白細(xì)胞介素-31單克隆抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了特異性結(jié)合到犬白細(xì)胞介素-31(IL-31)或貓IL-31中的至少一種上的分離的抗體。此類抗體可以是用于治療狗和貓?bào)w內(nèi)的瘙癢和/或過敏癥的診斷和/或獸用組合物形式。
【專利說明】白細(xì)胞介素-31單克隆抗體
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及重組單克隆抗體領(lǐng)域及其在臨床與科學(xué)程序,包括診斷程序中的用途。本發(fā)明還提供了用于治療狗或貓的瘙癢癥或過敏癥的獸用組合物形式的分離的抗-1L31抗體。
【背景技術(shù)】
[0002]特異性皮炎已經(jīng)由美國獸醫(yī)皮膚病學(xué)會(huì)特別工作組定義為“一種具有特征性臨床表現(xiàn)的基因易患性炎癥和瘙癢過敏性皮膚疾病(Olivry等人,Veterinary Immunologyand Immunopathology2001; 81:143-146)。該特別工作組還認(rèn)識(shí)到,犬的此類疾病與變應(yīng)原-特異性 IgE 相關(guān)(Olivry 等人,2001supra;Marsella&01ivry Clinics inDermatology2003; 21:122-133)。嚴(yán)重瘙癢伴隨著繼發(fā)性脫毛與紅斑對(duì)寵物主人而言是最為明顯和關(guān)心的癥狀。
[0003]因貧乏和不一致的流行病學(xué)數(shù)據(jù),特異性皮炎的流行率尚不能精確得知,但是估計(jì)為犬類總數(shù)的 10% (Marsella&01ivry2003supra; Scott 等人,CanadianVeterinary Journal2002;43:601-603;Hi 11ier Veterinary Immunology andImmunopathology2001;81:147-151)。在全球,大約4.5億只狗患有這種慢性和終身的疾病。發(fā)病率似乎在升高。懷疑品種和性別的偏向,但是隨地理區(qū)域會(huì)發(fā)生巨大的變化(Hillier, 2001supra; Picco 等人,Vet Dermatol.2008; 19:150-155)。
[0004]過敏性皮炎中涉及的潛在因素很多,但了解甚少。食物成分可能引發(fā)特異性皮炎(Picco,2008supra),以及環(huán)境變應(yīng)原如跳蚤、塵螨、豚草、植物提取物等等。遺傳因素也起著重要的作用。盡管并無證實(shí)的品種偏向,某些遺傳方式被認(rèn)為提高了對(duì)特異性皮炎的易感性(Sousa&Marsella Veterinary Immunology and Immunopathology2001; 81:153-157;Schwartzman 等人,Clin.Exp.Tmmunol.1971;9:549-569)。
[0005]白細(xì)胞介素-31(IL_31)是2004年克隆的細(xì)胞因子。其主要由活化的T輔助(Th) 2細(xì)胞產(chǎn)生(Dillon等人,Nat Immunol2004; 5:752-60),也是也可以在肥大細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中產(chǎn)生。IL-31結(jié)合由IL-31受體A(IL-31RA)和制瘤素M受體(OSMR)組成的共同受體(Dillon 等人,2004supra 和 Bilsborough 等人,J Allergy ClinImmunol.2006117(2):418-25)。受體激活導(dǎo)致通過JAK受體的STAT磷酸化。該共同受體的表達(dá)已經(jīng)顯示在巨噬細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞中和在背根神經(jīng)節(jié)中。近來,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)IL-31涉及皮炎、瘙癢性皮膚病損、過敏和氣道過敏,參見圖1。
[0006]用抗⑶3和抗⑶28抗體刺激T細(xì)胞立即上調(diào)IL-31mRNA表達(dá)(Dillon等人,2004supra)。微陣列分析已經(jīng)表明,IL-31誘導(dǎo)某些趨化基因如CXCL1、CLL17 (胸腺和活化調(diào)節(jié)的趨化因子[TARC])、CCL19(巨噬細(xì)胞炎性蛋白[ΜΙΡ]3β )、CCL22 (單核細(xì)胞衍生的趨化因子[MDC])、CCL23 (MIP3)和 CCL4 (MIP β ) (Dillon 等人,2004supra)。
[0007]過度表達(dá)IL-31的轉(zhuǎn)基因小鼠表現(xiàn)出皮膚炎癥、瘙癢、嚴(yán)重皮炎和脫毛(Dillon等人,2004supra)。對(duì)小鼠皮下注射IL-31觸發(fā)了被炎性細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤,并導(dǎo)致表皮增厚和皮膚黑棘。在患有自然原因?qū)е碌奶禺愋云ぱ?AD)的NC/Nga小鼠中,IL-31在皮膚損傷中過度表達(dá)并與瘙癢有關(guān)(Takaoka等人,Eur J.Pharmacol.2005;516,180-181 ;Takaoka 等人,Exp.Dermatol.2006;15,161-167)。同樣,在小鼠模型中,IL-31已經(jīng)顯示引發(fā)了迅速發(fā)作的瘙癢(Raap等人,J Allergy ClinImmunol.2008;122(2):421-3)。
[0008]進(jìn)一步的研究表明,IL-31與特應(yīng)性皮炎引起的人類的皮膚炎癥和瘙癢有關(guān)。在人類AD患者中,IL-31mRNA的表達(dá)在皮膚損傷中遠(yuǎn)高于在非皮損皮膚中的表達(dá),并且在非皮損皮膚中的表達(dá)遠(yuǎn)大于在來自健康患者的正常皮膚中的表達(dá)(Sonkoly等人,J AllergyClin Immunol2006; 117:411-7)。另一研究已經(jīng)報(bào)道了 AD患者皮膚內(nèi)的CD45R0+(記憶)皮膚淋巴細(xì)胞抗原(CLA))陽性T細(xì)胞表達(dá)IL-31mRNA和蛋白質(zhì)(Bilsborough等人,2006supra)。還已經(jīng)報(bào)道了患者皮膚中的IL_31mRNA過度表達(dá)或變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎與IL-4和IL-13mRNA表達(dá)有關(guān),但是與干擾素(IFN)-YmRNA表達(dá)無關(guān)(Neis等A, J.Allergy Clin.1mmunol.2006; 118,930-937)。此外,IL-31 血清水平已經(jīng)顯示在患有慢性自發(fā)性蕁麻疹的人類患者體內(nèi)提高,在AD患者體內(nèi)甚至更高(Raap等人,ExpDermatol.2010; 19 (5):464-6)。同樣,在人體內(nèi)已經(jīng)觀察到了 AD的嚴(yán)重程度與血清IL-31水平的相關(guān)性(Rapp等人,2008supra)。已經(jīng)顯示了在IgE交聯(lián)后并在特應(yīng)性個(gè)體中響應(yīng)于金黃色葡萄球菌超抗原IL-31在肥大細(xì)胞中分泌提高。此外,IL-31已經(jīng)顯示了在人結(jié)腸肌成纖維細(xì)胞中刺激產(chǎn)生幾種促炎介質(zhì),包括IL-6、IL-8、CXCLl、CC17和多種金屬蛋白酶(Yagi 等人,International Journal of Molecular Medicine2007; 19 (6): 941-946)。
[0009]針對(duì)環(huán)境變應(yīng)原的I型超敏反應(yīng)被認(rèn)為是犬AD的主要機(jī)制,并且Th2_介導(dǎo)的細(xì)胞因子,如IL-4的水平在患有AD的狗的皮膚損傷中提高(Nuttall等人,Vet.1mmunol.1mmunopathol.2002; 87, 379-384)。此外,infiltration by 炎性細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤是潛在加重皮膚損傷的重要機(jī)制;趨化基因CCL17/TARC、CCR4和CCL28/黏膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC)的過度表達(dá)在患有AD的狗體內(nèi)導(dǎo)致皮膚損傷加重(參見Maeda 等人,Vet.1mmunol.1mmunopathol.2005; 103,83-92 ; Mae da 等人,Vet.1mmunol.1mmunopathol.2002b; 90,145-154 ;和 Maeda 等人,J.Vet.Med.Sc1.2008; 70,51-55)。
[0010]最近的證據(jù)表明,IL-31可能參與促進(jìn)變態(tài)反應(yīng)性炎癥與變態(tài)反應(yīng)性哮喘的呼吸道上皮響應(yīng)特性(Chattopadhyay 等人,J Biol Chem2007; 282:3014-26 ;和 Wai 等人,Immunology,2007;122,532-541)。
[0011]這些觀察結(jié)果支持了 IL-31在瘙癢與過敏癥中起到顯著作用的假說。合意的是提供可用于治療狗或貓的瘙癢癥和/或過敏癥的針對(duì)IL-31的治療性抗體。
[0012]發(fā)明概述
[0013]在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種特異性結(jié)合到犬IL-31或貓IL-31中的至少一種上的分離的抗體。在一些實(shí)施方案中,該抗體是一種單克隆抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中,該單克隆抗體是嵌合的。在另一個(gè)實(shí)施方案中,該抗體是犬源化的或貓?jiān)椿摹?br>
[0014]在一些實(shí)施方案中,該抗體減輕、抑制或中和狗或貓?bào)w內(nèi)的IL-31活性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中,該抗體減輕、抑制或中和瘙癢癥或過 敏癥。瘙癢癥包括例如特異性皮炎、濕疹、牛皮癬、硬皮病和瘙癢。過敏癥包括例如變態(tài)反應(yīng)性皮炎、夏季濕疹、蕁麻疹、馬喘息病、氣道炎癥性疾病、復(fù)發(fā)性氣道阻塞、氣道高反應(yīng)性、慢性阻塞性肺疾病和自身免疫引起的炎癥過程,如腸易激綜合征(IBS)。
[0015]在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供一種分離的抗體或其抗原結(jié)合部分,其包括以下的至少一個(gè):
[0016]具有以下氨基酸序列的可變重(Vh)鏈互補(bǔ)決定區(qū)(OTR) I =YYDIN (SEQID NO:1;11E12-VH-CDR1),SYDMS(SEQ ID NO:2;19D07-VH-CDR1)或 NYGMS (SEQ IDN0:3;34D03-VH-CDR1);
[0017]具有以下氨基酸序列的可變重鏈CDR2:WIFP⑶GGTKYNETFKG (SEQ IDN0:4;11E12-VH-CDR2), TITSGGGYTYSADSVKG(SEQ ID NO:5;19D07-VH-CDR2)或TISYGGSYTYYPDNIKG(SEQ ID NO:6;34D03-VH-CDR2);
[0018]具有以下氨基酸序列的可變重鏈CDR3:ARGGTSVIRDAMDY(SEQ IDNO:7; 11E12-VH-CDR3),ARQNWVVGLAY(SEQ ID NO:8; 19D07-VH-CDR3)或 VRGYGYDTMDY(SEQID N0:9;34D03-VH-CDR3);以及
[0019]其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
[0020]在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供包括下列基團(tuán)的至少一種的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分:
[0021]包含具有以下氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)(OTR) I的可變輕(Vl)鏈:RASESVDNYGISFMH(SEQ ID NO:10;I1E12-VL-CDR1), KSSQSLLNSGNQKNYLA(SEQ IDN0:11;19D07-VL-CDR1)或 KASQSVSFAGTGLMH(SEQ ID NO:12;34D03-VL-CDR1);
[0022]具有以下氨基酸序列的可變輕鏈CDR2:RASNLE`S(SEQ ID NO: 13; 11E12-VL-CDR2),GASTRES(SEQ ID NO:14;19D07-VL-CDR2)或 RASNLEA(SEQ ID NO:15;34D03-VL-CDR2);
[0023]具有以下氨基酸序列的可變輕鏈CDR3:QQSNKDPLT(SEQ IDN0:16;11E12-VL-CDR3), QNDYSYPYT(SEQ ID NO:17;19D07-VL-CDR3)或 QQSREYPWT(SEQ IDN0:18;34D03-VL-CDR3);以及
[0024]其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
[0025]在又一個(gè)實(shí)施方案中,具有上述可變輕鏈⑶R的至少一種的抗體可以進(jìn)一步包括下列可變重鏈⑶R的至少一種:
[0026]具有以下氨基酸序列的可變重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(OTR) I =YYDIN (SEQ IDNO:1;11E12-VH-CDR1), SYDMS (SEQ ID NO:2;19D07-VH-CDR1)或 NYGMS (SEQ IDN0:3;34D03-VH-CDR1);
[0027]具有以下氨基酸序列的可變重鏈CDR2:WIFP⑶GGTKYNETFKG (SEQ IDN0:4;11E12-VH-CDR2), TITSGGGYTYSADSVKG(SEQ ID NO:5;19D07-VH-CDR2)或TISYGGSYTYYPDNIKG(SEQ ID NO:6;34D03-VH-CDR2);
[0028]具有以下氨基酸序列的可變重鏈CDR3:ARGGTSVIRDAMDY(SEQ IDNO: 7 ; 11E12-VH-CDR3),ARQNWVVGLAY (SEQ ID NO: 8; 19D07-VH-CDR3)或 VRGYGYDTMDY (SEQID N0:9;34D03-VH-CDR3);以及
[0029]其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
[0030]在一些實(shí)施方案中,該抗體可以包括下列的至少一種:
[0031]a)可變輕鏈,包含:
[0032]DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMHWYQQKPGQP PKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVETDDVATYYCQQS NKDPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:19;MU-11E12_VL),
[0033]DI VMTQTPLSLSVSPGEPAS I SCRASESVDNYG I SFMHffYQQKPGQP PKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEADDAGVYYCQQ SNKDPLTFGAGTKLEIK(SEQ IDNO:20;CAN-1IEI2-VL-cUn-Fff2), DIVMTQTPLSLSVSPGEPASISCRASESVDNYGISFMHffFQQKPGQS PQLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEADDAGVYYCQQ SNKDPLTFGAGTKLEIK(SEQ IDN0:21;CAN-llE12-VL-cUn-13),
[0034]DIVMSQSPSSLSVSAGDKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQK PWQPPKLLIYGASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVY YCQNDYSYPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:22;MU-19D07-VL),
[0035]EI VMTQSPASLSLSQEEKVT I TCKSSQSLLNSGNQKNYLAffYQQKPG QAPKLLIYGASTRESGVPSRFSGSGSGTDFSFTISSLEPEDVAVYYCQ NDYSYPYTFGQGTKLEIK(SEQ IDNO:23;CAN-19D07-VL-998-1),DILLTQSPASLAVSLGQRA11SCKASQSVSFAGTGLMHffYQQKPGQQ PKLLIYRASNLEAGVPTRFSGSGSRTDFTLNIHPVEEEDAATYFCQQS REYPffTFGGGTKLEIK(SEQ IDN0:24;MU-34D03-VL),或
[0036]EI VMTQSPASLSLSQEEKVT I TCKASQSVSFAGTGLMHffYQQKPGQ APKLLIYRASNLEAGVPSRFSGSGSGTDFSFTISSLEPEDVAVYYCQQ SREYPffTFGQGTKLEIK(SEQ IDNO:25;CAN-34D03-VL-998-1);
[0037]b)可變重鏈,包含:
[0038]QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFKYYDINWVRQRPEQGL EffIGffIFPGDGGTKYNETFKGKATLTTDKSSSTAYMQLSRLTSEDSA VYFCARGGTSVIRDAMDYffGQGTSVTVSS(SEQ IDN0:26;MU-11E12-VH),
[0039]EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFKYYDINWVRQAPGAGL DffMGffIFPGDGGTKYNETFKGRVTLTADTSTSTAYMELSSLRA⑶I AVYYCARGGTSVIRDAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27 ;CAN-11E12-VH-415-1),
[0040]EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSSYDMSWVRQIPEKRLE WVATITSGGGYTYSADSVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLRSEDTAV YYCARQNffVVGLAYffGQGTLVTVSA (SEQ ID N0:28 ;MU-19D07-VH),
[0041]EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLQ WVATITSGGGYTYSADSVKGRFTISRDNARNTLYLQMNSLRSEDTA VYYCARQNWVVGLAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID N0:29 ;CAN-19D07-VH-400-1),
[0042]EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFSFSNYGMSWVRQTPDKRLE WVATISYGGSYTYYPDNIKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTA MYYCVRGYGYDTMDYffGQGTSVTVSS (SEQ ID NO:30;MU-34D03-VH),或
[0043]EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGL QffVATISYGGSYTYYPDNIKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDT AMYYCVRGYGYDTMDYffGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:31;CAN-34D03-VH-568-1);和
[0044]c)其具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
[0045] 在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明提供特異性結(jié)合到SEQ ID NO: 32的犬IL-31氨基酸序列的大約氨基酸殘基95位至125位之間的區(qū)域或貓IL-31中的相應(yīng)區(qū)域上的單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中,該抗體特異性結(jié)合到SEQ ID NO: 32的犬IL-31氨基酸序列的大約氨基酸殘基102位至122位之間的區(qū)域或貓IL-31中的相應(yīng)區(qū)域上。
[0046]本發(fā)明還提供包括治療有效量的至少一種上述抗體的獸用組合物。
[0047]在其它實(shí)施方案中,本發(fā)明提供能產(chǎn)生上述抗體的宿主細(xì)胞。
[0048]在再其它實(shí)施方案中,本發(fā)明提供了一種分離的核酸,該核酸包括編碼以下至少一種的核酸序列:
[0049]具有以下氨基酸序列的可變重(Vh)鏈互補(bǔ)決定區(qū)(OTR) I =YYDIN (SEQ IDN0:1 ;11E12-VH-CDR1),SYDMS(SEQ ID NO:2 ; 19D07-VH-CDR1)或 NYGMS(SEQ ID NO: 3 ;34D03-VH-CDR1);
[0050]具有以下氨基酸序列的可變重鏈CDR2:WIFP⑶GGTKYNETFKG (SEQ IDN0:4 ;11E12-VH-CDR2), TITSGGGYTYSADSVKG(SEQ ID NO: 5 ;19D07-VH-CDR2)或TISYGGSYTYYPDNIKG(SEQ ID N0:6 ;34D03-VH_CDR2);
[0051]具有以下氨基酸序列的可變重鏈CDR3:ARGGTSVIRDAMDY(SEQ ID NO:7 ;I IE 12-VH-CDR3),ARQNWVVGLAY (SEQ ID NO: 8 ; 19D07-VH-CDR3)或 VRGYGYDTMDY (SEQ IDNO: 9 ;34D03-VH-CDR3);以及
[0052]其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
[0053]在進(jìn)一步實(shí)施方案中,上述分離的核酸可以進(jìn)一步包括編碼下列至少一種的核酸序列:
[0054]包含具有以下氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)(OTR) I的可變輕(Vl)鏈:RASESVDNYGISFMH(SEQ ID NO:10 ;11E12-VL_CDR1),KSSQSLLNSGNQKNYLA(SEQ ID NO:11 ;19D07-VL-CDR1)或 KASQSVSFAGTGLMH(SEQ ID NO:12 ;34D03-VL_CDR1);
`[0055]具有以下氨基酸序列的可變輕鏈CDR2:RASNLES(SEQ ID NO: 13 ;11E12-VL_CDR2),GASTRES(SEQ ID NO:14 ;19D07-VL_CDR2)或 RASNLEA(SEQ ID NO:15 ;34D03-VL_CDR2);
[0056]具有以下氨基酸序列的可變輕鏈CDR3:QQSNKDPLT(SEQ ID NO: 16 ;11E12-VL-CDR3), QNDYSYPYT (SEQ ID NO: 17 ; 19D07-VL-CDR3)或QQSREYPWT (SEQ ID NO: 18 ;34D03-VL-CDR3);以及
[0057]其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
[0058]本發(fā)明進(jìn)一步提供包括至少一種上述核酸的載體。
[0059]在其它實(shí)施方案中,本發(fā)明提供了制造抗體的方法,包括在導(dǎo)致產(chǎn)生該抗體的條件下培養(yǎng)上述宿主細(xì)胞,并從該宿主細(xì)胞或該宿主細(xì)胞的培養(yǎng)介質(zhì)中分離該抗體。
[0060]還提供了治療癥狀或疾病的方法,所述癥狀或疾病選自瘙癢癥或過敏癥,包括施用治療有效量的上述抗體。在一些實(shí)施方案中,該瘙癢癥選自特異性皮炎、濕疹、牛皮癬、硬皮病和瘙癢。在其它實(shí)施方案中,待治療的過敏癥至選自變態(tài)反應(yīng)性皮炎、夏季濕疹、蕁麻疹、馬喘息病、氣道炎癥性疾病、復(fù)發(fā)性氣道阻塞、氣道高反應(yīng)性、慢性阻塞性肺疾病和自身免疫引起的炎癥過程,如腸易激綜合征(IBS)。
[0061]進(jìn)一步提供了通過施用上述抗體抑制狗或貓?bào)w內(nèi)的IL-31活性的方法。
[0062]還提供了檢測(cè)或定量樣品中IL-31的方法,該方法包括在上述抗體的存在下培養(yǎng)含有IL-31的臨床或生物樣品;并檢測(cè)結(jié)合到樣品中的IL-31上的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中,可檢測(cè)地標(biāo)記該抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中,該抗體是未標(biāo)記的,并與標(biāo)記過的第二抗體組合使用。[0063]附圖概述
[0064]圖1是IL-31途徑(pathway)的示意圖。
[0065]圖2是突出抗原結(jié)合位點(diǎn)的小鼠免疫球蛋白G(IgG)分子的一般結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0066]圖3是小鼠:犬嵌合IgG的一般結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0067]圖4是顯示小鼠IgG的形態(tài)或“犬源化”的圖解,小鼠⑶R接枝到由序列數(shù)據(jù)庫識(shí)別的犬框架上。
[0068]圖5是配對(duì)具有完全犬源化重鏈的嵌合輕鏈的“雜源嵌合(heterochimeric) ”單克隆抗體的圖解。
[0069]圖6相對(duì)于預(yù)先放血和陽性的對(duì)照物小鼠的來自IL-31免疫小鼠(CF_1MU#1 - 4)的 ELISA Titers0
[0070]圖7是顯示對(duì)恒定區(qū)的引物和指向小鼠可變區(qū)的簡并引物的抗體可變鏈的圖解。
[0071]圖8是安慰劑對(duì)照、單劑量、SC研究(76A60)中嵌合11E12的藥效試驗(yàn)的圖。
[0072]圖9是顯示研究76A60中登記的狗的個(gè)體瘙癢評(píng)分的表。
[0073]圖10是顯示11E12的嵌合的(Blot#l)、犬源化的(Blot#2)和雜源嵌合的(Blots#3和4)版本結(jié)合到犬IL-31的Western蛋白質(zhì)印跡。Blot#3中的雜源嵌合體(heterochimera)具有與嵌合重鏈配對(duì)的犬源化輕鏈。Blot#4中的雜源嵌合體具有與犬源化重鏈配對(duì)的嵌合輕鏈。各硝化纖維素印跡含有預(yù)染蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(Seeblueplus2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA)(左泳道)和 800ng 的犬 IL-31 (右泳道)。
[0074]圖11是犬源化11E12輕鏈框架替換工作的示意圖。
[0075]圖12是顯示具有單一回復(fù)突變的11E12的犬源化版本結(jié)合到小鼠框架2輕鏈殘基上的Western蛋白質(zhì)印跡。各硝化纖維素印跡含有預(yù)染蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(Seeblueplus2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA)(左泳道)和 800ng 的犬 IL-31 (右泳道)。
[0076]圖13是采用全長和截短的犬IL-31蛋白質(zhì)的Western蛋白質(zhì)印跡。個(gè)體硝化纖維素印跡用A)抗-His B)34D03和C)11E12抗體探測(cè)。印跡的泳道1_9對(duì)應(yīng)如下:泳道I——
預(yù)染蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(Seeblue plus2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA);泳道 2-全長犬
IL-31 ;泳道3——N-末端截短-20N ;泳道4——N-末端截短-40N ;泳道5——N-末端截短-60N ;泳道6——C-末端截短-20C ;泳道7——C-末端截短-40C ;泳道8——C-末端截短-60C ;和泳道9——β -半乳糖苷酶(1acZ)。注意:全長IL-31和具有C-末端截短的蛋白質(zhì)(_20、_40C和-60C)在這些條件下沒有顯示可檢測(cè)的表達(dá)。
[0077]圖14是采用截短的犬IL-31蛋白質(zhì)的Western蛋白質(zhì)印跡。個(gè)體硝化纖維素印跡用A)抗-His、B) 11E12和C) 34D03抗體探測(cè)。印跡的泳道1_5對(duì)應(yīng)如下:泳道1——預(yù)染
蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(Seeblue plus2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA);泳道2-在 20-122 位
置處的C-末端截短;泳道3—在位置20-100處的C-末端截短;泳道4—在位置20-80處的C-末端截短;和泳道5-β -半乳糖苷酶(IacZ)。
[0078]圖15是采用表達(dá)具有替換各氨基酸位置(76-122)的丙氨酸的犬IL-31的大腸桿菌(E.coli)菌株的裂解物的Western蛋白質(zhì)印跡片段。如圖中所示,個(gè)體硝化纖維素印跡用抗-His、llE12和34D03抗體探測(cè)。
[0079]圖16是在犬IL-31中具有雙重和三重突變的Western蛋白質(zhì)印跡的片段。-20N蛋白質(zhì)裂解物作為陽性對(duì)照物運(yùn)行。[0080]圖17是顯示皮下注射犬源化的34D03抗體(1.0mg/kg)的狗的瘙癢評(píng)分的圖。在用1.5 μ g/kg犬IL-31激發(fā)的前一天(基線響應(yīng))和后一天(2h響應(yīng))對(duì)每次研究測(cè)量瘙癢評(píng)分。
[0081]圖18是含有提純的犬和貓IL-31蛋白質(zhì)的4_12%Bis Tris SDS PAGE。板A顯示了在還原性條件下運(yùn)行的蛋白質(zhì)的考馬斯亮藍(lán)染色。板B顯示了在非還原性條件下運(yùn)行的蛋白質(zhì)的考馬斯亮藍(lán)染色。板C和D是分別與A和B相同的凝膠的Western蛋白質(zhì)印跡,用抗-His抗體探測(cè)。泳道I—犬IL-31 ;泳道2—貓IL-31 ;泳道3——預(yù)染蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)
品(Seeblue plus2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA);泳道 4-犬 IL-31 ;和泳道 5-
貓 IL_31。 [0082]圖19是大腸桿菌(E.coli)中制造的犬和貓IL-31誘導(dǎo)的在犬DH-82單核細(xì)胞中的pSTAT信令的圖。犬IL-31(CH0)是用于所有先前的基于細(xì)胞的測(cè)定,狗瘙癢模型和作為抗體初步鑒定的免疫原的參比蛋白質(zhì)。
[0083]圖20是顯示在涉及11E12和34D03抗體(用加號(hào)標(biāo)注)的結(jié)合的區(qū)域中貓與犬IL-31之間的序列保守性的對(duì)比。
[0084]圖21是采用IL-31蛋白質(zhì)的Western蛋白質(zhì)印跡。個(gè)體硝化纖維素印跡用A)抗-把8、8)1比12和034003抗體探測(cè)。注意:犬IL-31 (CHO)不含6_His tag。
[0085]圖22是比較貓?jiān)椿腿椿贵w34D03的顯示犬DH82單核細(xì)胞中pSTAT信令引發(fā)的犬IL-31抑制的圖。
[0086]圖23是用貓?jiān)椿贵w34D03探測(cè)的在還原性條件下貓和犬IL-31的Western蛋白質(zhì)印跡。
[0087]序列概述
[0088]SEQ ID NO:1是在本文中稱為11E12-VH-CDR1的可變重鏈CDRl ;
[0089]SEQ ID N0:2是在本文中稱為19D07-VH-CDR1的可變重鏈CDRl ;
[0090]SEQ ID NO: 3是在本文中稱為34D03-VH-CDR1的可變重鏈CDRl ;
[0091]SEQ ID N0:4是在本文中稱為11E12-VH-CDR2的可變重鏈CDR2 ;
[0092]SEQ ID NO: 5是在本文中稱為19D07-VH-CDR2的可變重鏈CDR2 ;
[0093]SEQ ID NO:6是在本文中稱為34D03-VH-CDR2的可變重鏈CDR2 ;
[0094]SEQ ID N0:7是在本文中稱為11E12-VH-CDR3的可變重鏈CDR3 ;
[0095]SEQ ID N0:8是在本文中稱為19D07-VH-CDR3的可變重鏈CDR3 ;
[0096]SEQ ID NO:9是在本文中稱為34D03-VH-CDR3的可變重鏈CDR3 ;
[0097]SEQ ID NO: 10是在本文中稱為11E12-VL-CDR1的可變輕鏈CDRl ;
[0098]SEQ ID NO: 11是在本文中稱為19D07-VL-CDR1的可變輕鏈CDRl ;
[0099]SEQ ID NO: 12是在本文中稱為34D03-VL-CDR1的可變輕鏈CDRl ;
[0100]SEQ ID NO: 13是在本文中稱為11E12-VL-CDR2的可變輕鏈CDR2 ;
[0101]SEQ ID NO: 14是在本文中稱為19D07-VL-CDR2的可變輕鏈CDR2 ;
[0102]SEQ ID NO: 15是在本文中稱為34D03-VL-CDR2的可變輕鏈CDR2 ;
[0103]SEQ ID NO: 16是在本文中稱為11E12-VL-CDR3的可變輕鏈CDR2 ;
[0104]SEQ ID NO: 17是在本文中稱為19D07-VL-CDR3的可變輕鏈CDR3 ;
[0105]SEQ ID NO: 18是在本文中稱為34D03-VL-CDR3的可變輕鏈CDR3 ;[0106]SEQ ID NO: 19是在本文中稱為MU-11E12-VL的可變輕鏈序列;
[0107]SEQ ID NO:20是在本文中稱為CAN-llE12-VL-cUn_FW2的可變輕鏈序列;
[0108]SEQ ID NO:21是在本文中稱為CAN-llE12-VL-cUn_13的可變輕鏈序列;
[0109]SEQ ID NO:22是在本文中稱為MU-19D07-VL的可變輕鏈序列;
[0110]SEQ ID NO:23是在本文中稱為CAN-19D07-VL-998-1的可變輕鏈序列;
[0111]SEQ ID NO:24是在本文中稱為MU-34D03-VL的可變輕鏈序列;
[0112]SEQ ID NO:25是在本文中稱為CAN-34D03-VL-998-1的可變輕鏈序列;
[0113]SEQ ID NO:26是在本文中稱為MU-11E12-VH的可變重鏈序列;
[0114]SEQ ID NO:27是在本文中稱為CAN-11E12-VH-415-1的可變重鏈序列;
[0115]SEQ ID NO:28是在本文中稱為MU-19D07-VH的可變重鏈序列;
[0116]SEQ ID NO:29是在本文中稱為CAN-19D07-VH-400-1的可變重鏈序列;
[0117]SEQ ID NO:30是在本文中稱為MU-34D03-VH的可變重鏈序列;
[0118]SEQ ID NO:31是在本文中稱為CAN-34D03-VH-568-1的可變重鏈序列;
[0119]SEQ ID NO: 32是對(duì)應(yīng)GenBank登錄號(hào)C7G0W1的氨基酸序列并相應(yīng)于犬IL-31全長蛋白質(zhì);
[0120]SEQ ID NO: 33是對(duì)應(yīng)GenBank登錄號(hào)C7G0W1的核苷酸序列并相應(yīng)于該核苷酸序列編碼的犬IL-31全長蛋白質(zhì);
[0121]SEQ ID NO:34是編碼在本文中稱為MU-11E12-VL的可變輕鏈序列的核苷酸序列;
[0122]SEQ ID NO:35是編碼在本文中稱為MU-11E12-VH的可變重鏈序列的核苷酸序列;
[0123]SEQ ID NO:36是編碼在本文中稱為MU-19D07-VL的可變輕鏈序列的核苷酸序列;
[0124]SEQ ID NO:37是編碼在本文中稱為MU-19D07-VH的可變重鏈序列的核苷酸序列;
[0125]SEQ ID NO:38是編碼在本文中稱為MU-34D03-VL的可變輕鏈序的核苷酸序列;
[0126]SEQ ID NO:39是編碼在本文中稱為MU-34D03-VH的可變重鏈序列的核苷酸序列;
[0127]SEQ ID NO:40是在本文中稱為HC-64的犬重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列(GenBank登錄號(hào) AF354264);
[0128]SEQ ID NO:41是編碼在本文中稱為HC-64的犬重鏈恒定區(qū)的核苷酸序列(GenBank 登錄號(hào) AF354264);
[0129]SEQ ID NO:42是在本文中稱為HC-65的犬重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列(GenBank登錄號(hào) AF354265);
[0130]SEQ ID N0:43是編碼在本文中稱為HC-65的犬重鏈恒定區(qū)的核苷酸序列(GenBank 登錄號(hào) AF354265);
[0131]SEQ ID NO:44是在本文中稱為kappa的犬輕鏈恒定區(qū)的氨基酸序列(GenBank登錄號(hào) XP_532962);
[0132]SEQ ID NO:45是編碼稱為kappa的犬輕鏈恒定區(qū)的核苷酸序列(GenBank登錄號(hào)XP_532962);
[0133]SEQ ID NO:46是編碼在本文中稱為CAN-19D07-VL-998-1的可變輕鏈序列的核苷酸序列;
[0134]SEQ ID NO:47是編碼在本文中稱為CAN-19D07-VH-998-1的可變重鏈序列的核苷酸序列;
【權(quán)利要求】
1.特異性結(jié)合到犬IL-31或貓IL-31中的至少一種上的分離的抗體。
2.權(quán)利要求1的抗體,其中所述抗體是單克隆抗體。
3.權(quán)利要求2的抗體,其中所述抗體是嵌合的。
4.權(quán)利要求2的抗體,其中所述抗體是犬源化的或貓?jiān)椿摹?br>
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的抗體,其中所述抗體減輕、抑制或中和狗或貓?bào)w內(nèi)的IL-31活性。
6.權(quán)利要求5的抗體,其中所述抗體減輕、抑制或中和瘙癢癥或過敏癥。
7.如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分,其包含以下的至少一個(gè): 具有以下氨基酸序列的可變重(Vh)鏈互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)1 =YYDIN (SEQ ID NO:1 ;11E12-VH-CDR1),SYDMS(SEQ ID NO: 2 ;19D07-VH-CDR1)或 NYGMS(SEQ ID N0:3 ;34D03-VH-CDR1); 具有以下氨基酸序列的可變重鏈⑶R2:WIFP⑶GGTKYNETFKG(SEQ ID NO:4 ;11E12-VH-CDR2), TITSGGGYTYSADSVKG(SEQ ID NO: 5 ; 19D07-VH-CDR2)或TISYGGSYTYYPDNIKG(SEQ ID N0:6 ;34D03-VH_CDR2); 具有以下氨基酸序列的可變重鏈⑶R3:ARGGTSVIRDAMDY(SEQ ID NO:7 ;11E12-VH-CDR3),ARQNWWGLAY(SEQ ID NO:8 ; 19D07-VH-CDR3)或 VRGYGYDTMDY(SEQ IDNO: 9 ;34D03-VH-CDR3);以及 其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
8.如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分,包含以下的至少一個(gè): 包含具有以下氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) I的可變輕(\)鏈:RASESVDNYGISFMH(SEQ ID NO:10 ;11E12-VL_CDR1), KSSQSLLNSGNQKNYLA(SEQ ID NO:11;19D07-VL-CDR1)或 KASQSVSFAGTGLMH(SEQ ID NO:12 ;34D03-VL_CDR1); 具有以下氨基酸序列的可變輕鏈CDR2:RASNLES(SEQ ID NO: 13 ;11E12-VL-CDR2),GASTRES(SEQ ID NO:14 ; 19D07-VL-CDR2)或 RASNLEA(SEQ ID NO:15 ;34D03-VL_CDR2); 具有以下氨基酸序列的可變輕鏈⑶R3:QQSNKDPLT(SEQ ID NO: 16 ;11E12-VL_CDR3),QNDYSYPYT(SEQ ID NO: 17; 19D07-VL-CDR3)或QQSREYPWT(SEQ ID NO: 18 ;34D03-VL_CDR3);以及 其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
9.權(quán)利要求8的抗體,進(jìn)一步包括以下的至少一個(gè): 具有以下氨基酸序列的可變重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) I =YYDIN(SEQ ID NO:1 ;11E12-VH-CDR1),SYDMS(SEQ ID NO: 2 ;19D07-VH-CDR1)或 NYGMS(SEQ ID NO:3 ;34D03-VH-CDR1); 具有以下氨基酸序列的可變重鏈⑶R2:WIFP⑶GGTKYNETFKG(SEQ ID NO:4 ;11E12-VH-CDR2), TITSGGGYTYSADSVKG(SEQ ID NO: 5 ; 19D07-VH-CDR2)或TISYGGSYTYYPDNIKG(SEQ ID NO:6 ;34D03-VH_CDR2); 具有以下氨基酸序列的可變重鏈⑶R3:ARGGTSVIRDAMDY(SEQ ID NO:7 ;11E12-VH-CDR3),ARQNWWGLAY(SEQ ID NO:8 ;19D07-VH_CDR3)或 VRGYGYDTMDY(SEQ IDN0:9 ;34D03-VH-CDR3);以及 其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
10.權(quán)利要求9的抗體,包含以下的至少一個(gè): a)可變輕鏈,包含:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMHWYQQKPGQPPKLL IYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVETDDVATYYCQQSNKDPLTFG AGTKLELK(SEQ ID NO: 19 ;MU-11E12_VL),DIVMTQTPLSLSVSPGEPASISCRASESVDNYGISFMHWYQQKPGQPPKLL IYRASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEADDAGVYYCQQSNKDPLTF GAGTKLEIK (SEQ ID NO:20 ;CAN-llE12-VL-cUn-FW2),DIVMTQTPLSLSVSPGEPASISCRASESVDNYGISFMHWFQQKPGQSPQLLI YRASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEADDAGVYYCQQSNKDPLTF GAGTKLEIK(SEQ ID NO:21 ;CAN-llE12-VL-cUn-13),DIVMSQSPSSLSVSAGDKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPWQP PKLLIYGASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSY PYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:22 ;MU-19D07-VL),
EIVMTQSPASLSLSQEEKVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPGQAP KLLIYGASTRESGVPSRFSGSGSGTDFSFTISSLEPEDVAVYYCQNDYSYPY TFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:23 ;CAN-19D07-VL-998-l),DILLTQSPASLAVSLGQRAIISCKASQSVSFAGTGLMHWYQQKPGQQPKLL IYRASNLEAGVPTRFSGSGSRTDFTLNIHPVEEEDAATYFCQQSREYPffTF GGGTKLEIK(SEQ ID NO:24 ;MU-34D03_VL),或
EIVMTQSPASLSLSQEEKVTITCKASQSVSFAGTGLMHWYQQKPGQAPKL LIYRASNLEAGVPSRFSGSGSGTDFSFTISSLEPEDVAVYYCQQSREYPWTF GQGTKLEIK(SEQ ID NO:25 ;CAN-34D03-VL-998-l); b)可變重鏈,包含:QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFKYYDINWVRQRPEQGLEWIG WIFP⑶GGTKYNETFKGKATLTTDKSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARG GTSVIRDAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:26 ;MU-11E12_VH),EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFKYYDINWVRQAPGAGLDWM GffIFPGDGGTKYNETFKGRVTLTADTSTSTAYMELSSLRAGDIAVYYCAR GGTSVIRDAMDYffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27;CAN-11E12-VH-415-1),
EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSSYDMSWVRQIPEKRLEWVAT ITSGGGYTYSADSVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLRSEDTAVYYCARQN WVVGLAYffGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:28 ;MU-19D07-VH),EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLQWVA TITSGGGYTYSADSVKGRFTISRDNARNTLYLQMNSLRSEDTAVYYCARQ NffVVGLAYffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:29 ;CAN-19D07-VH-400-1), EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFSFSNYGMSWVRQTPDKRLEWVA TISYGGSYTYYPDNIKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCVRG YGYDTMDYffGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:30 ;MU-34D03-VH),或 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSNYGMSWVRQAPGKGLQWVA TISYGGSYTYYPDNIKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAMYYCVRG YGYDTMDYffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:31;CAN-34D03-VH-568-1);和 c)其具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
11.包含治療有效量的如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的抗體的獸用組合物。
12.制造如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的抗體的宿主細(xì)胞。
13.包含編碼下列至少一種的核酸序列的分離的核酸: 具有以下氨基酸序列的可變重(Vh)鏈互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)1 =YYDIN(SEQ ID NO:1 ;11E12-VH-CDR1),SYDMS(SEQ ID NO: 2 ;19D07-VH-CDR1)或 NYGMS(SEQ ID N0:3 ;34D03-VH-CDR1); 具有以下氨基酸序列的可變重鏈⑶R2:WIFP⑶GGTKYNETFKG(SEQ ID NO:4 ;11E12-VH-CDR2), TITSGGGYTYSADSVKG(SEQ ID NO: 5 ; 19D07-VH-CDR2)或TISYGGSYTYYPDNIKG(SEQ ID N0:6 ;34D03-VH_CDR2); 具有以下氨基酸序列的可變重鏈⑶R3:ARGGTSVIRDAMDY(SEQ ID NO:7 ;11E12-VH-CDR3),ARQNWWGLAY(SEQ ID N0:8 ;19D07-VH_CDR3)或 VRGYGYDTMDY(SEQ IDN0:9 ;34D03-VH-CDR3);以及 其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
14.權(quán)利要求13的核酸,進(jìn)一步包含編碼下列至少一種的核酸序列: 包含具有以下氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) I的可變輕(')鏈:RASESVDNYGISFMH(SEQ ID NO:10 ;11E12-VL_CDR1),KSSQSLLNSGNQKNYLA(SEQ ID NO:11 ;19D07-VL-CDR1)或 KASQSVSFAGTGLMH(SEQ ID NO:12 ;34D03-VL_CDR1); 具有以下氨基酸序列的可變輕鏈CDR2:RASNLES(SEQ ID NO: 13 ;11E12-VL_CDR2),GASTRES(SEQ ID NO:14 ; 19D07-VL-CDR2)或 RASNLEA(SEQ ID NO: 15 ;34D03-VL_CDR2);具有以下氨基酸序列的可變輕鏈⑶R3:QQSNKDPLT(SEQ ID NO: 16 ;11E12-VL_CDR3),QNDYSYPYT (SEQ ID NO: 17 ; 19D07-VL-CDR3)或QQSREYPWT (SEQ ID NO: 18 ;34D03-VL_CDR3);以及 其在⑶Rl、⑶R2或⑶R3的至少一個(gè)中具有一個(gè)或多個(gè)保守氨基酸替換的變體。
15.包含權(quán)利要求13或權(quán)利`要求14的核酸的載體。
16.制造抗體的方法,包括在導(dǎo)致產(chǎn)生該抗體的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求12的宿主細(xì)胞,并從該宿主細(xì)胞或該宿主細(xì)胞的培養(yǎng)介質(zhì)中分離該抗體。
17.治療癥狀或疾病的方法,所述癥狀或疾病選自瘙癢癥或過敏癥,包括施用治療有效量的如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的抗體。
18.權(quán)利要求17的方法,其中所述瘙癢癥選自特異性皮炎、濕疹、牛皮癬、硬皮病和瘙癢。
19.權(quán)利要求17的方法,其中所述過敏癥選自變態(tài)反應(yīng)性皮炎、夏季濕疹、蕁麻疹、馬喘息病、氣道炎癥性疾病、復(fù)發(fā)性氣道阻塞、氣道高反應(yīng)性、慢性阻塞性肺疾病和自身免疫引起的炎癥過程。
20.通過使用如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的抗體抑制狗或貓?bào)w內(nèi)的IL-31活性的方法。
21.檢測(cè)或定量樣品中IL-31的方法,該方法包括: (a)在如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的抗體的存在下培養(yǎng)含有IL-31的臨床或生物樣品;并 (b)檢測(cè)結(jié)合到該樣品中的IL-31上的抗體。
22.權(quán)利要求21的方法,其中可檢測(cè)地標(biāo)記所述抗體。
23.權(quán)利要求21的方法,其中所述抗體是未標(biāo)記的,并與標(biāo)記過的第二抗體組合使用。
24.如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的抗體,其特異性結(jié)合到SEQID NO:32的犬IL-31氨基酸序列的大約氨基酸殘基95位至125位之間的區(qū)域或貓IL-31中的相應(yīng)區(qū)域上。
25.權(quán)利要求24的抗體,其中該抗體特異性結(jié)合到SEQ ID NO: 32的犬IL-31氨基酸序列的大約氨基酸殘基102位至12 2位之間的區(qū)域或貓IL-31中的相應(yīng)區(qū)域上。
【文檔編號(hào)】C07K16/24GK103890009SQ201280046131
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2012年7月5日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月21日
【發(fā)明者】G.F.巴莫特, S.A.敦哈姆 申請(qǐng)人:佐蒂斯有限責(zé)任公司