治療肽的制作方法
【專利摘要】公開了組合物，其包含與限定的結(jié)合配偶(defined?binding?partner)免疫特異性結(jié)合的肽，其中所述肽至少包含與結(jié)合人MICA或血管發(fā)生素-2的互補(bǔ)決定區(qū)相關(guān)的互補(bǔ)決定區(qū)。
【專利說明】治療狀
[0001]優(yōu)先權(quán)聲明
[0002]本申請(qǐng)要求獲得于2011年9月30日遞交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)序列號(hào)61/541，921的利益，在此援引并入其全部內(nèi)容。
[0003]政府支持
[0004]本發(fā)明在政府支持下進(jìn)行，基金號(hào)為N0.P01A1045757，由美國國立衛(wèi)生研究院資助。政府對(duì)本發(fā)明享有某些權(quán)利。
[0005]序列表
[0006]本申請(qǐng)包括一個(gè)序列表，其通過EFS-Web以ASCII格式提交，在此援引并入其全部內(nèi)容。所述ASCII拷貝于2012年9月27日生成，名稱為53293W01.txt，大小為90，411字節(jié)。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0007]本發(fā)明涉及與人類受試者相關(guān)的治療組合物(例如肽)。
[0008]背景
[0009]暴露于病癥或疾病的人類受試者為具有治療潛力的抗體提供了來源，而且用于獲得這些抗體的一般方法是本領(lǐng)域已知的。然而，特異性獲得具有治療潛力的抗體的方法一般受到表達(dá)這些抗體的B細(xì)胞的出現(xiàn)頻率低、增殖速度慢、和抗體分泌水平低的限制。例如，具有限定特異性的記憶B細(xì)胞通常在每百萬外周血細(xì)胞或大約每毫升血液中僅有 I 個(gè)細(xì)胞(Lanzavecchia et al., Curr.0pin.1mmunol., 21:298-304 (2009): Yoshida etal.，Immunol.Rev.，237:117-139 (2010))。具有治療潛力的抗體的頻率很可能在癌癥患者中更低，因此有必要開發(fā)新方法以便能夠以高靈敏度和高效率分離這些細(xì)胞。
[0010]傳統(tǒng)的方法一般依賴通過體外培養(yǎng)將記憶B細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榭贵w分泌細(xì)胞和/或使用被免疫動(dòng)物模型(例如小鼠)(Crotty et al., J.1mmunol., 171:4969-4973(2003):Fecteau et al., Immunology, 128:e353-e365(2009):Buisman et al., Vaccine, 28:179-186(2009): Corti et al.，PLoS One, 5: e8805 (2010)) ?例如，在體外培養(yǎng)達(dá)I周之后，可以使用酶聯(lián)免疫吸附斑點(diǎn)(ELISP0T)測(cè)定在培養(yǎng)物上清中測(cè)量到抗體，并評(píng)估抗體分泌細(xì)胞的頻率。這類方法的不足之處已有報(bào)道(Henn et al., J.1mmunol., 183:31777-3187 (2009): Caο et al.，J.1mmunol.，Methods, 358:56-65 (2010))。例如，體外培養(yǎng)的記憶 B 細(xì)胞會(huì)改變記憶B細(xì)胞的表型，使之類似于具有截然不同的功能性質(zhì)的漿細(xì)胞(Jiang et al.，Eur.J.1mmunol., 37:2205-2213(2007):Huggins et al., Blood, 109:1611-1619(2007):Jourdan etal., Blood, 114:5173-5181 (2009)) o基于熒光抗原的方法的不足之處也有報(bào)道(Hofer etal., Immunol.Rev.,211:295-302(2006):Odendahl et al., Blood, 105:1614-1621(2005)；Kunkel et al., Nat.Rev.1mmunol., 3:822-829 (2003):Scheid etal., Nature, 458:636-640(2009):Wu et al., Science, 329:856-861 (2010))。
[0011]需要有改進(jìn)的方法，用于特異性地獲得或靶定具有治療潛力的抗體。
[0012] MICA是NKG2D的一種配體，NKG2D是在大多數(shù)人NK細(xì)胞、Y δ T細(xì)胞和⑶8+Τ細(xì)胞上表達(dá)的C型凝集素樣II型跨膜受體(C-type lectin-like, type II transmembranereceptor)。配體一旦偶聯(lián)，NKG2D通過銜接蛋白(adaptor protein) DAPlO傳遞信號(hào)，弓丨發(fā)穿孔素依賴的細(xì)胞裂解，并提供共刺激(co-stimulation)。在人體內(nèi)，NKG2D配體包括MHC I類鏈相關(guān)蛋白A(MICA)、緊密近緣的MICB、UL_16結(jié)合蛋白(ULBP) 1-4和RAE-1G。盡管NKG2D配體在健康組織中不經(jīng)常發(fā)現(xiàn)，但是各種形式的細(xì)胞應(yīng)激，包括DNA損傷，可上調(diào)配體表達(dá)，導(dǎo)致它們?cè)诙喾N惡性實(shí)體瘤和血液惡性病(包括黑素瘤)中經(jīng)常被檢測(cè)到。用抗-NKG2D封閉抗體處理的NKG2D缺陷型和野生型小鼠會(huì)顯示更高的腫瘤易感性，可見NKG2D通過配體陽性轉(zhuǎn)化細(xì)胞的激活促進(jìn)外部的腫瘤抑制。然而在患者體內(nèi)，由于NKG2D配體從腫瘤細(xì)胞脫落(shed)，觸發(fā)表面NKG2D的內(nèi)化和細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞的功能障礙，可能實(shí)現(xiàn)免疫逃逸?？扇苄訬KG2D配體還可以刺激調(diào)節(jié)性NKG2D+⑶4+Foxp3-T細(xì)胞的擴(kuò)增，這些細(xì)胞可以通過Fas配體、IL-10和TGF-β拮抗抗腫瘤細(xì)胞毒作用。MICA是一種從腫瘤細(xì)胞脫落的配體，從腫瘤細(xì)胞脫落即從細(xì)胞表面釋放到周圍介質(zhì)中；來自癌癥患者的血清中通常含有升高水平的可溶形式(sMICA)。MICA脫落可以部分地通過與蛋白二硫鍵異構(gòu)酶ERp5相互作用實(shí)現(xiàn)，其與關(guān)鍵的半胱氨酸形成一個(gè)二硫鍵，導(dǎo)致α 3結(jié)構(gòu)域去折疊，使之容易被ADAM-10/17和ΜΜΡ14蛋白水解。
[0013]血管發(fā)生是從預(yù)先存在的血管形成新毛細(xì)管的過程，已被提示是腫瘤生長和播散的關(guān)鍵部分。腫瘤刺激血管新生，以滿足依靠單純擴(kuò)散所難以滿足的不斷增加的氧氣和營養(yǎng)需要。結(jié)果，腫瘤招募、重構(gòu)和擴(kuò)展現(xiàn)有的血管，以滿足其代謝需求。生長中的腫瘤對(duì)新血管形成的依賴性，使得血管發(fā)生成為抗癌療法的一個(gè)引人注意的靶標(biāo)。許多細(xì)胞因子，包括血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)家族成員和促血管發(fā)生素，被認(rèn)為在調(diào)節(jié)血管發(fā)生中發(fā)揮作用。促血管發(fā)生素是作為Ties的配體發(fā)現(xiàn)的，Ties是一個(gè)在血管內(nèi)皮中選擇性表達(dá)的酪氨酸激酶家族。已知有四種促血管發(fā)生素:促血管發(fā)生素_1( “Ang-Ι”)至促血管發(fā)生素-4( “Ang-4”)。研究提示，促血管發(fā)生素(例如Ang-1和Ang-2)可能參與腫瘤血管發(fā)生。根據(jù)這個(gè)信息，促血管發(fā)生素已經(jīng)被鑒定作為基于免疫的癌癥療法的潛在靶標(biāo)。
[0014]有需要鑒定，其能夠特異性識(shí)別并結(jié)合基于免疫的癌癥療法的靶標(biāo)，例如MICA和促血管發(fā)生素的新的作用劑。這些作用劑可用于診斷篩選和治療干預(yù)與腫瘤發(fā)生相關(guān)的疾病狀態(tài)。
[0015]概要
[0016]本公開提供了與具有治療潛力的抗體相關(guān)的組合物和方法。
[0017]在一些實(shí)施方案中，本公開提供組合物，其包含與MHC I類多肽相關(guān)序列A(MICA)或其上的表位免疫特異性結(jié)合的肽。在一些方面中，該組合物的肽包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)，和具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的\的⑶R3。在一些方面中，這些肽包含表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)3，和表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的 '的⑶R3。在一些方面中，這些肽進(jìn)一步包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的Vh的CDR2，或具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的Vl的⑶R2，或者包含上述兩者。在一些方面中，這些肽包含表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的Vh的⑶R2，或表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的\的⑶R2，或者包含上述兩者。在一些方面中，這些肽進(jìn)一步包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的Vh的CDRl，或具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的\的⑶Rl，或者包含上述兩者。在一些方面中，這些肽包含表1所示的抗體ID1、6、7、8或9的Vh的⑶Rl，或表1所示的抗體IDl、6、7、8或9的Vl的⑶Rl，或者包含上述兩者。
[0018]在一些方面中，肽是抗體或抗體片段，包含:與SEQ ID N0:2具有同一性的％鏈，其中對(duì)應(yīng)于CDR1、CDR2、和CDR3的區(qū)域包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體 IDl 的 Vh 的 CDR1、CDR2、和 CDR3，并且 SEQ ID NO: 2 中對(duì)應(yīng)于 FR1、FR2、FR3、FR4 的區(qū)域包含與表1所示的抗體IDl的乂11的FR1、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO: 11具有同一性的V1^鏈，其中對(duì)應(yīng)于CDR1、CDR2、和CDR3的區(qū)域包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體 IDl 的 Vl 的 CDR1、CDR2、和 CDR3，并且 SEQ ID NO: 11 中對(duì)應(yīng)于 FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體IDl的\的FRl、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含一個(gè)含有SEQID NO: 2的Vh鏈和包含SEQ ID NO: 11的'鏈。在一些方面中，除了肽之外，組合物還包含一種或多種(例如12、3、4、5、6、7、8、9、10或少于20種)抗癌治療劑。在一些方面中，組合物被配制成藥物組合物(例如用于施用給受試者)。
[0019]在一些方面中，肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ IDNO: 149具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2、和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID6的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R 3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO: 149中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID6的Vh 的 FRU FR2、FR3、FR4 具有至少 80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99%^ 100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO: 151具有同一性的 '鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2、和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID6的Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID N0:151中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID6的\的FRl、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:包含SEQ ID NO: 149的Vh鏈和包含SEQ ID NO: 151的'鏈。在一些方面中，除了肽之外，組合物進(jìn)一步包含一種或多種(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或少于20種)抗癌治療劑。在一些方面中，組合物被配制成藥物組合物(例如用于施用給受試者)。
[0020]在一些方面中，肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ IDNO: 168具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID7的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO: 168中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID7的Vh 的 FRU FR2、FR3、FR4 具有至少 80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99%^ 100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO: 170具有同一性的\鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID7的Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID勵(lì):170中對(duì)應(yīng)于？1?1、？1?2、？1?3、卩1?4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID7的Vl的FRl、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:包含SEQ ID NO: 168的Vh鏈和包含SEQ ID NO: 170的'鏈。在一些方面中，除了肽之外，組合物進(jìn)一步包含一種或多種(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或少于20種)抗癌治療劑。在一些方面中，組合物被配制成藥物組合物(例如用于施用給受試者)。
[0021]在一些方面中，肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ IDNO: 186具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID8的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO: 186中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID8的Vh 的 FRU FR2、FR3、FR4 具有至少 80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99%^ 100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO: 188具有同一性的\鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID7的Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且S EQ ID N0:188中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID8的\的FRl、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:包含SEQ ID NO: 186的Vh鏈和包含SEQ ID NO: 188的'鏈。在一些方面中，除了肽之外，組合物進(jìn)一步包含一種或多種(例如1、2、3、4、5、6、
7、8、9、10或少于20種)抗癌治療劑。在一些方面中，組合物被配制成藥物組合物(例如用于施用給受試者)。
[0022]在一些方面中，肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ IDNO: 204具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID9的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO: 204中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID9的Vh 的 FRU FR2、FR3、FR4 具有至少 80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99%^ 100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO: 206具有同一性的\鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID9的Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID勵(lì):206中對(duì)應(yīng)于？1?1、？1?2、？1?3、卩1?4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID9的\的FRl、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:包含SEQ ID NO:204的Vh鏈和包含SEQ ID NO: 206的'鏈。在一些方面中，除了肽之外，組合物進(jìn)一步包含一種或多種(例如1、2、3、4、5、6、
7、8、9、10或少于20種)抗癌治療劑。在一些方面中，組合物被配制成藥物組合物(例如用于施用給受試者)。
[0023]在一些實(shí)施方案中，本公開提供組合物，其包含一種或多種與促血管發(fā)生素或其上的表位結(jié)合的肽。在一些方面中，所述組合物的肽包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)3，和表1所示的抗體ID2、
3、4、5或10的\的⑶R3，并在⑶R1XDR2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換。在一些方面中，肽可以包含表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)3，和表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的 '的⑶R3。在一些方面中，肽可以進(jìn)一步包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的⑶R2，或具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的\的⑶R2，或者包含上述兩者。在一些方面中，這些肽可以包含表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的⑶R2，或表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的\的⑶R2，或者包含上述兩者。在一些方面中，肽可以進(jìn)一步包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的⑶R1，或具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的\的CDR1，或者包含上述兩者。在一些方面中，這些肽可以包含表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的⑶Rl，或表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的 '的⑶Rl，或者包含上述兩者。
[0024]在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ IDNO: 20具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID2的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID N0:20中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID2的Vh的 FRU FR2、FR3、FR4 具有至少 80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99%^ 100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO: 29具有同一性的'鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶Rl、OTR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID2的\的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO: 29中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID2的Vl的FR1、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96 %、97 %、98、99 %、或100 %的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:包含SEQ ID NO: 20的Vh鏈和包含SEQ ID NO: 29的 '鏈。
[0025]在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ IDNO: 38具有同一性的Vh鏈 ，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID3的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID N0:38中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID3的Vh的 FR1、FR2、FR3、FR4 具有至少 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98、99%、或 100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO:47具有同一性的'鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶Rl、OTR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID3的\的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO:47中對(duì)應(yīng)于FRl、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID3的Vl的FR1、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96 %、97 %、98、99 %、或100 %的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:包含SEQ ID NO:38的Vh鏈和包含SEQ ID NO:47的 '鏈。
[0026]在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ IDNO: 56具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID4的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID N0:56中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID4的Vh的 FRU FR2、FR3、FR4 具有至少 80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99%^ 100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO:65具有同一性的'鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶Rl、OTR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID4的\的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO:65中對(duì)應(yīng)于FRl、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID4的Vl的FR1、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96 %、97 %、98、99 %、或100 %的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:包含SEQ ID NO:56的Vh鏈和包含SEQ ID NO:65的 '鏈。
[0027]在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ IDNO: 74具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID5的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID N0:74中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID5的Vh的 FRU FR2、FR3、FR4 具有至少 80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99%^ 100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO:83具有同一性的'鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶Rl、OTR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID5的\的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO:83中對(duì)應(yīng)于FRl、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID5的Vl的FR1、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:包含SEQ ID NO: 74的Vh鏈和包含SEQ ID N0:83的'鏈。在一些方面中，所述肽至少免疫特異性結(jié)合促血管發(fā)生素-2。在一些方面中，所述組合物進(jìn)一步包括一種或多種抗癌治療劑。在一些方面中，所述組合物被配制成藥物組合物。
[0028]在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ IDNO: 222具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體IDlO的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ IDNO: 222中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體IDlO的Vh 的 FRU FR2、FR3、FR4 具有至少 80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99%^ 100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO: 224具有同一性的\鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和CDR3的區(qū)域包含表1所示的抗體IDlO的Vl的CDR1、CDR2和CDR3，并在CDR1、CDR2和CDR3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID勵(lì):224中對(duì)應(yīng)于？1?1、？1?2、？1?3、？1?4的區(qū)域包含與表1所示的抗體IDlO的Vl的FR1、FR2、FR3、FR4具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列。在一些方面中，肽包括抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:包含SEQ ID NO:222的Vh鏈和包含SEQ ID NO: 224的'鏈。在一些方面中，所述肽至少免疫特異性結(jié)合促血管發(fā)生素_2。在一些方面中，所述組合物進(jìn)一步包括一種或多種抗癌治療劑。在一些方面中，所述組合物被配制成藥物組合物。
[0029]在一些實(shí)施方案中，本公開包括用于治療受試者中的癌癥的方法。在一些方面中，該方法包括向受試者施用根據(jù)權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)的組合物。
[0030]本公開還提供了在免疫治療后從癌癥患者分離人抗體的方法。
[0031]在一些實(shí)施方案中，本公開包括從受試者獲得針對(duì)自身抗原的免疫細(xì)胞的方法，該方法包括鑒定對(duì)自身抗原呈陽性免疫應(yīng)答的受試者，提供多聚體形式的自身抗原，使多聚體形式的自身抗原與來自對(duì)自身抗原顯示陽性免疫應(yīng)答的受試者的樣品相接觸，和獲得與多聚體形式的自身抗原結(jié)合的免疫細(xì)胞。
[0032] 在一些實(shí)施方案中，本公開包括從癌癥患者獲得針對(duì)自身抗原的免疫細(xì)胞的方法，該方法包括鑒定對(duì)自身抗原呈陽性免疫應(yīng)答的受試者，提供多聚體形式的自身抗原，使多聚體形式的自身抗原與來自對(duì)自身抗原呈陽性免疫應(yīng)答的受試者的樣品相接觸，和獲得與多聚體形式的自身抗原結(jié)合的免疫細(xì)胞。
[0033]除非另外指出，否則這里所用的全部技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的相同的意義。這里描述了用于在本發(fā)明中使用的方法和材料；但是也可以使用本領(lǐng)域已知的其它合適方法和材料。這些材料、方法和實(shí)例僅作為舉例，并不意圖具有限制意義。本文引用這里提到的所有公開、專利申請(qǐng)、專利、序列、數(shù)據(jù)庫內(nèi)容和其它參考文獻(xiàn)的全部內(nèi)容作為參考。當(dāng)存在矛盾時(shí)，以本說明書，包括定義，為準(zhǔn)。
[0034]通過下面的詳細(xì)說明書和附圖以及權(quán)利要求，可以顯見本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)。
[0035]附圖簡(jiǎn)述
[0036]圖1.抗體皿(抗-MHC I類多肽相關(guān)序列A(MICA)抗體)可變重鏈(Vh)的核酸序列(SEQ ID NO:1) ο
[0037]圖2.抗體IDl (抗-MICA抗體)Vh鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 2) ?
[0038]圖3.抗體IDl (抗-MICA抗體)可變輕鏈(Vl)的核酸序列(SEQ ID NO: 10)。
[0039]圖4.抗體IDl (抗-MICA抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 11)。
[0040]圖5.抗體ID2 (抗-促血管發(fā)生素-2抗體)Vh鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 19)。
[0041]圖6.抗體ID2(抗促血管發(fā)生素-2抗體)Vh鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 20)。
[0042]圖7.抗體ID2 (抗促血管發(fā)生素-2抗體)Vl鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 28)。
[0043]圖8.抗體ID2 (抗促血管發(fā)生素-2抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 29)。
[0044]圖9.抗體ID3 (抗-促血管發(fā)生素-2抗體)Vh鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 37)。
[0045]圖10.抗體ID3(抗促血管發(fā)生素-2抗體)Vh鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 38)。
[0046]圖11.抗體ID3 (抗促血管發(fā)生素-2抗體)Vl鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 46)。
[0047]圖12.抗體ID3 (抗促血管發(fā)生素_2抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 47)。
[0048]圖13.抗體ID4 (抗-促血管發(fā)生素_2抗體)Vh鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 55)。
[0049]圖14.抗體ID4 (抗促血管發(fā)生素_2抗體)Vh鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 56)。
[0050]圖15.抗體ID4 (抗促血管發(fā)生素-2抗體)\鏈的核酸序列(SEQ ID NO:64)。
[0051]圖16.抗體ID4(抗促血管發(fā)生素-2抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO:65)。
[0052]圖17.抗體ID5(抗-促血管發(fā)生素-2抗體)Vh鏈的核酸序列(SEQ ID NO:73)。
[0053]圖18.抗體ID5(抗促血管發(fā)生素_2抗體)Vh鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 74)。
[0054]圖19.抗體ID5 (抗促血管發(fā)生素_2抗體)\鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 82)。
[0055]圖20.抗體ID5 (抗促血管發(fā)生素_2抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 83)。
[0056]圖21A-21F .用于從B細(xì)胞制作抗體的示例方法。(A)表達(dá)具有用于位點(diǎn)特異性生物素化的BirA標(biāo)簽的抗原，并與熒光標(biāo)記的鏈親和素組成四聚體。(B)B細(xì)胞用四聚體和一組單克隆抗體染色。將四聚體+，類別轉(zhuǎn)換的記憶B細(xì)胞單細(xì)胞分選到PCR連排反應(yīng)管(PCRstrip)中。(C)用T7RNA聚合酶進(jìn)行mRNA擴(kuò)增。(D)用300_400bp PCR產(chǎn)物進(jìn)行PCR產(chǎn)物測(cè)序。(E)使用重疊PCR構(gòu)建全長IgGl重鏈和K / λ輕鏈序列，并將它們克隆到分離的載體中。將載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)入CHO-S細(xì)胞，用于表達(dá)全人重組抗體。(F)測(cè)試抗體的抗原結(jié)合，并評(píng)估其潛在治療性能。
[0057]圖22Α-22Β.顯示使用單體和四聚體抗原鑒定記憶B細(xì)胞的結(jié)果比較的圖。(A)單生物素化的TTCF或⑶80抗原直接用Alexa-488熒光團(tuán)標(biāo)記；四聚體用非標(biāo)記的鏈親和素產(chǎn)生。將從每個(gè)供體富集的B細(xì)胞分成三個(gè)部分，并用對(duì)照CD80四聚體、TTCF單體或TTCF四聚體以相同的總抗原濃度0.125μ g/mL進(jìn)行標(biāo)記。FACS點(diǎn)圖描繪了 CD19+CD27+IgM_類別轉(zhuǎn)換的記憶B細(xì)胞；門(gate)附近的數(shù)字代表父門(parental gate)的百分比。(B)在三個(gè)不同供體中檢測(cè)到的四聚體+記憶B細(xì)胞的頻率。數(shù)字計(jì)算為:四聚體+細(xì)胞個(gè)數(shù)/IxlO6個(gè)⑶19+記憶B細(xì)胞。
[0058]圖23A-23B.顯示從漿母細(xì)胞和記憶B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與TTCF的高親和性結(jié)合的曲線圖。實(shí)施飽和結(jié)合試驗(yàn)以確定重組抗體的親和性。將TTCF抗體用銪標(biāo)記，銪在用螯合劑溫育時(shí)會(huì)在615nm發(fā)射強(qiáng)熒光信號(hào)。將抗體固定在96孔板中，并與TTCF-銪(100nM_4pM)一起37°C溫育2小時(shí)。記錄5 nm的熒光計(jì)數(shù)，并用非線性回歸分析計(jì)算KD。在所有實(shí)驗(yàn)中均包含同樣在CHO-S細(xì)胞中產(chǎn)生的對(duì)照抗體(克隆8.18.C5)。(A)重組TTCF抗體I和2從TTCF四聚體+漿母細(xì)胞(供體I)產(chǎn)生。(B)TTCF抗體3，4和5從來自三個(gè)不同供體的TTCF四聚體+記憶B細(xì)胞產(chǎn)生。
[0059]圖24.顯示抗-MICA抗體與MICA包被的Iuminex珠子的結(jié)合的柱狀圖。
[0060]圖25A-250.顯示抗-MICA抗體與MICA包被的珠子的結(jié)合的曲線圖。
[0061]圖26A-26D.顯示四種人促血管發(fā)生素2特異性抗體以及對(duì)照抗體與三種人促血管發(fā)生素(促血管發(fā)生素_1、2和4)和類促血管發(fā)生素-3 (Ang-樣3)的結(jié)合的柱狀圖。將重組促血管發(fā)生素固定在ELISA板中，并用銪標(biāo)記的鏈親和素檢測(cè)人重組抗體的結(jié)合。
[0062]圖27A-27C.顯示了從肺癌患者分離促血管發(fā)生素特異性抗體的相關(guān)圖片和凝膠。(A)通過ELISA確定的肺癌患者(L19)血清(1:1000稀釋)的促血管發(fā)生素_2反應(yīng)性。(B)FACS點(diǎn)圖，以CD19+，CD27+IgM_B細(xì)胞設(shè)門的PBMC樣品(時(shí)間點(diǎn)-10/98)，X軸為CD19，Y軸為熒光標(biāo)記的促血管發(fā)生素_2。(C)從患者L19分離的10個(gè)促血管發(fā)生素-2反應(yīng)活性記憶B細(xì)胞的重鏈、輕鏈和鉸鏈區(qū)的PCR產(chǎn)物。圖片左側(cè)指示了 500堿基對(duì)的標(biāo)記物。
[0063]圖28.抗體ID6 (抗-MHC I類多肽相關(guān)序列A (MICA)抗體)的可變重(Vh)鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 148)。
[0064]圖29.抗體ID6 (抗-MICA抗體)Vh鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 149)。
[0065]圖30.抗體ID6 (抗-MICA抗體)可變輕(Vl)鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 150)。
[0066]圖31.抗體ID6 (抗-MICA抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 151)。
[0067]圖32.抗體ID7 (抗-MHC I類多肽相關(guān)序列A (MICA)抗體)的可變重(Vh)鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 167)。
[0068]圖33.抗體ID7 (抗-MICA抗體)Vh鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 168)。
[0069]圖34.抗體ID7 (抗-MICA抗體)可變輕(Vl)鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 169)。
[0070]圖35.抗體ID7 (抗-MICA抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 170)。
[0071]圖36.抗體ID8 (抗-MHC I類多肽相關(guān)序列A (MICA)抗體)的可變重(Vh)鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 185)。
[0072]圖37.抗體ID8 (抗-MICA抗體)Vh鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 186)。
[0073]圖38.抗體ID8 (抗-MICA抗體)可變輕(Vl)鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 187)。
[0074]圖39.抗體ID8 (抗-MICA抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 188)。
[0075]圖40.抗體ID9 (抗-MHC I類多肽相關(guān)序列A (MICA)抗體)的可變重鏈(Vh)的核酸序列(SEQ ID NO:203)。
[0076]圖41.抗體ID9(抗-MICA抗體)Vh鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 204)。
[0077]圖42.抗體ID9 (抗-MICA抗體)可變輕(Vl)鏈的核酸序列(SEQ ID NO: 205)。
[0078]圖43.抗體ID9 (抗-MICA抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 206)。
[0079]圖44.抗體IDlO (抗-促血管發(fā)生素_2抗體)的可變重鏈(Vh)的核酸序列(SEQID N0:221)。
[0080]圖45.抗體IDlO(抗-促血管發(fā)生素-2抗體)乂“連的氨基酸序列(SEQ IDNO:222)。
[0081]圖46.抗體IDlO (抗-促血管發(fā)生素-2抗體)可變輕(Vj鏈的核酸序列(SEQ IDNO:223)。
[0082]圖47.抗體IDlO (抗-MICA抗體)Vl鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 224)。
[0083]圖48A-G.顯示對(duì)重組抗-MICA抗體與MICA等位體的特異性結(jié)合的評(píng)估的曲線圖。
[0084]圖49.顯示用抗-MICA抗體CM24002Ab2標(biāo)記自體腫瘤細(xì)胞的曲線圖。
[0085]圖50.顯示血清MICA對(duì)NKG2D的調(diào)節(jié)的一系列FACS點(diǎn)圖。人NK細(xì)胞與來自患者CM24002的對(duì)照血 清的1:10稀釋物一起溫育48小時(shí)。在溫育開始時(shí)，以10 μ g/ml的濃度添加所示抗體。通過流式細(xì)胞儀評(píng)估NKG2D在⑶56+NK細(xì)胞上的表達(dá)。
[0086]圖51.顯示重組MICA對(duì)NKG2D的調(diào)節(jié)的一系列FACS點(diǎn)圖。將人NK細(xì)胞與2ng/ml的濃度的重組MICA —起溫育48小時(shí)。在溫育開始時(shí)，以10 μ g/ml的濃度添加所示抗體。48小時(shí)后，通過流式細(xì)胞儀評(píng)估NKG2D在⑶56+NK細(xì)胞上的表達(dá)。
[0087]圖52.證明抗-MICA抗體CM24002Ab2可提高細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的曲線圖。在10 μ g/ml的指示抗體的存在下，將人NK細(xì)胞與重組MICA (2ng/ml) —起溫育48小時(shí)。通過測(cè)量以指定比例溫育4小時(shí)后LDH的釋放，評(píng)估NK細(xì)胞(效應(yīng)物)殺死K562靶細(xì)胞的能力。
[0088]圖53.證明抗-MICA抗體CM24002Ab2和CM33322Ab29可提高細(xì)胞介導(dǎo)的毒性的柱狀圖。在10 μ g/ml的指示抗體的存在下，將人NK細(xì)胞與重組MICA (2ng/ml)溫育48小時(shí)。通過測(cè)量在溫育4小時(shí)后LDH的釋放，評(píng)估NK細(xì)胞(效應(yīng)物)殺死K562靶細(xì)胞的能力。在效應(yīng)物與靶細(xì)胞溫育4小時(shí)期間，添加NKG2D封閉抗體或Fe封閉抗體，以評(píng)估Fe受體和NKG2D對(duì)細(xì)胞介導(dǎo)的毒性的貢獻(xiàn)。
[0089]圖54.顯示重組抗-MICA抗體與MICA alpha3結(jié)構(gòu)域的結(jié)合的一系列曲線圖。重組MICA alpha3結(jié)構(gòu)域被生物素化，并被捕捉在鏈親和素包被的珠子表面上。將10 μ g/ml的所示抗體與各個(gè)重組蛋白包被的珠子一起溫育I小時(shí)。隨后清洗珠子，并與FITC-偶聯(lián)的抗人IgG第二抗體一起溫育。通過流式細(xì)胞儀定量FITC熒光。
[0090]圖55.證明腫瘤細(xì)胞被抗-MICA抗體CM24002Ab2和CM33322Ab29標(biāo)記的曲線圖。熒光通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定。
[0091]圖56.證明通過Luminex測(cè)定法確定的抗-MICA抗體CM33322Ab29的MICA等位體特異性的柱狀圖。
[0092]圖57.柱狀圖顯示了抗-促血管發(fā)生素-2特異性抗體抗_Ang6Ab2以及對(duì)照抗體對(duì)三種人促血管發(fā)生素(促血管發(fā)生素-1，2和4)和類促血管發(fā)生素-3的結(jié)合。重組促血管發(fā)生素被固定在ELISA板上，用銪-標(biāo)記的鏈親和素檢測(cè)人重組抗體的結(jié)合。
[0093]詳細(xì)說明
[0094]本公開部分地基于如下的觀察，即通過用四聚體形式的感興趣的抗原標(biāo)記B細(xì)胞，能夠從暴露于疾病的人類受試者獲得針對(duì)疾病中重要治療靶標(biāo)的抗體。如上文背景部分描述的，先前方法至少在下列方面有限制:在人類受試者中鑒定合適B細(xì)胞的效率低和/或方法會(huì)誘導(dǎo)被捕獲任何的B細(xì)胞經(jīng)歷表型改變，從而降低其價(jià)值。相反，本文中描述的方法允許捕獲稀少的針對(duì)特定疾病相關(guān)抗原的記憶B細(xì)胞。如下文所述，該方法需要疾病相關(guān)抗原的四聚體化，正如下面的實(shí)施例中證實(shí)的那樣，該過程可以提高合適記憶B細(xì)胞的鑒定。具體地，本文中的方法允許在受試者初始暴露于抗原后的更長的時(shí)間內(nèi)更高效地捕獲合適的記憶B細(xì)胞。本文中的方法還包括利用通過使用這里所公開的方法獲得的記憶B細(xì)胞的遺傳材料所產(chǎn)生的抗體(和從這些抗體序列產(chǎn)生的肽)。
[0095]本文描述了針對(duì)MHC I類多肽相關(guān)序列A (MICA)的人抗體和靶定促血管發(fā)生素_2的人抗體。這兩種類型的人抗體均是通過涉及使用四聚體抗原的方法從接受了基于細(xì)胞的癌癥疫苗(GM-CSF轉(zhuǎn)導(dǎo)的自體腫瘤細(xì)胞)的患者中鑒定的。
[0096]在一些情況下，本公開提供了用于從選定的人類受試者特異性獲得或靶定具有治療潛力的抗體的方法，以及由其產(chǎn)生的治療組合物。這些方法可以包括:在人類受試者中獲得或靶定免疫細(xì)胞，其中免疫細(xì)胞包括但不僅限于，例如B細(xì)胞和/或記憶B細(xì)胞，從所得的或所靶定的免疫細(xì)胞分離或純化遺傳材料(例如DNA和/或mRNA)，和使用分離或純化的遺傳材料產(chǎn)生治療組合物，例如本文中公開的治療組合物。該方法的進(jìn)一步描述在下文的“方法”部分中提供。
[0097]在一些情況下，本公開提供了治療組合物(例如包括治療肽，包括抗體、抗體片段、抗體衍生物和/或抗體偶聯(lián)物)，該組合物涉及患有或者曾經(jīng)患有狀況或疾病、并對(duì)該狀況或疾病顯示陽性免疫應(yīng)答的受試者中存在的抗體。治療組合物
[0098]在一些情況下，本文中的治療組合物能夠與狀況或疾病相關(guān)的結(jié)合配偶相互作用(例如結(jié)合、特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)，其中治療組合物與結(jié)合配偶之間的相互作用導(dǎo)致針對(duì)該狀況或疾病的陽性免疫應(yīng)答(例如受試者中的疾病或其癥狀的水平降低)。
[0099]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包括(例如包含，基本上由其構(gòu)成，或由其構(gòu)成)表1所示的抗體ID1，2，3，4或5，6，7，8，9或10的可變重鏈(Vh)和/或可變輕鏈(')的至少一個(gè)(例如1、2、3、4、5和/或6個(gè))互補(bǔ)決定區(qū)(OTR)。
[0100]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包括(例如包含，基本上由其構(gòu)成，或由其構(gòu)成)表1所示的抗體ID1，2，3，4，5，6，7，8，9或10的可變重鏈(Vh)和/或可變輕鏈(I)的至少一個(gè)(例如1、2、3、4、5和/或6個(gè))互補(bǔ)決定區(qū)(OTR)，并且其與MHCI類多肽相關(guān)序列A (MICA (例如UniGene Hs.130838))(例如可溶MICA (sMICA))和/或促血管發(fā)生素-2 (例如UniGene Hs.583870)，包括其表位，相互作用(例如結(jié)合、特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。
[0101]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包括表1所示的抗體ID1，6，7，8和/或9的Vh和/或' 的至少一個(gè)⑶R，其中肽與MICA (例如人MICA (例如人MICA (例如可溶MICA (sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，所述肽可以包括至少2個(gè)⑶R，其中該至少2個(gè)⑶R是表1所示的不同抗體的⑶R。換言之，表I所示的抗體ID1，6，7，8和9的⑶R (和FR和/或AA序列)可以互換使用，并能夠被組合產(chǎn)生肽，只要該肽能夠與MICA (例如人MICA (例如可溶MICA(sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)即可。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID1，6，7，8和/或9的Vh和/或' 的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID1，6，7，8和/或9的Vh和Vl的CDR3和表1所示的抗體IDl, 6，7，8和/或9的Vh和/或Vl的CDRl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體IDI，6，7，8和/或9的Vh和/或Vl的⑶R1、CDR2和CDR3。在一些情況下，這些肽包括抗體IDI，6，7，8和/或9的Vh和/或Vl的CDRl、CDR2和CDR3，和表1所示的抗體IDl, 6，7，8和/或9的Vh和/或Vl的至少一個(gè)FR1FR2FR3和/或FR4。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID NO: 2, 149，168，186或204的其中之一和/或SEQ ID NO: 11, 151, 170, 188或206的其中之一。在每種情況下，肽能夠與MICA(例如人MICA (例如可溶MICA(sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽和MICA之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約ΙΟηΜ。
[0102]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體ID6的Vh和/或Vl的至少一個(gè)⑶R，其中肽與MICA (例如人MICA (例如可溶MICA (sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID6的Vh和/或\的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID6的Vh和\的⑶R3和表1所示的抗體ID6的Vh和/或\的⑶Rl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體ID6的Vh和/或Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體ID6的Vh和\的CDRl、CDR2和CDR3和表1所示的抗體ID6的Vh和/或Vl的FRl、FR2、FR3和/或FR4中的至少一個(gè)。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID NO: 149和/或SEQ ID NO: 151。在每種情況下，肽能夠與MICA (例如人MICA (例如可溶MICA (sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽和MICA之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約ΙΟηΜ。
[0103]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體ID7的Vh和/或Vl的至少一個(gè)⑶R，其中肽與MICA (例如人MICA (例如可溶MICA (sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID7的Vh和/或' 的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID7的Vh和\的⑶R3和表I所示的抗體ID7的Vh和/或Vl的⑶Rl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體ID7的Vh和/或\的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體ID7的Vh和/或\的CDRl、CDR2和CDR3和表1所示的抗體ID7的Vh和/或Vl的FRl、FR2、FR3和/或FR4中的至少一個(gè)。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID NO: 168和/或SEQ ID NO: 170。在每種情況下，肽能夠與MICA (例如人MICA (例如可溶MICA (sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽和MICA之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約ΙΟηΜ。
[0104] 在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體ID8的Vh和/或Vl的至少一個(gè)⑶R，其中肽與MICA (例如人MICA (例如可溶MICA (sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID8的Vh和/或' 的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID8的Vh和\的⑶R3和表I所示的抗體ID8的Vh和/或Vl的⑶Rl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體ID8的Vh和/或\的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體ID8的Vh和/或\的CDRl、CDR2和CDR3和表1所示的抗體ID8的Vh和/或Vl的FRl、FR2、FR3和/或FR4中的至少一個(gè)。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID NO: 186和/或SEQ ID NO: 188。在每種情況下，肽能夠與MICA (例如人MICA (例如可溶MICA (sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽和MICA之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約ΙΟηΜ。
[0105]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體ID9的Vh和/或Vl的至少一個(gè)⑶R，其中肽與MICA (例如人MICA (例如可溶MICA (sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID9的Vh和/或' 的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID9的Vh和\的⑶R3和表I所示的抗體ID9的Vh和/或Vl的⑶Rl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體ID9的Vh和/或\的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體ID9的Vh和/或\的CDRl、CDR2和CDR3和表1所示的抗體ID9的Vh和/或Vl的FRl、FR2、FR3和/或FR4中的至少一個(gè)。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID NO:204和/或SEQ ID NO: 206。在每種情況下，肽能夠與MICA (例如人MICA (例如可溶MICA (sMICA)))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽和MICA之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約ΙΟηΜ。
[0106]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體ID2，3，4，5和/或10的Vh或\的至少一個(gè)⑶R，其中所述肽與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽可以包括至少2個(gè)CDR，其中該至少兩個(gè)CDR是來自表1所示的不同抗體的CDR。換言之，表1所示的抗體ID2，3，4，5和10的⑶R (和FR和/或AA序列)可以互換使用，并能夠組合以產(chǎn)生肽，只要該肽能夠與促血管發(fā)生素 -2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)即可。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID2，3，4，5和/或10的Vh和/或\的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID2，3，4，5和/或10的Vh和\的CDR3和表1所示的抗體ID2，3，4，5和/或10的Vh和/或\的CDRl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體ID2，3，4，5和/或10的Vh和/或\的⑶R1XDR2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體ID2，3，4，5和/或10的Vh和/或\的⑶R1、⑶R2和CDR3，和表1所示的抗體ID2, 3，4，5和/或10的Vh和/或Vl的至少一個(gè)FR1FR2FR3和/或FR4。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID NO: 20，38，56，74或222的其中之一和/或SEQID NO: 29，47，65，83或224的其中之一。在每種情況下，肽能夠與促血管發(fā)生素_2 (例如人促血管發(fā)生素-2 (例如UniGene Hs.583870))結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。
[0107]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體ID2的Vh和/或\的至少一個(gè)⑶R，其中所述肽與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID2的Vh和/或\的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID2的Vh和\的⑶R3和表1所示的抗體ID2的Vh和/或\的⑶Rl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體ID2的Vh和/或Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體ID2的Vh和/或Vl的CDR1、CDR2和CDR3和表1所示的抗體ID2的Vh和/或Vl的FR1、FR2、FR3和/或FR4中的至少一個(gè)。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID N0:20和/或SEQ ID N0:29。在每種情況下，肽能夠與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽和促血管發(fā)生素-2之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約 ΙΟηΜ。
[0108]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體ID3的Vh和/或\的至少一個(gè)⑶R，其中肽與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID3的Vh和/或' 的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID3的Vh和\的⑶R3和表1所示的抗體ID3的Vh和/或\的⑶Rl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體ID3的Vh和/或Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體ID3的Vh和/或Vl的CDR1、CDR2和CDR3和表1所示的抗體ID3的Vh和/或Vl的FR1、FR2、FR3和/或FR4中的至少一個(gè)。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID Ν0:38和/或SEQ ID Ν0:47。在每種情況下，肽能夠與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽和促血管發(fā)生素-2之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約 ΙΟηΜ。 [0109]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體ID4的Vh和/或\的至少一個(gè)⑶R，其中肽與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID4的Vh和/或' 的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID4的Vh和\的⑶R3和表1所示的抗體ID4的Vh和/或Vl的⑶Rl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體ID4的Vh和/或Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體ID4的Vh和/或Vl的CDR1、CDR2和CDR3和表1所示的抗體ID4的Vh和/或Vl的FR1、FR2、FR3和/或FR4中的至少一個(gè)。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID Ν0:56和/或SEQ ID Ν0:65。在每種情況下，肽能夠與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽與促血管發(fā)生素-2之間的結(jié)合親和力可為Χ-Υ，例如Χ-Υ，Χ-Υ。在一些情況下，肽和促血管發(fā)生素-2之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約ΙΟηΜ。
[0110]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體ID5的Vh和/或\的至少一個(gè)⑶R，其中肽與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID5的Vh和/或' 的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體ID5的Vh和\的⑶R3和表1所示的抗體ID5的Vh和/或\的⑶Rl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體ID5的Vh和/或Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體ID5的Vh和/或Vl的CDR1、CDR2和CDR3和表1所示的抗體ID5的Vh和/或Vl的FR1、FR2、FR3和/或FR4中的至少一個(gè)。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID Ν0:74和/或SEQ ID Ν0:83。在每種情況下，肽能夠與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽和促血管發(fā)生素-2之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約 ΙΟηΜ。
[0111]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含表1所示的抗體IDlO的
/或'的至少一個(gè)CDR，其中肽與促血管發(fā)生素-2 (例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體IDlO的Vh和/或 ' 的⑶R3。在一些情況下，這些肽包括表1所示的抗體IDlO的Vh和\的⑶R3和表1所示的抗體IDlO的Vh和/或\的⑶Rl和/或⑶R2。在一些情況下，這些肽包括抗體IDlO的Vh和/或Vl的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一些情況下，這些肽包括抗體IDlO的Vh和/或Vl的CDR1、CDR2和CDR3和表1所示的抗體IDlO的Vh和/或Vl的FR1、FR2、FR3和/或FR4中的至少一個(gè)。在一些情況下，這些肽包括SEQ ID Ν0:222和/或SEQ ID Ν0:224。在每種情況下，肽能夠與促血管發(fā)生素-2(例如人促血管發(fā)生素-2)結(jié)合(例如特異性結(jié)合和/或免疫特異性結(jié)合)。在一些情況下，肽和促血管發(fā)生素-2之間的結(jié)合親和力為大約0.1nM-1 μ Μ，例如大約IOnM0
[0112]在一些情況下，與促血管發(fā)生素-2結(jié)合的肽還能夠與促血管發(fā)生素-1 (例如Unigene Hs.369675)和/或促血管發(fā)生素_4(例如Unigene Hs.278973)結(jié)合。例如，在一些情況下，與促血管發(fā)生素-2結(jié)合的肽還能夠與除促血管發(fā)生素-1之外的其它相關(guān)抗原(除促血管發(fā)生素-1之外)特異性和/或免疫特異性結(jié)合。在一些情況下，與促血管發(fā)生素-2結(jié)合的肽還能夠與除促血管發(fā)生素-4之外的其它相關(guān)抗原(除促血管發(fā)生素-4之外)特異性和/或免疫特異性結(jié)合。
[0113]在一些情況下，治療組合物可以包括肽，所述肽包含:SEQ ID NO: 2和/或SEQ IDNO: 11 ；SEQ ID NO: 149 和 / 或 SEQ ID NO: 151 ；SEQ ID N0:168 和 / 或 SEQ ID NO: 170 ；SEQID NO: 186 和 / 或 SEQ ID NO: 188 ；SEQ ID NO:204 和 / 或 SEQ ID NO:206 ；SEQ ID NO:20和 / 或 SEQ ID NO:29 ；SEQ ID NO:38 和 / 或 SEQ ID NO:47 ;SEQ ID NO:56 和 / 或 SEQ IDNO:65 ；SEQ ID NO:74 和 / 或 SEQ ID NO:83 JPSEQ ID NO:222 和 / 或 SEQ ID NO:224
【權(quán)利要求】
1.一種包含與MHC I類多肽相關(guān)序列A(MICA)免疫特異性結(jié)合的肽的組合物，其中所述肽包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID1，6，7，8或9的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R) 3，和具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID1，6，7，8或9的Vl 的 CDR3。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述肽包含表1所示的抗體ID1，6，7，8或9的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3，和表1所示的抗體IDl, 6，7，8或9的Vl的CDR3。
3.權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)的組合物，其中所述肽包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體IDI，6，7，8或9的Vh的CDR2，或具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體IDI，6，7，8或9的Vl的⑶R2，或者包含上述兩者。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述肽包含表1所示的抗體ID1，6，7，8或9的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)⑶R2，或表1所示的抗體IDI，6，7，8或9的Vl的⑶R2，或者包含上述兩者。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的組合物，其中所述肽包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體IDI，6，7，8或9的Vh的CDRl，或具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體IDI，6，7，8或9的Vl的⑶Rl，或者包含上述兩者。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述肽包含表1所示的抗體ID1，6，7，8或9的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)⑶Rl，或表1所示的抗體IDI，6，7，8或9的Vl的⑶Rl，或者包含上述兩者。
7.權(quán)利要求1-6 中任一項(xiàng)的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含: 與SEQ ID NO: 2, 149, 168, 186,或204具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于CDR1、CDR2和CDR3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID-1, 6，7，8或9的Vh的CDRl、CDR2和CDR3,并在CDRl、CDR2和CDR3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO:2, 149，168，186，或204中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體ID-1，6，7，8或9的Vh的FR1、FR2、FR3、FR4 具有至少 80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99%^ 100%的同一性的氨基酸序列；和 與SEQ ID NO: 11, 151, 170, 189，或206具有同一性的Vl鏈，其中對(duì)應(yīng)于CDR1、CDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體I的\的⑶R1XDR2和⑶R3，并在⑶R1XDR2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO: 11, 151, 170, 189,或206中對(duì)應(yīng)于FRl、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體I的\的FRl、FR2、FR3、FR4具有至少80%,85%,90%,95%,96%,97%,98,99% ^ 100% 的同一性的氨基酸序列。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，其包含:包含SEQIDNO: 2，149，168，186，或 204 的 Vh 鏈、和包含 SEQ ID NO: 11，151，170，189，或 206 的'鏈。
9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的組合物，其還包含抗癌治療劑。
10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的組合物，其配制為藥物組合物。
11.一種包含與促血管發(fā)生素免疫特異性結(jié)合的肽的組合物，其中所述肽包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3，和具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2，3，4或5的' 的CDR3。
12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述肽包含表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 3，和表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vl的CDR3。
13.權(quán)利要求11-12中任一項(xiàng)的組合物，其中所述肽包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2，3，4，或10的Vh的CDR2，或具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的\的⑶R2，或者包含上述兩者。
14.權(quán)利要求13的組合物，其中所述肽包含表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)⑶R2，或表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的\的⑶R2，或者包含上述兩者。
15.權(quán)利要求11-14中任一項(xiàng)的組合物，其中肽包含具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的⑶R1，或具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換的表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的\的⑶R1，或者包含上述兩者。
16.權(quán)利要求15的組合物，其中肽包含表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的Vh的互補(bǔ)決定區(qū)⑶R1，或表1所示的抗體ID2、3、4、5或10的\的⑶R1，或者包含上述兩者。
17.權(quán)利要求11-16中任一項(xiàng)的組合物，其中肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含: 與SEQ ID NO: 20具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID2的Vh的⑶R1XDR2和⑶R3，并在⑶R1XDR2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQID NO: 20中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID2 的 Vh 的 FR1、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97% ,98,99%,或100%的同一性的氨基酸序列；和 與SEQ ID NO:29具有同一性的 '鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID2的\的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換， 并且SEQ ID NO: 29中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID2 的 Vl 的 FRl、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97% ,98,99%、或100%的同一性的氨基酸序列。
18.權(quán)利要求17的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，其包含:包含SEQID NO:20的Vh鏈、和包含SEQ ID NO: 29的Vl鏈。
19.權(quán)利要求11-16中任一項(xiàng)的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含: 與SEQ ID NO: 38具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID3的Vh的⑶R1XDR2和⑶R3，并在⑶R1XDR2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQID NO: 38中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID3 的 Vh 的 FR1、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97% ,98,99%,或100%的同一性的氨基酸序列；和 與SEQ ID NO:47具有同一性的\鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID3的\的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO:47中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID3 的 Vl 的 FRl、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97% ,98,99%、或100%的同一性的氨基酸序列。
20.權(quán)利要求19的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，其包含:包含SEQID NO:38的Vh鏈、和包含SEQ ID NO:47的Vl鏈。
21.權(quán)利要求11-16中任一項(xiàng)的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含:與SEQ ID NO:56具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID4的Vh的⑶R1XDR2和⑶R3，并在⑶R1XDR2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQID NO: 56中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID4 的 Vh 的 FR1、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97% ,98,99%,或100%的同一性的氨基酸序列；和 與SEQ ID NO:65具有同一性的Vl鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID4的\的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO:65中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID4 的 Vl 的 FRl、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97% ,98,99%、或100%的同一性的氨基酸序列。
22.權(quán)利要求21的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，其包含:包含SEQID NO:56的Vh鏈、和包含SEQ ID NO:65的Vl鏈。
23.權(quán)利要求11-16中任一項(xiàng)的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含: 與SEQ ID NO: 74具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID-5的Vh的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQID NO: 74中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID-5 的 Vh 的 FR1、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97% ,98,99%、或100%的同一性的氨基酸序列；和 與SEQ ID NO:83具有同一性的Vl鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID-5的\的⑶R1XDR2和⑶R3，并在⑶R1XDR2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO:83中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID-5 的 Vl 的 FR1、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97% ,98,99%、或100%的同一性的氨基酸序列。
24.權(quán)利要求23的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，其包含:包含SEQID NO:74的Vh鏈、和包含SEQ ID NO:83的Vl鏈。
25.權(quán)利要求11-24中任一項(xiàng)的組合物，其中所述肽與促血管發(fā)生素-2免疫特異性結(jié)合。
26.權(quán)利要求11-25中任一項(xiàng)的組合物，其還包含抗癌治療劑。
27.權(quán)利要求11-26中任一項(xiàng)的組合物，其配制為藥物組合物。
28.一種用于治療受試者中的癌癥的方法，該方法包括向受試者施用根據(jù)權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)的組合物。
29.權(quán)利要求11-16中任一項(xiàng)的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段包含: 與SEQ ID NO: 222具有同一性的Vh鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1、⑶R2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID-10的Vh的CDRl、CDR2和CDR3,并在CDRl、CDR2和CDR3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO:74中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID-10 的 Vh 的 FR1、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97%,98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列；和與SEQ ID NO: 224具有同一性的Vl鏈，其中對(duì)應(yīng)于⑶R1XDR2和⑶R3的區(qū)域包含表1所示的抗體ID-1O的\的⑶R1、⑶R2和⑶R3，并在⑶R1、⑶R2和⑶R3區(qū)內(nèi)具有5個(gè)或更少的保守氨基酸替換，并且SEQ ID NO:224中對(duì)應(yīng)于FR1、FR2、FR3、FR4的區(qū)域包含與表1所示的抗體 ID-10 的 Vl 的 FR1、FR2、FR3、FR4 具有至少 80% ,85% ,90% ,95% ,96% ,97%,.98、99%、或100%的同一性的氨基酸序列。
30.權(quán)利要求23的組合物，其中所述肽是抗體或抗體片段，其包含:包含SEQIDNO: 222 的 Vh 鏈、包含 SEQ ID NO: 224 的'鏈。
31.權(quán)利要求1-8和11-16中任一項(xiàng)的組合物，其還包含選自下組的組氨酸去乙?；敢种苿?HDAC):異羥肟酸、伏立諾他、辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)、曲古抑菌素A(TSA)、LAQ824、帕比司他(LBH589)、belinostat (PXDlOl)、ITF2357italfarmaco SpA,環(huán)四肽、cbpsip印tide (羅米地辛，F(xiàn)K228)、苯酰胺；恩替諾特(SNDX-275/MS-275)、MGCD0103、短鏈脂肪酸、丙戊酸、丁酸苯酯、AN-9、Pivanex、CHR-3996 和 CHR-2845。
32.權(quán)利要求1-8和11-16中任一項(xiàng)的組合物，其還包含選自下組的蛋白酶體抑制劑:bortezomib、NP1-0052、carfilzomib(PR-171)、CEP18770 和 MLN9708。
33.一種從受 試者獲得針對(duì)自身抗原的免疫細(xì)胞的方法，該方法包括 鑒定對(duì)自身抗原呈現(xiàn)陽性免疫應(yīng)答的受試者； 提供多聚體形式的該自身抗原； 使所述多聚體形式的自身抗原與來自對(duì)該自身抗原呈現(xiàn)陽性免疫應(yīng)答的受試者的樣品相接觸，和 獲得與所述多聚體形式的自身抗原結(jié)合的免疫細(xì)胞。
34.一種從癌癥患者獲得針對(duì)自身抗原的免疫細(xì)胞的方法，該方法包括 鑒定對(duì)自身抗原呈現(xiàn)陽性免疫應(yīng)答的受試者； 提供多聚體形式的該自身抗原； 使所述多聚體形式的自身抗原與來自對(duì)該自身抗原呈現(xiàn)陽性免疫應(yīng)答的受試者的樣品相接觸，和 獲得與所述多聚體形式的自身抗原結(jié)合的免疫細(xì)胞。
35.權(quán)利要求33-34中任一項(xiàng)的方法，其中所述多聚體形式的自身抗原是四聚體形式的自身抗原。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述多聚體形式的自身抗原包含可檢測(cè)的部分。
37.權(quán)利要求33的方法，其中該受試者是哺乳動(dòng)物。
38.權(quán)利要求37的方法，其中該受試者是人。
39.權(quán)利要求33的方法，其中該樣品來自人受試者。
40.權(quán)利要求33的方法，其中該自身抗原與狀況或疾病相關(guān)。
41.權(quán)利要求33的方法，其中該自身抗原與癌癥相關(guān)。
42.權(quán)利要求40的方法，其中該狀況或疾病是選自下組的癌癥:黑素瘤、肺癌、乳腺癌、腎癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌和結(jié)腸癌、淋巴瘤或白血病。
43.權(quán)利要求33-34中任一項(xiàng)的方法，其中所述自身抗原是MCHI類鏈相關(guān)蛋白A(MICA)。
44.權(quán)利要求33-34中任一項(xiàng)的方法，其中所述自身抗原是促血管發(fā)生素。
45.權(quán)利要求33-34中任一項(xiàng)的方法，其中所述免疫細(xì)胞是記憶B細(xì)胞。
46.權(quán)利要求33-34中任一項(xiàng)的方法，其中所述自身抗原是癌癥特異性自身抗原。
47.權(quán)利要求33的方法，其中所述受試者是癌癥患者。
【文檔編號(hào)】C07K16/00GK103958543SQ201280059185
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月30日
【發(fā)明者】K.W.烏徹普芬尼格, B.弗朗茲, 小肯尼斯.梅, G.德拉諾夫, F.S.霍迪, C.哈維 申請(qǐng)人:達(dá)納-法伯癌癥研究所股份有限公司