使用pd-1軸結(jié)合拮抗劑和mek抑制劑治療癌癥的方法
【專利摘要】本發(fā)明描述了包含PD-1軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑的聯(lián)合治療及其使用方法，包括治療期望增強(qiáng)的免疫原性的狀況（諸如提高腫瘤免疫原性以治療癌癥）的方法。
【專利說明】使用PD-1軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑治療癌癥的方法
[0001]對相關(guān)申請的交叉引用
[0002]本申請要求2011年8月I日提交的美國臨時申請流水號61/574，406的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，其內(nèi)容通過提及完整收入本文。
[0003]發(fā)明背景
[0004]對T細(xì)胞提供兩種截然不同的信號是一種關(guān)于抗原呈遞細(xì)胞(APC)對靜息T淋巴細(xì)胞的淋巴細(xì)胞活化的廣泛公認(rèn)的模型。Lafferty等，Aust.J.Exp.Biol.Med.ScL53:27-42 (1975)。此模型進(jìn)一步提供了自身與非自身的辨別和免疫耐受性。Bretscher等，Sciencel69:1042-1049(1970) ；Bretscher, P.A., P.N.A.S.USA96:185-190(1999)；Jenkins等，J.Exp.Med.165:302-319(1987)。在主要組織相容性復(fù)合體(MHC)的背景中呈遞的外來抗原肽的識別后，第一信號，或抗原特異性信號經(jīng)由T細(xì)胞受體(TCR)轉(zhuǎn)導(dǎo)。第二或共刺激信號通過抗原呈遞細(xì)胞(APC)上表達(dá)的共刺激分子投遞至T細(xì)胞，并且誘導(dǎo)T細(xì)胞以促進(jìn)克隆擴(kuò)充，細(xì)胞因子分泌和效應(yīng)器功能。Lenschow等，Ann.Rev.1mmunol.14:233(1996)。在缺乏共刺激的情況中，T細(xì)胞能對抗原刺激變得不應(yīng)，不發(fā)起有效的免疫應(yīng)答，并且進(jìn)一步可以導(dǎo)致對外來抗原的耐受性或耗竭。
[0005]在兩信號模型中，T細(xì)胞接受正和負(fù)第二共刺激信號兩者。此類正和負(fù)信號的調(diào)節(jié)對于在維持免疫耐受性和防止自身免疫的同時使宿主的保護(hù)性免疫應(yīng)答最大化是至關(guān)重要的。負(fù)第二信號對于誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受性似乎是必需的，而正信號促進(jìn)T細(xì)胞活化。雖然簡單的兩信號模型仍然為未免疫淋巴細(xì)胞提供有效解釋，但是宿主的免疫應(yīng)答是一個動態(tài)過程，并且也可以對抗原暴露的T細(xì)胞提供共刺激信號。共刺激的機(jī)制是治療學(xué)方面感興趣的，因為已經(jīng)顯示了共刺 激信號的操作提供增強(qiáng)或終止基于細(xì)胞的免疫應(yīng)答的手段。最近，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了 T細(xì)胞功能障礙或無反應(yīng)性與抑制性受體(編程性死亡I多肽(PD-1))的誘導(dǎo)且持續(xù)的表達(dá)并行發(fā)生。因此，PD-1和經(jīng)由與ro-1的相互作用發(fā)信號的其它分子，諸如編程性死亡配體I (ro-Ll)和編程性死亡配體2(ro-L2)的治療性靶向是強(qiáng)烈感興趣的領(lǐng)域。
[0006]PD-Ll在許多癌癥中過表達(dá),并且經(jīng)常與不良預(yù)后關(guān)聯(lián)(Okazaki T等，Intern.1mmun.2007, 19(7): 813; Thompson RH 等，Cancer Res2006, 66 (7): 3381)。令人感興趣地，與正常組織中的T淋巴細(xì)胞和外周血T淋巴細(xì)胞形成對比，大多數(shù)腫瘤浸潤性T淋巴細(xì)胞主要表達(dá)F1D-1,這指示腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞上F1D-1的上調(diào)可以促成受損的抗腫瘤免疫應(yīng)答(Blood2009114(8):1537)。這可以是由于利用由與TO-1表達(dá)T細(xì)胞相互作用的TO-Ll表達(dá)腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的I3D-Ll信號傳導(dǎo)以導(dǎo)致T細(xì)胞活化的減弱及逃避免疫監(jiān)視(Sharpe等，NatRev2002) (Keir ME 等，2008Annu.Rev.1mmunol.26:677)。因此，對 PD-LI/PD-1 相互作用的抑制可以增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷。
[0007]已經(jīng)提出經(jīng)由其直接配體(例如ro-Ll，PD-L2)抑制H)_l軸信號傳導(dǎo)為增強(qiáng)T細(xì)胞免疫以治療癌癥(例如腫瘤免疫)的手段。此外，已經(jīng)通過抑制ro-Ll與結(jié)合配偶B7-1的結(jié)合觀察到對T細(xì)胞免疫的類似增強(qiáng)。此外，對ro-1信號傳導(dǎo)與在腫瘤細(xì)胞中脫調(diào)節(jié)的其它信號傳導(dǎo)途徑(例如MAPK途徑，“MEK”)的組合抑制可以進(jìn)一步增強(qiáng)治療功效。然而，最佳的治療性處理會組合ro-ι受體/配體相互作用的阻斷與直接抑制腫瘤生長的藥劑，任選地進(jìn)一步包括單獨的ro-1阻斷沒有提供的獨特免疫增強(qiáng)特性。仍然需要用于治療各種癌癥，穩(wěn)定化各種癌癥，預(yù)防各種癌癥，和/或延遲各種癌癥形成的此類最佳療法。
[0008]在此通過提及將本文中公開的所有參考文獻(xiàn)，出版物，和專利申請完整收錄。
[0009]發(fā)明概述
[0010]本發(fā)明描述了聯(lián)合治療，其包含MEK抑制劑(其具有直接的腫瘤靶向效果和免疫增強(qiáng)特性)和ro-1軸結(jié)合拮抗劑。
[0011]本文中提供了在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展的方法，其包括對所述個體施用有效量的ro-1軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑。[0012]本文中還提供了 ro-Ι軸結(jié)合拮抗劑在制造藥物中的用途，所述藥物用于與MEK抑制劑組合在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展。本文中還提供了 MEK抑制劑在制造藥物中的用途，所述藥物用于與ro-ι軸結(jié)合拮抗劑組合在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展。本文中還提供了 ro-ι軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑在制造藥物中的用途，所述藥物用于在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展。本文中還提供了用于在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展的藥物的制造方法，其特征在于使用ro-1軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑。本文中還提供了 ro-1軸結(jié)合拮抗劑，其用于與MEK抑制劑組合在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展。本文中還提供了MEK抑制劑，其用于與ro-1軸結(jié)合拮抗劑組合在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展。
[0013]治療的癌癥可以含有BRAF V600E突變、BRAF野生型、KRAS野生型、或活化性KRAS突變。癌癥可以是黑素瘤、結(jié)腸直腸癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、血液學(xué)惡性(malignancy)或腎細(xì)胞癌。癌癥可以為早期階段或晚期階段。在一些實施方案中，治療的個體是人。
[0014]在一些實施方案中，治療導(dǎo)致停止治療后個體中持續(xù)的應(yīng)答。在一些實施方案中，治療在個體中產(chǎn)生完全應(yīng)答，部分應(yīng)答，或穩(wěn)定疾病。
[0015]本文中還提供了在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能的方法，其包括施用有效量的PD-1軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑。在一些實施方案中，個體是人。
[0016]本文中還提供了 ro-Ι軸結(jié)合拮抗劑在制造藥物中的用途，所述藥物用于與MEK抑制劑組合在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能。本文中還提供了 MEK抑制劑在制造藥物中的用途，所述藥物用于與ro-1軸結(jié)合拮抗劑組合在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能。本文中還提供了 I3D-1軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑在制造藥物中的用途，所述藥物用于在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能。本文中還提供了用于在個體中增強(qiáng)免疫功能的藥物的制造方法，其特征在于使用ro-ι軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑。本文中還提供了 ro-1軸結(jié)合拮抗劑，其用于與MEK抑制劑組合在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能。本文中還提供了 MEK抑制劑，其用于與ro-ι軸結(jié)合拮抗劑組合在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能。在一些實施方案中，個體是人。
[0017]在一些實施方案中，PD-1軸結(jié)合拮抗劑是ro-Ι結(jié)合拮抗劑，PD-Ll結(jié)合拮抗劑或PD-L2結(jié)合拮抗劑。在一些實施方案中，PD-1結(jié)合拮抗劑抑制ro-1與ro-Ll的結(jié)合和/或PD-1與ro-L2的結(jié)合。在一些實施方案中，PD-1結(jié)合拮抗劑是抗體(例如本文中描述的抗體MDX-1106，CT-Oll和Merck3745)，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。在一些實施方案中，PD-1結(jié)合拮抗劑是包含與Fe域融合的H)-L2胞外域的免疫粘附素(例如本文中描述的AMP-224)。在一些實施方案中，PD-Ll結(jié)合拮抗劑抑制I3D-Ll與TO-1的結(jié)合和/或ro-Ll與B7-1的結(jié)合。在一些實施方案中，PD-Ll結(jié)合拮抗劑是抗體(例如本文中描述的抗體YW243.55.S70、MPDL3280A和MDX-1105)，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。在一些實施方案中，PD-L2結(jié)合拮抗劑抑制ro-L2與ro-1的結(jié)合。在一些實施方案中，PD-L2結(jié)合拮抗劑是抗體，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。
[0018]在一些實施方案中，MEK抑制劑是如下文描述的式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、或(VI)的化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或溶劑合物。
[0019]在一些實施方案中，MEK抑制劑是競爭性MEK抑制劑。在一些實施方案中，MEK抑制劑針對活化性KRAS突變更有選擇性。在一些實施方案中，MEK抑制劑是變構(gòu)性MEK抑制劑。在一些實施方案中，MEK抑制劑針對活化性BRAF突變更有選擇性。在一些實施方案中，MEK 抑制劑選自下組:G02442104，G-38963，G02443714, G00039805，和⑶C-0973，或其藥學(xué)可接受鹽或溶劑合物。
[0020]在一些實施方案中，連續(xù)或間歇施用MEK抑制劑。在一些實施方案中，在施用ro-1軸結(jié)合拮抗劑前，與施用ro-1軸結(jié)合拮抗劑同時，或在施用ro-1軸結(jié)合拮抗劑后施用MEK抑制劑。在一些實施方案中，以不同劑量給藥頻率施用MEK抑制劑和ro-1軸結(jié)合拮抗劑。 [0021]在另一個方面，提供了包含ro-1軸結(jié)合拮抗劑和/或MEK抑制劑的試劑盒，其用于在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展或者在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能。試劑盒可以包含ro-1軸結(jié)合拮抗劑和包裝插頁，該包裝插頁包含關(guān)于與MEK抑制劑組合使用ro-1軸結(jié)合拮抗劑在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展或在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能的用法說明書。試劑盒可以包含MEK抑制劑和包裝插頁，該包裝插頁包含關(guān)于與ro-1軸結(jié)合拮抗劑組合使用MEK抑制劑在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展或在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能的用法說明書。試劑盒可以包含ro-ι軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑，及包裝插頁，該包裝插頁包含關(guān)于使用ro-ι軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展或在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能的用法說明書。
[0022]附圖簡述
[0023]圖1顯示了用MEK抑制劑處理后黑素瘤和結(jié)腸直腸腫瘤細(xì)胞系上增強(qiáng)的MHC I表面表達(dá)。(A)顯示用MEK抑制劑處理的人腫瘤細(xì)胞系的表面上升高的MHC I表達(dá)的直方圖。(B)顯示用MEK抑制劑處理的小鼠腫瘤細(xì)胞系的表面上升高的MHC I表達(dá)的直方圖。
[0024]圖2的直方圖顯示了用BRAF抑制劑處理人黑素瘤細(xì)胞系(其中5/8的細(xì)胞系是BRAF突變體；BRAF野生型細(xì)胞用星號標(biāo)示)沒有上調(diào)MHC I表面表達(dá)。
[0025]圖3顯示了用MEK抑制劑處理人外周血單個核細(xì)胞沒有上調(diào)MHC I表面表達(dá)。(A-D)顯示MEK抑制劑處理后⑶4+T細(xì)胞，⑶8+T細(xì)胞，B細(xì)胞，或單核細(xì)胞中未改變的MHCI表面表達(dá)的直方圖。
[0026]圖4表明盡管有MEK抑制劑處理，共刺激信號使T細(xì)胞變?yōu)轫憫?yīng)性。(A)⑶8+T細(xì)胞水平的圖顯示了 MEK抑制劑處理降低正常情況下通過⑶3刺激誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖和活化。⑶⑶8+T細(xì)胞的圖顯示了⑶3和⑶28的共刺激足以克服MEK抑制劑處理的抑制效應(yīng)。
[0027]圖5顯示了 MEK抑制劑處理增強(qiáng)用抗⑶40抗體刺激的樹突細(xì)胞成熟和活化。(A-C)顯示用抗CD40抗體刺激且用MEK或BRAF抑制劑處理的樹突細(xì)胞的直方圖。MEK抑制劑增強(qiáng)DC活化，如通過DC表面活化標(biāo)志物⑶83，MHC II和⑶86的上調(diào)證明的。(D-F)活化的樹突細(xì)胞水平的圖表明MEK抑制劑以劑量依賴性方式增強(qiáng)DC活化。[0028]圖6的圖顯示了癌癥體內(nèi)模型中免疫抑制性和促腫瘤性細(xì)胞因子的降低的血清水平。(A和C)與僅用抗ro-Ll或MEK抑制劑處理的處理相比，免疫抑制性細(xì)胞因子IL-10在用抗ro-Ll抗體和MEK抑制劑共處理后7天降低。(B和D)與僅用抗I3D-Ll或MEK抑制劑處理的處理相比，促腫瘤性細(xì)胞因子KC在用抗I3D-Ll抗體和MEK抑制劑共處理后降低。
[0029]圖7表明MEK抑制劑處理在結(jié)腸直腸癌體內(nèi)模型中增強(qiáng)抗I3D-Ll抗體的抗腫瘤活性。(A)描繪在抗ro-Ll抗體和MEK抑制劑共處理的情況中腫瘤體積變化的圖表明與僅抗PD-Ll抗體或MEK抑制劑處理相比顯著的早期階段腫瘤生長降低和持續(xù)的抗腫瘤效應(yīng)。(B)描繪在抗ro-Ll抗體和MEK抑制劑共處理的情況中腫瘤體積變化的圖表明與僅抗ro-Ll抗體或MEK抑制劑處理相比顯著的晚期階段腫瘤生長降低。
[0030]圖8是一系列圖，其表明MEK抑制劑劑量在與抗I3D-Ll抗體組合使用以治療結(jié)腸直腸癌體內(nèi)模型時更有效。(A)描繪在漸增劑量的MEK抑制劑GDC-0973處理的情況中腫瘤體積降低的圖。(B)描繪與不同劑量的MEK抑制劑GDC-0973組合施用抗TO-Ll抗體后腫瘤體積降低的圖。mpk表示毫克每千克(mg/kg)。
[0031]圖9的圖表明用MEK抑制劑G02443714的處理在結(jié)腸直腸癌體內(nèi)模型中增強(qiáng)抗PD-Ll抗體的抗腫瘤活性。與僅用 抗I3D-Ll抗體或MEK抑制劑G02443714的處理相比，在抗PD-Ll抗體和MEK抑制劑聯(lián)合治療的情況中觀察到增強(qiáng)的腫瘤體積降低。
[0032]圖10的圖表明用MEK抑制劑G02442104的處理在結(jié)腸直腸癌體內(nèi)模型中增強(qiáng)抗PD-Ll抗體的抗腫瘤活性。與僅用抗ro-Ll抗體或MEK抑制劑G02442104的處理相比，在抗PD-Ll抗體和MEK抑制劑聯(lián)合治療的情況中觀察到增強(qiáng)的腫瘤體積降低。
[0033]圖11的圖表明用MEK抑制劑G00039805的處理在結(jié)腸直腸癌體內(nèi)模型中增強(qiáng)抗PD-Ll抗體的抗腫瘤活性。與僅用抗ro-Ll抗體或MEK抑制劑G00039805的處理相比，在抗PD-Ll抗體和MEK抑制劑聯(lián)合治療的情況中觀察到增強(qiáng)的腫瘤體積降低。
[0034]圖12表明MEK抑制劑處理在黑素瘤體內(nèi)模型中增強(qiáng)抗I3D-Ll抗體的抗腫瘤活性。(A和B)描繪在抗ro-Ll抗體和MEK抑制劑共處理的情況中腫瘤體積變化的圖表明與僅抗PD-Ll抗體或MEK抑制劑處理相比顯著降低的腫瘤生長。
[0035]圖13的圖表明用抗I3D-Ll抗體和化療劑Temodar的共處理沒有降低黑素瘤體內(nèi)模型中的腫瘤生長。因此，MEK抑制劑和抗ro-Ll抗體的抗腫瘤效果是特異性的。
[0036]圖14的圖表明用抗0X40抗體和MEK抑制劑的共處理沒有降低體內(nèi)結(jié)腸直腸模型中的腫瘤生長。因此，MEK抑制劑和抗ro-Ll抗體的抗腫瘤效果是特異性的。
[0037]圖15含有幾幅圖，其顯示了 MEK抑制劑提高樹突細(xì)胞活化，這不依賴于抗I3D-Ll抗體處理。(A)表明抗ro-Ll抗體處理略微提高M(jìn)HC I表面表達(dá)的圖。MEK抑制劑處理顯著增強(qiáng)MHC I表達(dá)，然而，與抗I3D-Ll抗體共處理沒有增強(qiáng)MEK抑制劑處理的效果。(B-D)表明抗I3D-Ll抗體處理沒有提高樹突細(xì)胞活化標(biāo)志物MHC II，⑶80，和⑶86表達(dá)的圖。比較而言，MEK抑制劑處理顯著增強(qiáng)樹突細(xì)胞活化標(biāo)志物的表達(dá)。與抗ro-Li抗體共處理沒有增強(qiáng)MEK抑制劑處理的效果。(E-H)表明用抗CD40抗體刺激樹突細(xì)胞沒有改變MEK抑制劑和抗I3D-Ll共處理對樹突細(xì)胞活化的影響的圖。
[0038]發(fā)明詳述
[0039]1.通用技術(shù)
[0040]本文中描述或提及的技術(shù)和規(guī)程是本領(lǐng)域技術(shù)人員一般充分了解且通常采用的，其使用常規(guī)方法，諸如例如廣泛利用的方法進(jìn)行，該方法記載于Sambrook等，MolecularCloning:A Laboratory Manual3d edition(2001)Cold Spring Harbor LaboratoryPress,Cold Spring Harbor,N.Y.;Current Protocols in Molecular Biology (F.M.Ausubel 等編，(2003));叢刊 Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.):PCR2:APractical Approach (M.J.MacPhersonj B.D.Hames and G.R.Taylor 編(1995))，Harlow和 Lane 編(1988)Antibodies, A Laboratory Manual,and Animal Cell Culture(R.1.Freshney 編(1987))；
[0041]Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait 編，1984) ；Methods in MolecularBiology, Humana Press;Cell Biology: A Laboratory Notebook(J.E.Cellis 編，1998)Academic Press;Animal Cell Culture(R.1.Freshney)編，1987);Introduction toCell and Tissue Culture (J.P.Mather 和 Ρ.Ε.Roberts，1998)Plenum Press;Cell andTissue Culture: Laboratory Procedures (A.Doyle,J.B.Griffiths,和 D.G.Newell編,1993-8)J.Wiley and Sons;Handbook of Experimental Immunology (D.M.Weir 和 C.C.Blackwell 編);Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M.Miller 和 Μ.P.Calos 編，1987);PCR:The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等編，1994);Current Protocols in Immunology (J.E.Coligan 等編，1991);ShortProtocols in Molecular Biology (Wi ley 和 Sons，1999) ;Immunobiology (C.A.Janeway 和 P.Travers，1997);Antibodies(P.Finch，1997);Antibodies:A PracticalApproach(D.Catty.編，IRL Press,1988-1989);Monoclonal Antibodies:A PracticalApproach(P.Shepherd 和 C.Dean 編，Oxford University Press，2000) ;UsingAntibodies:A Laboratory Manual (E.Harlow 和 D.Lane(Cold SpringHarbor LaboratoryPress, 1999) ;The Antibodies (M.Zanetti 和 J.D.Capra 編，Harwood AcademicPublishers,1995); Cancer!Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVita 等編，J.Β.Lippincott Company, 1993)。
[0042]I1.定義
[0043]術(shù)語“PD-1軸結(jié)合拮抗劑”是一種抑制ro-1軸結(jié)合配偶與一種或多種其結(jié)合配偶的相互作用，使得消除源自ro-1信號傳導(dǎo)軸上的信號傳導(dǎo)的τ細(xì)胞功能障礙(結(jié)果是恢復(fù)或增強(qiáng)T細(xì)胞功能(例如增殖、細(xì)胞因子生成、靶細(xì)胞殺傷))的分子。如本文中使用的，PD-1軸結(jié)合拮抗劑包括ro-l結(jié)合拮抗 劑、PD-Ll結(jié)合拮抗劑和ro-L2結(jié)合拮抗劑。
[0044]術(shù)語“PD-1結(jié)合拮抗劑”是一種降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自ro-1與一種或多種其結(jié)合配偶，諸如ro-Ll，PD-L2的相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。在一些實施方案中，PD-1結(jié)合拮抗劑是一種抑制ro-Ι與其結(jié)合配偶結(jié)合的分子。在一個具體的方面，PD-1結(jié)合拮抗劑抑制ro-ι與ro-Ll和/或ro-L2的結(jié)合。例如，pd-1結(jié)合拮抗劑包括降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自ro-1與ro-Li和/或ro-L2相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗ro-1抗體、其抗原結(jié)合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽和其它分子。在一個實施方案中，pd-1結(jié)合拮抗劑降低負(fù)共剌激信號，從而使功能障礙τ細(xì)胞不太有功能障礙(例如增強(qiáng)對抗原識別的效應(yīng)器應(yīng)答)，所述負(fù)共剌激信號經(jīng)由ro-1由或經(jīng)由τ淋巴細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)介導(dǎo)。在一些實施方案中，ro-1結(jié)合拮抗劑是抗ro-1抗體。在一個具體的方面，PD-1結(jié)合拮抗劑是本文中描述的MDX-1106。在另一個具體的方面，PD-1結(jié)合拮抗劑是本文中描述的Merck3745。在另一個具體的方面，PD-1結(jié)合拮抗劑是本文中描述的CT-011。
[0045]術(shù)語“PD-L1結(jié)合拮抗劑”是一種降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自PD-Ll與一種或多種其結(jié)合配偶，諸如ro-1，B7-1的相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。在一些實施方案中，PD-Ll結(jié)合拮抗劑是抑制ro-Ll與其結(jié)合配偶結(jié)合的分子。在一個具體的方面，PD-Ll結(jié)合拮抗劑抑制ro-Ll與ro-1和/或B7-1的結(jié)合。在一些實施方案中，PD-Ll結(jié)合拮抗劑包括降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自PD-Ll與一種或多種其結(jié)合配偶，諸如ro-l，B7-l的相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗ro-Ll抗體，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一個實施方案中，PD-Ll結(jié)合拮抗劑降低負(fù)共刺激信號，從而使功能障礙T細(xì)胞不太有功能障礙(例如增強(qiáng)對抗原識別的效應(yīng)器應(yīng)答)，所述負(fù)共刺激信號經(jīng)由ro-Ll由或經(jīng)由T淋巴細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)介導(dǎo)。在一些實施方案中，PD-Ll結(jié)合拮抗劑是抗ro-Ll抗體。在一個具體的方面，抗ro-Ll抗體是本文中描述的YW243.55.S70。在另一個具體的方面，抗ro-Ll抗體是本文中描述的MDX-1105。在又一個具體的方面，抗ro-Ll抗體是本文中描述的MPDL3280A。
[0046]術(shù)語“PD-L2結(jié)合拮抗劑”是一種降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自PD-L2與一種或多種其結(jié)合配偶，諸如ro-1的相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。在一些實施方案中，PD-L2結(jié)合拮抗劑是抑制H)-L2與其結(jié)合配偶結(jié)合的分子。在一個具體的方面，PD-L2結(jié)合拮抗劑抑制ro-L2與ro-ι的結(jié)合。在一些實施方案中，PD-L2拮抗劑包括降低、阻斷、抑制、消除或干擾源自PD-L2 一種或多種其結(jié)合配偶，諸如ro-1的相互作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗ro-L2抗體，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一個實施方案中，PD-L2結(jié)合拮抗劑降低負(fù)共刺激信號，從而使功能障礙T細(xì)胞不太有功能障礙(例如增強(qiáng)對抗原識別的效應(yīng)器應(yīng)答)，所述負(fù)共刺激信號經(jīng)由ro-L2由或經(jīng)由T淋巴細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面蛋白介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)介導(dǎo)。在一些實施方案中，PD-L2結(jié)合拮抗劑是免疫粘附素。
[0047]術(shù)語“功能障礙”在免疫功能障礙的背景中指降低的對抗原性刺激的免疫響應(yīng)性的狀態(tài)。該術(shù)語包括可以發(fā)生抗原識別，但是隨后的免疫應(yīng)答對于控制感染或腫瘤生長無效的耗竭和/或無反應(yīng)性兩者的共同要素。
[0048]如本文中使用的，術(shù)語“功能障礙”還包括對抗原識別的不感受或不響應(yīng)，特別地，將抗原識別轉(zhuǎn)化成下游T細(xì)胞效應(yīng)器功能，諸如增殖，細(xì)胞因子生成(例如IL-2)和/或靶細(xì)胞殺傷的能力受損。
[0049]術(shù)語“無反應(yīng)性”指源自經(jīng)由T細(xì)胞受體投遞的不完全或不充分信號(例如在缺乏ras活化的情況中胞內(nèi)Ca+2增加)的對抗原刺激的無響應(yīng)性狀態(tài)。T細(xì)胞無反應(yīng)性也可以在缺乏共刺激的情況中在用抗原刺激后發(fā)生，生成即使在共刺激的背景中對抗原的隨后活化變得不感受的細(xì)胞。無響應(yīng)性狀態(tài)經(jīng)常可以被白介素-2的存在超越。無反應(yīng)性T細(xì)胞不經(jīng)歷克隆擴(kuò)充和/或獲得效應(yīng)器功能。
[0050]術(shù)語“耗竭”指作為源自在許多慢性感染和癌癥期間發(fā)生的持續(xù)TCR信號傳導(dǎo)的T細(xì)胞功能障礙狀態(tài)的T細(xì)胞耗竭。它與無反應(yīng)性的區(qū)別在于它不經(jīng)由不完全或缺乏的信號傳導(dǎo)，而是由于持續(xù)信號傳導(dǎo)而發(fā)生。它以較差的效應(yīng)器功能，持續(xù)的抑制性受體表達(dá)和與功能性效應(yīng)或記憶T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)不同的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)限定。耗竭阻止感染和腫瘤的最佳控制。耗竭可以源自外在負(fù)調(diào)節(jié)途徑(例如免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子)及細(xì)胞固有負(fù)調(diào)節(jié)(共刺激)途徑(PD-1，B7-H3, B7-H4,等等)兩者。[0051]“增強(qiáng)T細(xì)胞功能”意指誘導(dǎo)，引起或刺激T細(xì)胞具有持續(xù)或放大的生物學(xué)功能，或者恢復(fù)或再活化耗竭的或無活性的T細(xì)胞。增強(qiáng)T細(xì)胞功能的例子包括:相對于干預(yù)前的此類水平，升高的來自CD8+T細(xì)胞的Y-干擾素分泌，升高的增殖，升高的抗原響應(yīng)性(例如病毒，病原體，或腫瘤清除)。在一個實施方案中，增強(qiáng)的水平是至少50%，或者60%，70%，80%，90%, 100%, 120%, 150%, 200%。測量此增強(qiáng)的方式是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。
[0052]“T細(xì)胞功能障礙性病癥”是以降低的對抗原性刺激的響應(yīng)性為特征的T細(xì)胞病癥或狀況。在一個具體的實施方案中，τ細(xì)胞功能障礙性病癥是明確與經(jīng)由ro-1的不適當(dāng)升高的信號傳導(dǎo)有關(guān)的病癥。在另一個實施方案中，τ細(xì)胞功能障礙性病癥是如下的病癥，其中τ細(xì)胞是無反應(yīng)性的或者具有降低的分泌細(xì)胞因子，增殖，或者執(zhí)行細(xì)胞裂解活性的能力。在一個具體的方面，降低的響應(yīng)性導(dǎo)致對表達(dá)免疫原的病原體或腫瘤的無效控制。以τ細(xì)胞功能障礙為特征的τ細(xì)胞功能障礙性病癥的例子包括未分辨的急性感染，慢性感染和腫瘤免疫。
[0053]“腫瘤免疫”指腫瘤逃避免疫識別和清除的過程。如此，作為治療概念，腫瘤免疫在此類逃避減弱時得到“治療”，并且腫瘤被免疫系統(tǒng)識別并攻擊。腫瘤識別的例子包括腫瘤結(jié)合，腫瘤收縮和腫瘤清除。
[0054]“免疫原性”指特定物質(zhì)引發(fā)免疫應(yīng)答的能力。腫瘤是免疫原性的，并且增強(qiáng)腫瘤免疫原性有助于通過免疫應(yīng)答清除腫瘤細(xì)胞。增強(qiáng)腫瘤免疫原性的例子包括用抗I3DL抗體和MEK抑制劑處理。
[0055]“持續(xù)應(yīng)答”指在停止處理后對降低腫瘤生長的持續(xù)影響。例如，與施用階段開始時的大小相比，腫瘤大小可以保持為相同或更小。在一些實施方案中，持續(xù)應(yīng)答具有與處理持續(xù)時間至少相同的持續(xù)時間，處理持續(xù)時間的至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，或3.0倍長度。
[0056]術(shù)語“抗體”包括單克隆抗體(包括具有免疫球蛋白Fe區(qū)的全長抗體)，具有多表位特異性的抗體組合物，多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，雙抗體，和單鏈分子，及抗體片段(例如Fab，F(xiàn)(ab’)2，和Fv)。術(shù)語“免疫球蛋白”(Ig)在本文中與“抗體”可互換使用。
[0057]基本的4鏈抗體單元是由兩條相同的輕鏈(L)和兩條相同的重鏈(H)構(gòu)成的異四聚體糖蛋白。IgM抗體由5個基本的異四聚體單元及稱作J鏈的另外多肽組成，而且包含10個抗原結(jié)合位點，而IgA抗體包含與J鏈組合的2-5個能聚合而形成多價裝配物的基本4鏈單元。在IgG的情況中，4鏈單元通常是約150，000道爾頓。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵與重鏈相連，而兩條重鏈通過一個或多個二硫鍵彼此相連，二硫鍵的數(shù)目取決于重鏈的同種型。每條重鏈和輕鏈還具有間隔規(guī)律的鏈內(nèi)二硫鍵。每條重鏈在N-末端具有一個可變域(Vh)，接著是三個(對于α和Y鏈)或四個(對于μ和ε同種型)恒定域(Ch)。每條輕鏈在N-末端具有一個可變域(VJ，接著是其另一端的一個恒定域(CJ。'與Vh排列在一起，而Q與重鏈第一恒定域(ChI)排列在一起。認(rèn)為特定的氨基酸殘基在輕鏈和重鏈可變域之間形成界面。一個Vh和一個'一起配對而形成一個抗原結(jié)合位點。關(guān)于不同類別抗體的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，參見例如Basic and Clinical Immunology,第 8 版，Daniel P.Sties, Abba1.Terr and Tristram G.Parsolw (編)，Appleton&Lange, Norwalk, CT, 1994,第 71 頁和第6章。根據(jù)其恒定域氨基酸序列，來自任何脊椎動物物種的L鏈可歸入兩種截然不同類型中的一種，稱作卡帕(K)和拉姆達(dá)(λ)。根據(jù)其重鏈恒定域(C0)氨基酸序列，免疫球蛋白可歸入不同的類別或同種型。有五類免疫球蛋白:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分別具有稱作Ct、δ、ε、Y和μ的重鏈。根據(jù)Ch序列和功能的較小差異，Y和Ct類可進(jìn)一步分為亞類，例如人類表達(dá)下列亞類=IgGU IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2。
[0058]抗體的“可變區(qū)”或“可變域”指抗體重鏈或輕鏈的氨基末端結(jié)構(gòu)域。重鏈可變域和輕鏈可變域分別可以稱為“VH”和“VL”。這些結(jié)構(gòu)域一般是抗體的最易變部分(相對于同一類的其它抗體而言)且包含抗原結(jié)合位點。[0059]術(shù)語“可變的”指可變域中的某些區(qū)段在抗體間序列差異廣泛的實情。V結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)抗原結(jié)合且限定特定抗體對其特定抗原的特異性。然而，變異性并非均勻分布于可變域的整個跨度。而是，它集中于輕鏈和重鏈可變域二者中稱作高變區(qū)(HVR)的三個區(qū)段。可變域中更加高度保守的部分稱作框架區(qū)(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個FR區(qū)，它們大多采取β_折疊片構(gòu)象，通過形成環(huán)狀連接且在有些情況中形成β_折疊片結(jié)構(gòu)一部分的三個HVR連接。每條鏈中的HVR通過FR區(qū)非常接近的保持在一起，并與另一條鏈的HVR 一起促成抗體的抗原結(jié)合位點的形成(參見Kabat等，Sequences of ImmunologicalInterest,第 5 版，National Institute of Health, Bethesda, MD.(1991))。恒定域不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但展現(xiàn)出多種效應(yīng)器功能，諸如抗體在抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性中的參與。
[0060]術(shù)語“單克隆抗體”在用于本文時指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即構(gòu)成群體的各個抗體相同，除了可能以極小量存在的可能的天然存在突變和/或翻譯后修飾(例如異構(gòu)化、酰胺化)外。單克隆抗體是高度特異性的，針對單一抗原性位點。與典型的包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。在它們的特異性以外，單克隆抗體的優(yōu)勢在于它們是由雜交瘤培養(yǎng)物合成的，未受到其它免疫球蛋白的污染。修飾語“單克隆”指示抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，有待依照本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過多種技術(shù)來生成，包括例如雜交瘤法(例如Kohler and Milstein., Nature,256:495-97(1975);Hongo等,Hybridoma, 14(3):253-260 (1995), Harlow等,Antibodies:ALaboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed.1988);Hammerling等，in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas563-681(Elsevier, N.Y., 1981))>重組DNA法(參見例如美國專利N0.4,816, 567)、噬菌體展示技術(shù)(參見例如Clackson等,Nature352:624-628(1991);Marks 等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Sidhu 等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004) ; Lee 等，J.Mol.Biol.340(5): 1073-1093(2004) ;Fellouse, Proc.Nat.Acad.Sc1.USAlOl (34): 12467-12472 (2004) ; Lee 等,J.1mmunol.Methods284 (1-2):119-132 (2004))、及用于在具有部分或整個人免疫球蛋白基因座或編碼人免疫球蛋白序列的基因的動物中生成人或人樣抗體的技術(shù)(參見例如W01998/24893;W01996/34096;W01996/33735;W01991/10741;Jakobovits 等，Proc.Nat 1.Acad.Sc1.USA90:2551(1993);Jakobovits 等，Nature362:255-258(1993);Bruggemann 等，Yearin Immunol.7:33 (1993);美國專利 N0.5，545，807; 5，545，806; 5，569，825; 5，625，126; 5,633, 425;5, 661, 016;Marks 等,Bio/TechnologylO:779-783 (1992);Lonberg 等,Nature368:856-859(1994);Morrison, Nature368:812-813(1994);Fishwild 等,Nature Biotechnol.14:845-851 (1996);Neuberger, Nature Biotechnol.14:826(1996);Lonberg andHuszar, Intern.Rev.Tmmunol.13:65-93(1995))。[0061]術(shù)語“裸抗體(裸露的抗體)”指未綴合細(xì)胞毒性模塊或放射性標(biāo)記物的抗體。
[0062]術(shù)語“全長抗體”、“完整抗體”和“全抗體”可互換使用，指基本上完整形式的抗體，與抗體片段不同。具體而言，完整抗體包括那些具有重鏈和輕鏈(包括Fe區(qū))的。恒定域可以是天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列變體。在有些情況中，完整抗體可具有一項或多項效應(yīng)器功能。
[0063]“抗體片段”包含完整抗體的一部分，優(yōu)選完整抗體的抗原結(jié)合和/或可變區(qū)?？贵w片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；雙抗體；線性抗體(參見美國專利5, 641, 870,實施例 2; Zapata 等，Protein Eng.8 (10): 1057-1062 (1995));單鏈抗體分子;及由抗體片段形成的多特異性抗體。用木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個相同的抗原結(jié)合片段，稱作“Fab”片段，和一個殘余“Fe”片段，其名稱反映了它易于結(jié)晶的能力。Fab片段由完整L鏈及H鏈可變區(qū)域(Vh)和重鏈第一恒定域(ChI)組成。每個Fab片段對于抗原結(jié)合是單價的，即它具有一個抗原結(jié)合位點。胃蛋白酶處理抗體產(chǎn)生一個較大F(ab’)2片段，它大體相當(dāng)于兩個通過二硫鍵相連的Fab片段，具有不同抗原結(jié)合活性且仍能夠交聯(lián)抗原。Fab’片段因在ChI結(jié)構(gòu)域的羧基末端增加了少數(shù)殘基而與Fab片段有所不同，包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個或多個半胱氨酸。Fab’-SH是本文中對其中恒定區(qū)半胱氨酸殘基攜帶游離硫醇基的Fab’的稱謂 。F(ab’)2抗體片段最初是作為成對Fab’片段生成的，在Fab’片段之間具有鉸鏈半胱氨酸。還知道抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)。
[0064]Fe片段包含通過二硫鍵保持在一起的兩條H鏈的羧基末端部分?？贵w的效應(yīng)器功能由Fe區(qū)中的序列來決定，該區(qū)域也受到在某些類型的細(xì)胞上找到的Fe受體(FcR)識別。
[0065]“Fv”是包含完整抗原識別和結(jié)合位點的最小抗體片段。此片段由緊密、非共價結(jié)合的一個重鏈可變區(qū)和一個輕鏈可變區(qū)的二聚體組成。從這兩個結(jié)構(gòu)域的折疊中生發(fā)出六個高變環(huán)(重鏈和輕鏈各3個環(huán))，貢獻(xiàn)出抗原結(jié)合的氨基酸殘基并賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個可變域(或只包含對抗原特異的三個HVR的半個Fv)也具有識別和結(jié)合抗原的能力，盡管親和力低于完整結(jié)合位點。
[0066]“單鏈Fv”，也縮寫成“sFv”或“scFv”，是包含連接成一條多肽鏈的Vh和\抗體結(jié)構(gòu)域的抗體片段。優(yōu)選的是，sFv多肽在Vh與'結(jié)構(gòu)域之間進(jìn)一步包含多肽接頭，其使得sFv能夠形成結(jié)合抗原的期望結(jié)構(gòu)。關(guān)于sFv的綜述參見Pluckthun,于《The Pharmacologyof Monoclonal Antibodies》，第 113 卷，Rosenburg 和 Moore 編，Springer-Verlag, NewYork，第 269-315 頁，1994。
[0067]本發(fā)明抗體的“功能性片段”包含完整抗體的一部分，一般包括完整抗體的抗原結(jié)合或可變區(qū)或抗體的保留或具有改良FcR結(jié)合能力的Fe區(qū)?？贵w片段的例子包括線性抗體、單鏈抗體分子和自抗體片段形成的多特異性抗體。
[0068]術(shù)語“雙抗體”指通過在Vh和\結(jié)構(gòu)域之間使用短接頭(約5-10個殘基)構(gòu)建sFv片段(見上一段)而制備的小型抗體片段，由于接頭短，使得V結(jié)構(gòu)域?qū)嵭墟滈g而非鏈內(nèi)配對，由此導(dǎo)致二價片段，即具有兩個抗原結(jié)合位點的片段。雙特異性雙抗體是兩個“交叉” sFv片段的異二聚體，其中兩種抗體的V1^P \結(jié)構(gòu)域存在于不同多肽鏈上。雙抗體更詳細(xì)的描述于例如 EP404, 097;W093/11161;Hollinger 等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 90:6444-6448(1993)。
[0069]單克隆抗體在本文中明確包括“嵌合”抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(美國專利N0.4，816，567;Morrison 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA81:6851-6855 (1984))。本文中感興趣的嵌合抗體包括“靈長類化”抗體，其中抗體的抗原結(jié)合區(qū)衍生自通過用例如感興趣抗原免疫短尾猴(macaque monkey)而生成的抗體。如本文中所使用的，“人源化抗體”是“嵌合抗體”的一個子集。
[0070]非人(例如鼠)抗體的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。在一個實施方案中，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的HVR殘基(下文限定)用具有期望特異性、親和力和/或能力的非人物種(供體抗體)(諸如小鼠、大鼠、家兔或非人靈長類動物)的HVR殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架(“FR”)殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體中或在供體抗體中沒有找到的殘基。進(jìn)行這些修飾可以是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能，諸如結(jié)合親和力。一般而言，人源化抗體將包含至少一個、通常兩個基本上整個如下的可變域，其中所有或基本上所有高變環(huán)對應(yīng)于非人免疫球蛋白序列的高變環(huán)，且所有或基本上所有FR區(qū)是人免疫球蛋白序列的FR區(qū)，盡管FR區(qū)可包含一處或多處改進(jìn)抗體性能(諸如結(jié)合親和力、異構(gòu)化、免疫原性等)的個別FR殘基替代。FR中這些氨基酸替代的數(shù)目，H鏈中通常不超過6處，L鏈通常不超過3處。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見例如Jones等，Nature321:522-525 (1986);Riechmann 等,Nature332:323-329(1988);及 Presta, Curr.0p.Struct.Biol.2:593-596 (1992)。還可參見例如 Vaswani and Hamilton, Ann.Allergy, Asthma&Immunol.1:105-115 (1998) ; Harris, Biochem.Soc.Transactions23:1035-1038 (1995) ; Hurleand Gross, Curr.0p.Biotech.5:428-433(1994);及美國專利 N0.6，982，321 和 7，087，409。
[0071]“人抗體”指擁有與由人生成的抗體的氨基酸序列對應(yīng)的氨基酸序列和/或使用本文所公開的用于生成人抗體的任何技術(shù)生成的抗體。人抗體的這種定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。人抗體可使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)來生成，包括噬菌體展不文庫(Hoogenboom and Winter, J.Mol.Biol.227:381 (1991) ;Marks 等，J.Mol.Biol.222:581 (1991))。還可用于制備人單克隆抗體的是以下文獻(xiàn)中記載的方法=Cole等,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss, p.77(1985);Boerner等，J.1mmunol.147 (I):86-95 (1991)。還可參見 van Dijk and van de ffinkel, Curr.0pin.Pharmacol., 5:368-74(2001)?？赏ㄟ^給已經(jīng)修飾以應(yīng)答抗原性刺激而生成人抗體但其內(nèi)源基因組已經(jīng)失去能力的轉(zhuǎn)基因動物例如經(jīng)過免疫的異種小鼠(xenomice)施用抗原來制備人抗體(參見例如美國專利N0.6，075，181和6，150，584，關(guān)于XEN0M0USE?技術(shù))。還可參見例如 Li 等，Proc.Natl.Ascad.Sc1.USA, 103:3557-3562 (2006)，關(guān)于經(jīng)人 B-細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生成的人抗體。
[0072]術(shù)語“高變區(qū)”、“HVR”或“HV”在用于本文時指抗體可變域中序列上高度可變和/或形成結(jié)構(gòu)上定義的環(huán)的區(qū)域。通常，抗體包含六個HVR:
[0073]三個在VH中(H1、H2、H3)，三個在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗體中，H3和L3展示這六個HVR的最大多樣性，而且認(rèn)為特別是H3在賦予抗體以精密特異性中發(fā)揮獨特作用。參見例如 Xu 等，Immunityl3:37-45 (2000) ; Johnson and Wu,于:Methods in MolecularBiology248:1-25 (Lo 編，Human Press, Totowa, NJ, 2003)。事實上,僅由重鏈組成的天然存在camelid抗體在缺乏輕鏈時是有功能的且穩(wěn)定的。參見例如Hamers-Casterman等，Nature363:446-448 (1993);Sheriff 等，Nature Struct.Biol.3:733-736 (1996)。
[0074]本文中使用且涵蓋許多HVR的敘述。Kabat互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)是以序列變異性為基礎(chǔ)的，而且是最常用的(Kabat等，Sequences of Proteins ofImmunological Interest, 5th Ed.Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD.(1991))。Chothia 改為指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987)) o AbM HVR 代表 Kabat HVR 與 Chothia 結(jié)構(gòu)環(huán)之間的折衷，而且得到Oxford Molecular的AbM抗體建模軟件的使用?！敖佑|” HVR是以對可獲得的復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的分析為基礎(chǔ)的。下文記錄了這些HVR中每一個的殘基。
【權(quán)利要求】
1.一種在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展的方法，其包括對所述個體施用有效量的PD-1軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述ro-ι軸結(jié)合拮抗劑選自下組:ro-1結(jié)合拮抗劑、PD-Li結(jié)合拮抗劑和ro-L2結(jié)合拮抗劑。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述ro-1軸結(jié)合拮抗劑是ro-1結(jié)合拮抗劑。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述ro-1結(jié)合拮抗劑抑制ro-1與其配體結(jié)合配偶的結(jié)合。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述ro-1結(jié)合拮抗劑抑制ro-1與ro-Li的結(jié)合。
6.權(quán)利要求4的方法，其中所述ro-1結(jié)合拮抗劑抑制ro-1與ro-L2的結(jié)合。
7.權(quán)利要求4的方法，其中所述ro-1結(jié)合拮抗劑抑制ro-1與ro-Li和ro-L2兩者的結(jié)合 ?
8.權(quán)利要求4的方法，其中所述ro-1結(jié)合拮抗劑是抗體。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述ro-Ι結(jié)合拮抗劑是MDX-1106。
10.權(quán)利要求8的方法，其中所述ro-Ι結(jié)合拮抗劑是Merck3745。
11.權(quán)利要求8的方法，其中所述ro-1結(jié)合拮抗劑是CT-OiI。
12.權(quán)利要求4的方法，其中所述ro-Ι結(jié)合拮抗劑是AMP-224。
13.權(quán)利要求2的方法，其中所述ro-Ι軸結(jié)合拮抗劑是PD-Ll結(jié)合拮抗劑。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述ro-Ll結(jié)合拮抗劑抑制PD-Ll與TO-1的結(jié)合。
15.權(quán)利要求13的方法，其中所述I3D-Ll結(jié)合拮抗劑抑制PD-Ll與B7-1的結(jié)合。
16.權(quán)利要求13的方法，其中所述ro-Ll結(jié)合拮抗劑抑制ro-Ll與ro-1和B7-1兩者的結(jié)合。
17.權(quán)利要求13的方法，其中所述ro-Ll結(jié)合拮抗劑是抗體。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述ro-Ll結(jié)合拮抗劑選自下組:YW243.55.S70、MPDL3280A、和 MDX-1105。
19.權(quán)利要求17的方法，其中所述抗體包含重鏈和輕鏈，所述重鏈包含HVR-Hl序列SEQID NO:15，HVR-H2 序列 SEQ ID NO: 16，和 HVR-H3 序列 SEQ ID NO: 3 ;所述輕鏈包含 HVR-Ll序列 SEQ ID NO: 17，HVR-L2 序列 SEQ ID NO: 18，和 HVR-L3 序列 SEQ ID NO: 19。
20.權(quán)利要求17的方法，其中所述抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，所述輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列SEQ ID NO:21。
21.權(quán)利要求2的方法，其中所述ro-1軸結(jié)合拮抗劑是H)-L2結(jié)合拮抗劑。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述H)-L2結(jié)合拮抗劑是抗體。
23.權(quán)利要求21的方法，其中所述H)-L2結(jié)合拮抗劑是免疫粘附素。
24.權(quán)利要求1-23中任一項的方法，其中所述MEK抑制劑是競爭性MEK抑制劑。
25.權(quán)利要求1-23中任一項的方法，其中所述MEK抑制劑針對活化性KRAS突變更有選擇性。
26.權(quán)利要求1-23中任一項的方法，其中所述MEK抑制劑是變構(gòu)性MEK抑制劑。
27.權(quán)利要求1-23中任一項的方法，其中所述MEK抑制劑針對活化性BRAF突變更有選擇性。
28.權(quán)利要求1-23中任一項的方法，其中所述MEK抑制劑是式(I)，(II)，(III)，(IV)，(V), (VI)或(VII)的化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或溶劑合物。
29.權(quán)利要求1-23中任一項的方法，其中所述MEK抑制劑選自下組:G02442104、G-38963、G02443714、G00039805和(?C-0973，或其藥學(xué)可接受鹽或溶劑合物。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述MEK抑制劑是G02443714，G02442104或G00039805。
31.權(quán)利要求1-30中任一項的方法，其中所述癌癥含有BRAFV600E突變。
32.權(quán)利要求1-30中任一項的方法，其中所述癌癥含有BRAF野生型。
33.權(quán)利要求1-30中任一項的方法，其中所述癌癥含有KRAS野生型。
34.權(quán)利要求1-30中任一項的方法，其中所述癌癥含有活化性KRAS突變。
35.權(quán)利要求1-34中任一項的方法，其中所述治療導(dǎo)致停止所述治療后所述個體中持續(xù)的應(yīng)答。
36.權(quán)利要求1-35中任一項的方法，其中連續(xù)施用所述MEK抑制劑。
37.權(quán)利要求1-35中任一項的方法，其中間歇施用所述MEK抑制劑。
38.權(quán)利要求1-35中任一項的方法，其中在所述I3D-1軸結(jié)合拮抗劑前施用所述MEK抑制劑。
39.權(quán)利要求1-3 5中任一項的方法，其中與所述I3D-1軸結(jié)合拮抗劑同時施用所述MEK抑制劑。
40.權(quán)利要求1-36中任一項的方法，其中在所述ro-Ι軸結(jié)合拮抗劑后施用所述MEK抑制劑。
41.權(quán)利要求1-40中任一項的方法，其中所述個體具有結(jié)腸直腸癌。
42.權(quán)利要求1-40中任一項的方法，其中所述個體具有黑素瘤。
43.權(quán)利要求1-40中任一項的方法，其中所述個體具有非小細(xì)胞肺癌。
44.權(quán)利要求1-40中任一項的方法，其中所述個體具有卵巢癌。
45.權(quán)利要求1-40中任一項的方法，其中所述個體具有乳腺癌。
46.權(quán)利要求1-40中任一項的方法，其中所述個體具有胰腺癌。
47.權(quán)利要求1-40中任一項的方法，其中所述個體具有血液學(xué)惡性(malignancy)。
48.權(quán)利要求1-40中任一項的方法，其中所述個體具有腎細(xì)胞癌。
49.一種在具有癌癥的個體中增強(qiáng)免疫功能的方法，其包括以有效量施用ro-1軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑的組合。
50.權(quán)利要求49的方法，其中相對于施用所述組合前，所述個體中的CD8T細(xì)胞具有增強(qiáng)的引發(fā)、活化、增殖和/或細(xì)胞裂解活性。
51.權(quán)利要求50的方法，其中所述CD8T細(xì)胞活化以相對于施用所述組合前升高的Y -1FN+CD8T細(xì)胞頻率和/或增強(qiáng)的細(xì)胞裂解活性為特征。
52.權(quán)利要求50的方法，其中相對于施用所述組合前，CD8T細(xì)胞的數(shù)目是升高的。
53.權(quán)利要求50-52中任一項的方法，其中所述⑶8T細(xì)胞是抗原特異性⑶8T細(xì)胞。
54.權(quán)利要求50的方法，其中相對于施用所述ro-Ι軸結(jié)合拮抗劑和所述MEK抑制劑前，所述個體中的癌細(xì)胞選擇性具有MHC I類抗原表達(dá)的升高表達(dá)。
55.權(quán)利要求54的方法，其中所述個體的PBMC細(xì)胞沒有MHCI類抗原的升高表達(dá)。
56.權(quán)利要求49的方法，其中相對于施用所述I3D-1軸結(jié)合拮抗劑和所述MEK抑制劑前，所述個體中的抗原呈遞細(xì)胞具有增強(qiáng)的成熟和活化。
57.權(quán)利要求56的方法，其中所述抗原呈遞細(xì)胞是樹突細(xì)胞。
58.權(quán)利要求56的方法，其中抗原呈遞細(xì)胞的成熟以增加的CD83+樹突細(xì)胞頻率為特征。
59.權(quán)利要求56的方法，其中抗原呈遞細(xì)胞的活化以樹突細(xì)胞上升高的CD80和CD86表達(dá)為特征。
60.權(quán)利要求50的方法，其中相對于施用所述組合前，所述個體中IL-10和/或IL-8的血清水平是降低的。
61.權(quán)利要求50的方法，其中所述癌癥具有升高的T細(xì)胞浸潤水平。
62.權(quán)利要求49-61中任一項的方法，其中所述MEK抑制劑是式(I)，(II)，(III)，(IV)，(V), (VI)或(VII)的化合物，或其藥學(xué)可接受鹽或溶劑合物。
63.權(quán)利要求49-61中任一項的方法，其中所述MEK抑制劑選自下組:G02442104，G-38963, G02443714, G00039805和⑶C-0973，或其藥學(xué)可接受鹽或溶劑合物。
64.權(quán)利要求49-61中任一項的方法，其中所述I3D-1軸結(jié)合拮抗劑是抗PD-Ll抗體。
65.權(quán)利要求64的方法，其中癌細(xì)胞表面上的I3D-Ll受到抑制免于將信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至胞內(nèi)途徑。
66.權(quán)利要求64的方法，其中所述抗ro-Ll抗體能夠抑制ro-Ll和ro-1之間和/或PD-Ll和B7-1之間的結(jié)合。
67.權(quán)利要求64的方法，其中所述抗I3D-Ll抗體是單克隆抗體。
68.權(quán)利要求64的方法，其中所述抗I3D-Ll抗體是選自下組的抗體片段:Fab，F(xiàn)ab，-SH, Fv, scFv,和(Fab，)2 片段。
69.權(quán)利要求64-68中任一項的方法，其中所述抗I3D-Ll抗體是人源化抗體。
70.權(quán)利要求64-68中任一項的方法，其中所述抗I3D-Ll抗體是人抗體。
71.權(quán)利要求64的方法，其中所述抗體包含重鏈和輕鏈，所述重鏈包含HVR-Hl序列SEQID NO: 15，HVR-H2 序列 SEQ ID NO: 16，和 HVR-H3 序列 SEQ ID NO: 3，所述輕鏈包含 HVR-Ll序列 SEQ ID NO: 17，HVR-L2 序列 SEQ ID NO: 18，和 HVR-L3 序列 SEQ ID NO: 19。
72.權(quán)利要求64的方法，其中所述抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列SEQ ID NO:24，所述輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列SEQ ID NO:21。
73.權(quán)利要求1-72中任一項的方法，其中靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，皮下，表面，口服，經(jīng)皮，腹膜內(nèi)，眶內(nèi)，通過植入，通過吸入，鞘內(nèi)，室內(nèi)，或鼻內(nèi)施用所述ro-1軸結(jié)合拮抗劑。
74.—種試劑盒，其包含PD-1軸結(jié)合拮抗劑和包裝插頁，該包裝插頁包含關(guān)于與MEK抑制劑組合使用所述PD-1軸結(jié)合拮抗劑以在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展的用法說明書。
75.—種試劑盒，其包含I3D-1軸結(jié)合拮抗劑和MEK抑制劑及包裝插頁，該包裝插頁包含關(guān)于使用所述ro-Ι軸結(jié)合拮抗劑和所述MEK抑制劑以在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展的用法說明書。
76.—種試劑盒，其包含MEK抑制劑和包裝插頁，該包裝插頁包含關(guān)于與I3D-1軸結(jié)合拮抗劑組合使用所述MEK抑制劑以在個體中治療癌癥或延遲癌癥進(jìn)展的用法說明書。
77.權(quán)利要求74-76中任一項的試劑盒，其中所述I3D-1軸結(jié)合拮抗劑是抗I3D-Ll抗體。
78.權(quán)利要求74-76中任一項的試劑盒，其中所述ro-1軸結(jié)合拮抗劑是抗ro-1抗體。
79.權(quán)利要求74-76中任一項的試劑盒，其中所述ro-1軸結(jié)合拮抗劑是抗ro-1免疫粘附素。
【文檔編號】C07K16/30GK103842030SQ201280048398
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2012年8月1日 優(yōu)先權(quán)日:2011年8月1日
【發(fā)明者】H.梅克, B.歐文 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司