抗psgl-1抗體及其用途
【專利摘要】在一個方面，本發(fā)明中提供了免疫特異性結(jié)合PSGL-1的抗體、包含編碼此類抗體的核苷酸序列的多核苷酸，和用于生成此類抗體的表達載體和宿主細胞。本文中還提供了包含特異性結(jié)合PSGL-1的抗體的試劑盒和藥物組合物，以及使用本文中描述的抗體來治療由活化的T細胞的增殖增加和/或數(shù)目升高引起的或與其有關(guān)的病癥或疾病的方法。
【專利說明】抗PSGL-1抗體及其用途
[0001]1.相關(guān)申請
[0002]本申請要求2011年6月13日提交的題目為“ANT1-PSGL-1ANTIBODIES AND USESTHEREOF”的美國臨時專利申請61/496，249的提交日權(quán)益。所提及的臨時申請的全部教導和內(nèi)容在本文引入作為參考。
[0003]2.發(fā)明領(lǐng)域
[0004]本文中提供了特異性結(jié)合P-選擇蛋白糖蛋白配體-1 (PSGL-1)的抗體、編碼此類抗體的多核苷酸、包含此類核苷酸的表達載體、包含此類表達載體的宿主細胞、及相關(guān)組合物。本文中還提供了使用抗PSGL-1抗體來治療由活化的T細胞的增殖增加和/或數(shù)目升高引起或與其有關(guān)的病癥或疾病(諸如銀屑病)的方法。
[0005]3.發(fā)明背景
[0006]對感染或損傷的炎性應(yīng)答由白細胞對血管壁的粘附啟動(McEver等，1997，J.Clin.1nvest.，100(3):485-492)。選擇蛋白代表一種糖蛋白家族,其介導炎癥期間第一次白細胞-內(nèi)皮細胞和白細胞-血小板相互作用。選擇蛋白家族(其由L-選擇蛋白、E-選擇蛋白、和P-選擇蛋白組成)包含NH2端凝集素域，接著是EGF樣域、一系列共有重復序列、跨膜域、和短的胞質(zhì)尾區(qū)。選擇蛋白的凝集素域與特定的糖綴合物配體相互作用以促進細胞粘附。大多數(shù)白細胞上表達的L-選擇蛋白結(jié)合一些內(nèi)皮細胞和其它白細胞上的配體。細胞因子活化的內(nèi)皮細胞上表達的E-選擇蛋白結(jié)合大多數(shù)白細胞上的配體?；罨难“搴蛢?nèi)皮細胞上表達的P-選擇蛋白也結(jié)合大多數(shù)白細胞上的配體。
[0007]P-選擇蛋白糖蛋白配體-1(“PSGL-1”)，又稱為SELPLG或CD162(分化簇162)是一種用于所有三種選擇蛋白的人粘蛋白型糖蛋白配體(Constantin, Gabriela, 2004, DrugsNews Perspect,17(9):579-585;McEver 等，1997，J.Clin.1nvest.，100(3):485-492)。PSGL-1是一種具有兩個120-kD亞基的二硫鍵鍵合的同二聚體，并且在單核細胞、淋巴細胞、粒細胞的表面上及在一些⑶34+干細胞中表達。PSGL-1有可能有助于多種炎性病癥中的病理性白細胞募集，因為它促進選擇蛋白的粘附相互作用，這提示了 PSGL-1的抑制劑，諸如針對PSGL-1的抗體是潛在有用的抗炎藥物。
[0008]已經(jīng)開發(fā)出數(shù)種抗PSGL-1抗體(見例如國際申請公開文本W(wǎng)02005/110475，2005年11月24日公布；國際申請公開文本W(wǎng)02003/013603，2003年2月20日公布；Constantin, Gabriela, 2004, Drugs News Perspect,17 (9):579-585)。
[0009]4.發(fā)明概述
[0010]在一個方面，本文中提供了特異性結(jié)合PSGL-1的抗體和抗體所衍生的抗原結(jié)合片段。在一個實施方案中，本文中提供了免疫特異性結(jié)合人PSGL-1的單克隆抗體，其包含(i)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的可變輕(“VL”)鏈區(qū)；(ii)包含可變重(“VH”)鏈區(qū)的重鏈，所述可變重(“VH”)鏈區(qū)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；和(iii)人IgGtg定區(qū)，其在依照EU ( Y -Gl免疫球蛋白)索引(參見Edelman等，1969, Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 63 (I):78-85)編號的重鏈氨基酸228處包含絲氨酸至脯氨酸的取代。在一個具體的實施方案中，本文中提供了`免疫特異性結(jié)合人PSGL-1的單克隆抗體，其包含:(i)包含SEQID NO:1的氨基酸序列的輕鏈；和(ii)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重鏈。在另一個具體的實施方案中，本文中提供了免疫特異性結(jié)合人PSGL-1的單克隆抗體，其包含:(i)由SEQ ID N0:2組成的重鏈；和(ii)由SEQ ID NO:1組成的輕鏈。在另一個具體的實施方案中，本文中提供了免疫特異性結(jié)合人PSGL-1的單克隆抗體，其含有包含SEQ ID N0:2的氨基酸序列的重鏈和互補的輕鏈。在一個具體的實施方案中，任一種前述單克隆抗體是純化的。
[0011]在另一個方面，本文中提供了藥物組合物，其包含任一種前述單克隆抗體和藥學上可接受的載體。在一個具體的實施方案中，所述藥物組合物包含純化的單克隆抗體。
[0012]在一個實施方案中，本文中提供了藥物制劑，其包含任一種前述單克隆抗體的水性溶液，所述水性溶液包含檸檬酸鈉、氯化鈉和一水合檸檬酸。在一個具體的實施方案中，所述藥物制劑是包含9.1mM 二水合檸檬酸鈉、150mM氯化鈉、和0.9mM檸檬酸的水性溶液。在另一個具體的實施方案中，所述單克隆抗體在藥物制劑中以0.267mM的濃度存在。在一個具體的實施方案中，所述藥物制劑是包含2.676g/L鈉、8.766g/L氯化鈉、0.2g/L聚山梨酯80和0.189g/L檸檬酸的水性溶液。在另一個具體的實施方案中，所述單克隆抗體在藥物制劑中以40g/L的濃度存在。在一個具體的實施方案中，所有前述水性溶液為pH6.0。 [0013]在另一個方面，本文中提供了編碼本文中描述的抗體或其抗原結(jié)合片段的多核苷酸。在一個具體的實施方案中，本文中提供了分離的多核苷酸，其編碼包含SEQ ID N0:2的抗體重鏈。在一個實施方案中，表達載體包含前述分離的多核苷酸。在一些實施方案中，所述表達載體進一步包含編碼抗體輕鏈的多核苷酸，所述抗體輕鏈包含SEQ ID NO:1。在一個具體的實施方案中，所述表達載體是哺乳動物表達載體。在另一個方面，本文中提供了包含前述表達載體的宿主細胞。在一個具體的實施方案中，所述宿主細胞包含(a)編碼SEQ IDNO:2的第一核酸，其與在所述宿主細胞中的功能性啟動子可操作地連接；和(b)編碼SEQID NO:1的第二核酸，其與在所述宿主細胞中的功能性啟動子可操作地連接。在另一個具體的實施方案中，所述宿主細胞的第一核酸和第二核酸在同一表達載體中或者在不同表達載體中。
[0014]在另一個方面，本文中提供了生成任何前述單克隆抗體的方法，其包括培養(yǎng)任何前述宿主細胞，使得所述細胞表達所述第一核酸和第二核酸，并且所述重鏈和輕鏈裝配在一起以形成所述抗體。
[0015]在另一個方面，本文中提供了包含SEQ ID NO:2的抗體重鏈或包含SEQ ID NO:2的氨基酸I至228的抗體重鏈片段。在一個具體的實施方案中，本文中提供了包含SEQ IDN0:2的抗體重鏈。在另一個具體的實施方案中，本文中提供了包含SEQ ID N0:2的氨基酸I至228的抗體重鏈片段。本文中還提供了生成前述重鏈的方法，其包括培養(yǎng)任何前述宿主細胞，使得細胞表達所述重鏈，并分離所述重鏈。在一個具體的實施方案中，生成任何前述抗體的方法包括依照前述用于生成重鏈的方法生成重鏈，分離所述重鏈，并將所述重鏈與包含SEQ ID NO:1的抗體輕鏈復合。
[0016]在另一個方面，本文中提供了試劑盒，其包含含有任何前述單克隆抗體的第一容器。在一個具體的實施方案中，所述第一容器是小瓶，其含有作為真空下凍干的無菌粉末的所述單克隆抗體，并且所述試劑盒進一步包含第二容器，所述第二容器包含藥學上可接受的流體。本文中還提供了注射裝置，其含有任何前述單克隆抗體。在一個具體的實施方案中，所述注射裝置是注射器。
[0017]在另一個方面，本文中提供了用于預(yù)防和/或治療疾病或病癥的方法，所述疾病或病癥與相對于健康個體或沒有所述特定疾病或病癥的個體而言活化的T細胞的增殖增加和/或數(shù)目升高有關(guān)，或者(完全或部分)由所述活化的T細胞的增殖增加和/或數(shù)目升高引起。在一個具體的實施方案中，本文中提供了用于治療炎性病癥的方法，其包括對有此需要的受試者施用治療有效量的任何前述單克隆抗體。在另一個具體的實施方案中，用于治療炎性病癥的方法包括對有此需要的受試者施用治療有效量的任何前述藥物組合物。在一個具體的實施方案中，所述炎性病癥是自身免疫性疾病。在另一個具體的實施方案中，所述炎性病癥是銀屑病。在另一個具體的實施方案中，所述炎性病癥是斑塊狀銀屑病。在另一個具體的實施方案中，所述斑塊狀銀屑病是中度至重度的斑塊狀銀屑病。在另一個具體的實施方案中，所述炎性病癥是紅皮性銀屑病。在另一個具體的實施方案中，所述炎性病癥是銀屑病關(guān)節(jié)炎。在另一個具體的實施方案中，所述炎性病癥是類風濕性關(guān)節(jié)炎。在另一個具體的實施方案中，所述炎性病癥是克羅恩氏病。在另一個具體的實施方案中，所述炎性病癥是強直性脊柱炎。在另一個具體的實施方案中，所述炎性病癥是糖尿病。
[0018]5.附圖簡述
[0019]圖1描繪了 hl5A7和15A7H的非還原性毛細管凝膠電泳(CGE)。箭頭標示半個抗體分子的峰。
[0020]圖2描繪了 15A7H和對照抗體對活化的人⑶4+T細胞的結(jié)合。通過將平均熒光強度(MFI)對抗體濃度繪圖使用一位點4參數(shù)擬合模型(one site4-parameter fit model)得到 EC5tl 值(nM)。
[0021]圖3描繪了 4個供體PBMC中體內(nèi)轉(zhuǎn)移性遲發(fā)超敏反應(yīng)(trans-vivo DTH)中15A7H抗體的合并劑量應(yīng)答。用0.03,0.1,0.3、I和10mg/kg抗體，或媒劑處理后4個供體的合并的均值 +SEM0 pbmc:僅 PBMC，V:媒劑、0.03,0.1,0.3、I 和 10mg/kgl5A7H 抗體。響應(yīng) 0.03、0.1,0.3、I和10mg/kgl5A7H抗體處理的足墊厚度抑制百分比。
[0022]圖4描繪了在單次腹膜內(nèi)注射后C57BL/6小鼠中15A7H抗體的24小時血漿濃度。將實驗動物中2種抗體的合并的血漿水平(均值土SEM，n=4)相對于其在體內(nèi)轉(zhuǎn)移性DTH測定法中的足墊厚度的抑制百分比繪圖。
[0023]圖5描繪了 C57BL/6小鼠中15A7H血漿濃度對時間繪圖。用0.03,0.1,0.3、1、和10mg/kgl5A7H抗體對4只Satellite小鼠腹膜內(nèi)注射給藥。在1、3、5和24小時采集血液樣品。
[0024]圖6描繪了 15A7H和對照抗體的CDC活性(其以不同濃度(5、0.5、0.05、0.005和0.0005 μ g/ml)測試)。
[0025]圖7A描繪了抗體15A7H的重鏈氨基酸序列(SEQ ID NO: 2)?？勺冎劓渽^(qū)(SEQ IDNO:4)為粗體的。CDR(CDR1(SEQ ID NO:8)、CDR2 (SEQ ID NO:9)和 CDR3 (SEQ ID NO: 10))是框示的。還標示了框架區(qū)(FRl (SEQ ID N0:17)、FR2(SEQ ID NO: 18)、FR3 (SEQ ID NO: 19)和FR4(SEQ ID NO:20))。標示了恒定區(qū)。鉸鏈區(qū)氨基酸序列(SEQ ID NO: 12)是框示的。鉸鏈區(qū)中氨基酸位置228處取代的脯氨酸是斜體的。
[0026]圖7B描繪了抗體15A7H的輕鏈氨基酸序列(SEQ ID NO:1)?？勺冚p鏈區(qū)(SEQ IDNO: 3)為粗體的。CDR(CDR1(SEQ ID NO: 5)、CDR2 (SEQ ID NO:6)和 CDR3 (SEQ ID NO: 7))是框示的。還標示了框架區(qū)(FRl (SEQ ID N0:13)、FR2(SEQ ID NO: 14), FR3 (SEQ ID NO: 15)和 FR4(SEQ ID NO: 16))。標示了恒定區(qū)。
[0027]表1:SEQ ID NO及其相應(yīng)序列的列表
【權(quán)利要求】
1.一種免疫特異性結(jié)合人PSGL-1的單克隆抗體，其包含: ⑴可變輕(“VL”)鏈區(qū)，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列； (ii)包含可變重(“VH”)鏈區(qū)的重鏈，所述可變重(“VH”)鏈區(qū)包含SEQID NO:4的氨基酸序列；和 (iii)人IgG4恒定區(qū)，其在依照EU索引編號的重鏈氨基酸228處包含絲氨酸至脯氨酸的取代。
2.一種免疫特異性結(jié)合人PSGL-1的單克隆抗體，其包含: (i)包含SEQID NO:1的氨基酸序列的輕鏈；和 (ii)包含SEQID NO:2的氨基酸序列的重鏈。
3.一種免疫特異性結(jié)合人PSGL-1的單克隆抗體，其包含: ⑴由SEQ ID NO:2組成的重鏈；和 (ii)由SEQ ID NO:1組成的輕鏈。
4.一種單克隆 抗體，其免疫特異性結(jié)合人PSGL-1，并且包含如下的重鏈，所述重鏈包含: (i)包含SEQID N0:8、9和10的VH鏈區(qū);和 (ii)人IgG4重鏈恒定區(qū)，其在依照EU索引編號的重鏈氨基酸228處包含絲氨酸至脯氨酸的氨基酸取代。
5.權(quán)利要求4的單克隆抗體，其中所述單克隆抗體進一步包含輕鏈，所述輕鏈包含含有SEQ ID NO: 5、6和7的VL鏈區(qū)。
6.權(quán)利要求1至5中任一項的單克隆抗體，其中所述抗體是純化的。
7.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至6中任一項的單克隆抗體和藥學上可接受的載體。
8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其中所述單克隆抗體是純化的。
9.一種抗體重鏈，其包含SEQ ID NO:2。
10.一種試劑盒，其包含含有權(quán)利要求1至6中任一項的單克隆抗體的第一容器。
11.一種注射裝置，其含有權(quán)利要求1至6中任一項的單克隆抗體。
12.權(quán)利要求11的注射裝置，其中所述注射裝置是注射器。
13.一種用于治療炎性病癥的方法，所述方法包括對有此需要的受試者施用治療有效量的權(quán)利要求1至6中任一項的單克隆抗體或權(quán)利要求8或權(quán)利要求9的藥物組合物。
14.一種用于治療炎性病癥的方法，其包括對有此需要的受試者施用治療有效量的權(quán)利要求7或8的藥物組合物。
15.權(quán)利要求13或14的方法，其中所述炎性病癥是自身免疫性疾病。
16.權(quán)利要求13至15中任一項的方法，其中所述炎性病癥是:銀屑病、斑塊狀銀屑病、慢性斑塊狀銀屑病、滴狀銀屑病、反轉(zhuǎn)型銀屑病、膿皰性銀屑病、紅皮性銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩氏病、強直性脊柱炎，或糖尿病。
【文檔編號】C07K16/28GK103732626SQ201280039482
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2012年6月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月13日
【發(fā)明者】S.巴薩拉布, B.恩恩克爾, P.加里德爾, H.肖特, S.辛, T.利特曾伯格 申請人:艾比吉諾米克斯合作公司