛋白A可用于純化基于人類Y 1、Y2或Y 4重鏈的含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽(Lindmark等人，1983,J.1mmunol.Meth.62:1-13)。蛋白G建議用于所有小鼠同種型以及用于人類Y 3 (Guss等人，1986，EMBO J.5:1567-1575)。
[0044]用于多肽純化的其他技術(shù)諸如在離子交換柱上的分級分離、乙醇沉淀法、反相HPLC、二氧化硅上的色譜法、肝素SEPHAR0SET?上的色譜法、陰離子或陽離子交換樹脂上的色譜法(諸如聚天冬氨酸柱)、層析聚焦、SDS-PAGE以及硫酸銨沉淀法也可根據(jù)需要使用?？梢允褂闷渌嚯募兓夹g(shù)/方法。
[0045]在特定實施方案中，本文所述的組合物通過除了上述純化多肽外還將緩沖劑、鹽(例如，NaCl)和另外的賦形劑(例如，蔗糖)組合而制備。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物包含低于ImM的L-精氨酸，而在其他實施方案中，本文所述的組合物不含或基本上不含精氨酸(例如L-精氨酸)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將會理解的是，將待包含在組合物中的各種組分組合可按任何合適的順序進行，即，可以最先、在中間或最后添加緩沖劑，并且還可以最先、在中間或最后添加滲透壓調(diào)節(jié)劑。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員還將理解的是，這些化學(xué)物質(zhì)中的一些可能在某些組合中不相容，并因此，容易地由具有相似性質(zhì)但在相關(guān)混合物中相容的不同化學(xué)物質(zhì)替代。
[0046]聚集抑制劑降低多肽在不當?shù)幕虿幌胍娜蛩脑獜?fù)合物中締合的趨勢。令人驚訝的是，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，在包含含F(xiàn)e的多肽的組合物中，通過提高鹽濃度以及通過降低緩沖能力，不需要再添加游離氨基酸(例如，精氨酸、賴氨酸、甘氨酸)。無精氨酸的組合物中的多肽仍保持活性(有效)并可儲藏至少24個月。在某些實施方案中，鹽濃度高于IOOmM,而在其他實施方案中，鹽濃度為約140mM或更高。如本文所用的鹽可包括但不限于氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)、檸檬酸鈉(Na3C6H5O7.2Η20)、硫酸鎂(MGSO4)、氯化鈣(CaCl)、次氯酸鈉(NaClO)、硝酸鈉(NaNO3)、硫化汞(HgS)、鉻酸鈉(Na2CrO4)和二氧化鎂(MgO2)。鹽例如在不存在精氨酸(例如，L-精氨酸)的情況下既維持組合物的等滲性也維持熱穩(wěn)定性。
[0047]緩沖劑將pH維持在所需的范圍內(nèi)，并且適用于本文所述的組合物的多種緩沖劑包括但不限于組氨酸、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、馬來酸、乙酸銨、三(羥甲基)氨基甲烷(tris)、各種形式的乙酸鹽和二乙醇胺。在某些實施方案中，緩沖劑為磷酸鈉，因為其緩沖能力在PH6.2處或附近。在一些實施方案中，緩沖劑在組合物中的濃度為約25mM或更低。在一些實施方案中，緩沖劑的濃度為25mM。在特定實施方案中，緩沖劑的低濃度為約IOmM或更低。在一些實施方案中，緩沖劑的濃度為10mM。緩沖劑是本領(lǐng)域熟知的并通過已知的方法制造且可從商業(yè)供應(yīng)商獲得。
[0048]當組合物的pH設(shè)定在生理水平處或附近時，在施用時個體的舒適度得到最大程度提高。在某些實施方案中，PH為約5.8至8.4。在其他實施方案中，pH為約6.2至7.4。應(yīng)當理解，PH可在必要時進行調(diào)節(jié)以最大程度提高特定組合物中多肽的穩(wěn)定性和溶解性，并因此而言，在生理范圍之外但個體仍可耐受的pH也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0049] 在某些實施方案中，將使處于溶液形式(也處于干燥或冷凍形式)的多肽穩(wěn)定的賦形劑(也稱為化學(xué)添加劑、共溶質(zhì)或共溶劑)加到組合物中。實例包括但不限于糖/多元醇，諸如蔗糖、乳糖、甘油、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖?’聚合物，諸如:血清白蛋白(牛血清白蛋白(BSA)、人SA或重組HA)、葡聚糖、PVA、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC);非水性溶劑，諸如:多元醇(例如，PEG、乙二醇和甘油)、二甲基亞砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)；氨基酸，諸如脯氨酸、L-絲氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸鹽酸鹽、肌氨酸和Y-氨基丁酸；表面活性劑，諸如TWEEN-80? (聚山梨醇酯80)、TWEEN-20? (聚山梨醇酯20)、SDS、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物；以及其他賦形劑，諸如:磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、三甲胺N-氧化物、甜菜堿、金屬離子(例如，鋅、銅、鈣、錳和鎂)、CHAPS、單月桂酸酯、2-0-β -甘露糖甘油酸酯或以上的任意組合。
[0050]在某些實施方案中，一種或多種賦形劑在本文所述的組合物中的濃度為約0.001重量％至5重量％，而在其他實施方案中，一種或多種賦形劑的濃度為約0.1重量％至2重量％。賦形劑是本領(lǐng)域熟知的并通過已知的方法制造且可從商業(yè)供應(yīng)商獲得。在一些實施方案中，賦形劑為蔗糖。在其他實施方案中，蔗糖以約I %的濃度存在于組合物中。
[0051]在一個特定實施方案中，本文所述的組合物包含約ρΗ6.0至約ρΗ7.0的以下物質(zhì)(或由以下物質(zhì)組成或基本上由以下物質(zhì)組成):約25至約50mg的TNFR =Fc (例如，依那西普)、約IOmM至約50mM的磷酸鈉(例如，磷酸二氫鈉和/或磷酸氫二鈉)、約0.75%至約
1.25%的蔗糖、約50mM至約150mM的NaCl。
[0052]在另一個實施方案中，本文所述的組合物包含約pH6.2的以下物質(zhì)(或由以下物質(zhì)組成或基本上由以下物質(zhì)組成):約50mg / ml的TNFR:Fc、約IOmM的磷酸鈉、約140mM的氯化鈉和約I%的蔗糖。
[0053]在某些實施方案中，本文提供的是治療個體的方法，包括向個體施用治療有效量的本文所述的組合物，其中該個體具有可通過組合物形式的含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽而有益地治療的疾病或病癥。在一些實施方案中，含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽衍生自將用組合物治療的個體相同的物種。在特定實施方案中，個體為需要治療的人。當組合物的含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽為TNFR:Fc時，可治療的疾病或病癥的實例包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、韋格納病(肉芽腫)、克羅恩病(或炎性腸病)、慢性阻塞性肺病(COPD)、丙肝、子宮內(nèi)膜異位、哮喘、惡病質(zhì)、牛皮癬和特應(yīng)性皮炎?？赏ㄟ^TNFR =Fc治療的另外的疾病或病癥包括在W000 / 62790、WOOl / 62272和美國專利申請?zhí)?001 / 0021380中所述的那些。
[0054]在其他方面，本文提供的是具有改善的長期儲藏的多肽組合物，使得活性成分(例如，含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽)在以液體(或冷凍)狀態(tài)儲藏的過程中穩(wěn)定。如本文所用，短語“長期”儲藏意指組合物可儲藏三個月或更長、六個月或更長、或一年、或兩年或更長。長期儲藏還應(yīng)理解為意指將組合物作為液體在2—8°C儲藏或(例如)在_20°C或更冷的溫度下冷凍。在某些實施方案中，可將組合物凍融多次。相對于長期儲藏的術(shù)語“穩(wěn)定的”應(yīng)理解為意指組合物的活性多肽不喪失其活性超過20%或15%或甚至10%。在特定實施方案中，組合物的活性多肽相對于開始儲藏時的組合物活性不喪失其活性的超過5%。組合物的穩(wěn)定性可基于效價、外觀、濃度、PH和氧化而評估，并可使用例如疏水相互作用色譜(HIC)、毛細管電泳-十二烷基硫酸鈉(CE-SDS)、高精度(HIAC)液體粒子計數(shù)器和/或等電點聚焦。其他蛋白穩(wěn)定性測定法是本領(lǐng)域已知的并可用于本文。
[0055]組合物的含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽的合適劑量或治療有效量將取決于待治療的病狀、病狀的嚴重性、之前的療法以及個體的臨床史和對治療劑的反應(yīng)。正確的劑量可根據(jù)主治醫(yī)生的判斷而調(diào)整，使得其可一次性施用給個體或經(jīng)一系列施用。組合物可根據(jù)需要作為唯一的治療劑或與另外的療法組合而施用。
[0056] 在某些實施方案中，每個成年人有效的含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域的多肽量在約l_500mg / m2或約l-200mg / m2或約l_40mg / m2或約5_25mg / m2的范圍內(nèi)。作為另外一種選擇,可施用固定劑量，其量可在2-500mg /劑、2 — IOOmg /劑或約10_80mg /劑的范圍內(nèi)。如果劑量將每周施用不止一次，則示例性劑量范圍與前述劑量范圍相同或更低，并且優(yōu)選地以25—IOOmg /劑的每劑范圍每周施用兩次或更多次。在其他實施方案中，通過注射而施用的可接受劑量包括80—IOOmg /劑,或包括80mg /劑。劑量可兩周施用一次、每周一次,或間隔若干周(例如，2至8周)。在一個特定實施方案中，通過單次皮下(SC)注射施用25mg的TNFR =Fc (依那西普)。設(shè)想了其他施用途徑。
[0057]在許多情況下，個體病癥的改善將通過在至少三周的期間每周一至三次至多約IOOmg的組合物獲得，然而更長時期的治療可能是必要的以引起所需的改善程度。對于不治慢性病癥，方案可無限期地持續(xù)。對于兒科個體(年齡4一 17歲)，合適的方案涉及0.4mg /kg至5mg / kg劑量的本發(fā)明的多肽,每周施用一次或多次。
[0058]在其他實施方案中，本文所述的組合物以散裝配方制備，并因此而言，對組合物的組分進行調(diào)整，使得其將比施用所需的更高，并在施用前適當?shù)叵♂尅?br> [0059]在某些實施方案中，將本文所述的組合物在腸胃外施用，例如皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)和/或鞘內(nèi)。腸胃外施用可通過推注或連續(xù)輸注進行。注射用組合物可以單位劑型的形式存在，例如在安瓿或多劑量容器中，含有外加的防腐劑。此外，已開發(fā)了多種最新的藥物遞送方法，并且本發(fā)明的組合物適用于使用這些新方法施用，例如Inject-ease?、GENJECT?、諸如GENPEN?的注射筆以及諸如MEDIJECT0R?和B10JECT0R?的無針裝置。本發(fā)明的組合物也可適用于有待發(fā)現(xiàn)的施用方法。另見Langer，1990，Science, 249:1527—1533。
[0060]在一些實施 方案中，將本文所述的組合物配制成儲庫型制劑。此類長效組合物可通過植入(例如，皮下或肌內(nèi))或通過肌內(nèi)注射而施用。因此，例如，組合物可通過合適的聚合物或疏水性材料(例如，作為可接受的油中的乳液)或離子交換樹脂改性，或改性為微溶的衍生物,例如作為微溶的鹽。
[0061]在其他實施方案中，本文所述的組合物存在于可容納含有活性成分的一個或多個單位劑型的小瓶、包或分配裝置中。在一些實施方案中，分配裝置包括具有可直接注射的單劑液體組合物的注射器。注射器可伴有施用說明。
[0062]在其他方面，本文提供的是容納本發(fā)明的水性組合物的試劑盒或容器。多肽在水性組合物中的濃度可在寬范圍內(nèi)變化。在某些實施方案中，其范圍為約0.05至約20，000毫克每毫升(μg/ml)水性組合物。試劑盒還可以伴有使用說明。
[0063]下文通過非限制性實施例進一步描述組合物。
[0064]實施例
[0065]實施例1:穩(wěn)定的多肽組合物的一個實施方案=
[0066]表1:依那西普組合物。
【權(quán)利要求】
1.一種組合物，包含: 分離的多肽，其為融合到人IgGl的Fe區(qū)的人P75腫瘤壞死因子受體的胞外配體結(jié)合部分；和 鹽，其量足以防止所述分離的多肽聚集，從而使所述組合物穩(wěn)定， 其中所述組合物包含濃度低于ImM的L-精氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物包含濃度低于0.1mM的L-精氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述組合物包含濃度低于0.01mM的L-精氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述組合物包含濃度低于0.0OlmM的L-精氨酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述組合物不含L-精氨酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1一5任一項所述的組合物,包含約10mg/ ml至約100mg / ml的所述分離多肽。
7.根據(jù)權(quán)利要求1一6任一項所述的組合物，其中所述分離的多肽為依那西普。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物還包含水性緩沖劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述水性緩沖劑為磷酸鈉、組氨酸、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、馬來酸、乙酸銨、三(羥甲基)氨基甲烷(tris)、乙酸鹽、二乙醇胺或它們的組合。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的組合物，其中所述水性緩沖劑以約1mM至約15mM的濃度存在。
11.根據(jù)權(quán)利要求1一10任一項所述的組合物，其中所述鹽為氯化鈉。
12.根據(jù)權(quán)利要求1一11任一項所述的組合物，其中所述鹽以約120mM至約150mM的濃度存在。
13.根據(jù)權(quán)利要求1一12任一項所述的組合物，還包含賦形劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求1一13任一項所述的組合物，其中所述賦形劑為蔗糖、乳糖、甘油、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖、牛血清白蛋白(BSA)、人SA或重組HA、葡聚糖、PVA、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、甘油、二甲基亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、脯氨酸、L-絲氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸鹽酸鹽、肌氨酸、Y-氨基丁酸、Tween-20、Tween-80> SDS、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、三甲胺N-氧化物、甜菜堿、鋅離子、銅離子、鈣離子、錳離子、鎂離子、CHAPS、蔗糖單月桂酸酯、2-0-β -甘露糖甘油酸酯或它們的組合。
15.根據(jù)權(quán)利要求1一14任一項所述的組合物，其中所述賦形劑為蔗糖。
16.根據(jù)權(quán)利要求1一15任一項所述的組合物，其中所述賦形劑是濃度為約0.5%至約1.5%的鹿糖。
17.根據(jù)權(quán)利要求1一16任一項所述的組合物，其中所述組合物的pH為約5.5至約7.8。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物,包含50mg/ ml的依那西普、約IOmM的磷酸鈉、約140mM的氯化鈉和約I %的鹿糖，其中所述組合物的pH為約pH6.0至約pH7.0。
19.根據(jù)權(quán)利要求1一18任一項所述的組合物，其中所述組合物具有至少24個月的商業(yè)上可行的儲藏期限。
20.根據(jù)權(quán)利要求1一19任一項所述的組合物，其中所述組合物適于皮下施用。
21.根據(jù)權(quán)利要求1一20任一項所述的組合物，其中對所述分離的多肽進行純化。
22.根據(jù)權(quán)利要求1一21任一項所述的組合物，其中對所述組合物進行滅菌。
23.一種組合物，包含: 分離的多肽，其為融合到人IgGl的Fe區(qū)的人p75腫瘤壞死因子受體的胞外配體結(jié)合部分； 濃度低于25mM的水性緩沖劑；和 濃度大于1OOmM的鹽， 其中所述組合物包含濃度低于ImM的L-精氨酸。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中所述組合物包含濃度低于0.1mM的L-精氨酸。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的組合物，其中所述組合物包含濃度低于0.01mM的L-精氨酸。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的組合物，其中所述組合物包含濃度低于0.0OlmM的L-精氨酸。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的組合物，其中所述組合物不含L-精氨酸。
28.一種組合物，基本上由以下物質(zhì)組成: 分離的多肽，其為融合到人IgGl的Fe區(qū)的人p75腫瘤壞死因子受體的胞外配體結(jié)合部分； 濃度為約IOmM的水性緩沖劑； 濃度為約140mM的鹽；和 蔗糖。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的組合物，其中所述分離的多肽以50mg/ mL的濃度存在。
30.根據(jù)權(quán)利要求28或29所述的組合物，其中所述多肽為依那西普。
31.一種方法，包括向個體施用組合物，所述組合物包含: 分離的多肽，其為融合到人IgGl的Fe區(qū)的人p75腫瘤壞死因子受體的胞外配體結(jié)合部分； 水性緩沖劑；和 鹽，其量足以防止所述多肽聚集，從而使所述組合物穩(wěn)定， 其中所述組合物包含濃度低于ImM的L-精氨酸。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述組合物包含濃度低于0.1mM的L-精氨酸。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述組合物包含濃度低于0.01mM的L-精氨酸。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述組合物包含濃度低于0.0OlmM的L-精氨酸。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述組合物不含L-精氨酸。
36.根據(jù)權(quán)利要求31—35任一項所述的方法,其中所述組合物包含約IOmg/ ml至約IOOmg / ml的所述分離的多肽。
37.根據(jù)權(quán)利要求31-36任一項所述的方法，其中所述多肽為依那西普。
38.根據(jù)權(quán)利要求31— 37任一項所述的組合物，其中所述水性緩沖劑為磷酸鈉、組氨酸、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、馬來酸、乙酸銨、三(羥甲基)氨基甲烷(tris)、乙酸鹽、二乙醇胺或它們的組合。
39.根據(jù)權(quán)利要求31—38任一項所述的方法，其中所述水性緩沖劑以約ImM至約15mM的濃度存在。
40.根據(jù)權(quán)利要求31— 39任一項所述的方法，其中所述鹽為氯化鈉。
41.根據(jù)權(quán)利要求31-40任一項所述的方法，其中所述鹽以約120mM至約150mM的濃度存在。
42.根據(jù)權(quán)利要求31-41任一項所述的方法，其中所述組合物還包含賦形劑。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述賦形劑為蔗糖、乳糖、甘油、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖、牛血清白蛋白(BSC)、人SC或重組HC、葡聚糖、PVC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、甘油、二甲基亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、脯氨酸、L-絲氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸、賴氨酸鹽酸鹽、肌氨酸、Y -氨基丁酸、Tween-20、Tween-80,SDS、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、三甲胺N-氧化物、甜菜堿、鋅離子、銅離子、鈣離子、錳離子、鎂離子、CHCPS、蔗糖單月桂酸酯、2-0-β-甘露糖甘油酸酯或它們的組合。
44.根據(jù)權(quán)利要求42或43所述的方法，其中所述賦形劑為蔗糖。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的方法，其中所述賦形劑是濃度為約0.5%至約1.5%的蔗糖。
46.根據(jù)權(quán)利要求31-45任一項所述的方法，其中所述組合物的pH為約5.5至約7.8。
47.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述組合物包含50mg/ ml的依那西普、約IOmM的磷酸鈉、約140mM的氯化鈉和約I %的蔗糖,其中所述方法的pH為約pH6.0至約pH7.0。
48.根據(jù)權(quán)利要求31-47任一項所述的方法，其中所述組合物具有至少24個月的商業(yè)上可行的儲藏期限。
49.根據(jù)權(quán)利要求31-48任一項所述的方法，其中所述組合物適于皮下施用。
50.根據(jù)權(quán)利要求31-49任一項所述的方法，其中對所述分離的多肽進行純化。
51.根據(jù)權(quán)利要求31— 50任一項所述的方法，其中對所述組合物進行滅菌。
52.根據(jù)權(quán)利要求31—51任一項所述的方法，其中所述個體被診斷患有選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、強直性脊柱炎、韋格納病(肉芽腫)、克羅恩病(或炎性腸病)、慢性阻塞性肺病(COPD)、丙肝、子宮 內(nèi)膜異位、哮喘、惡病質(zhì)、牛皮癬、或特應(yīng)性皮炎的疾病或病癥。
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的方法，其中將所述組合物以足以治療所述疾病或病癥的量施用給所述個體。
【文檔編號】C07K16/24GK103930124SQ201280032584
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2012年6月29日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月1日
【發(fā)明者】凱文·馬洛尼, 宮克, 羅伊·奧爾斯頓 申請人:生物基因Idec Ma公司