一種預(yù)濃縮破壁提取微生物油脂的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種預(yù)濃縮破壁微生物及提取微生物油脂的方法，該方法包括將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到10－14的范圍，和濃縮前述步驟所得的發(fā)酵液，從而使所述微生物細胞破壁。破壁之后可對油脂等活性成分進行提取。本發(fā)明方法預(yù)濃縮和破壁合為一步完成，在濃縮的過程中完成破壁，工藝簡單，破壁后體系粘度低，利于后續(xù)提油操作，通過簡單易行的方法提取微生物細胞中的油脂等活性成分。
【專利說明】一種預(yù)濃縮破壁提取微生物油脂的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物油脂提取領(lǐng)域，具體涉及預(yù)濃縮破壁提取微生物油脂的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]通過培養(yǎng)收獲的微生物細胞一般存在于水相體系中，顆粒細小，含油量高，具有堅韌的細胞壁。因此傳統(tǒng)的植物油提油工藝不適用于微生物油脂的制備。一般微生物油脂的制備包括4個步驟:1.在發(fā)酵罐中利用適當培養(yǎng)基對微生物進行培養(yǎng)；2.收獲微生物的生物質(zhì)并加以處理(如洗滌/脫水或干燥)；3.細胞破壁，包括物理處理(蒸煮，蒸汽爆破)，化學(xué)(熱堿，螯合劑)，機械(壓榨，均質(zhì)，研磨)等手段；4.從細胞碎片中提取微生物油脂(如溶劑萃取，直接離心分離)。
[0003]CN101429467B采用熱堿法破壁提取微生物油脂和蛋白質(zhì)。該法調(diào)節(jié)生物質(zhì)含量為2.5%~10%，調(diào)節(jié)pH至7.5~12，通過ll(Tl40°C飽和蒸汽處理3~30min實現(xiàn)破壁。通過離心，破乳(調(diào)PH至5~7)，油水分離獲得微生物油脂。該法生物質(zhì)含量低，后續(xù)提油階段需要大量溶劑，脫溶能耗高；同時較多的水分使得溶劑提油階段極易乳化，提油效率低；在水相體系內(nèi)采用11(T140°C高溫處理，熱敏性油脂易變質(zhì)。
[0004]CN1226923，CN1817846A采用干法提油方式。其中CN1226923將生物質(zhì)干燥到含水量<20%，CN1817846A將生物質(zhì)干燥到含水量≤10%。該法將微生物油脂提油與傳統(tǒng)的油脂浸出工藝相結(jié)合。缺點也較為明顯:1.發(fā)酵液的含水量、0%，通過熱干燥的方式除去50%左右的水分，能耗巨大；2.通過干燥的方式造粒提油，微生物細胞缺少破壁過程，油脂提油率偏低；3.熱干燥過程中，微生物不可避免的經(jīng)受了熱處理，熱敏性油脂易變質(zhì)。
[0005]0附011685018，0附013238654采用預(yù)濃縮機械破壁提油工藝。其中，0附011685018采用絮凝劑和乙醇預(yù)濃縮，CN101323865A采用吸水劑預(yù)濃縮。通過預(yù)濃縮可以提高破壁效率，減少后續(xù)提取溶劑的用量。缺點也較為明顯:1.采用絮凝劑和乙醇預(yù)濃縮，絮凝劑會殘留在柏中，影響柏的后續(xù)使用，同時需要增加乙醇回收裝置，設(shè)備投入和運行成本較高；
2.采用吸水劑預(yù)濃縮，吸水劑的清洗會產(chǎn)生大量廢水，同時吸水劑的復(fù)活采用加熱干燥的方式，能耗較高；3.機械破壁發(fā)酵液體系粘度增加明顯，不利于后續(xù)溶劑提油。
[0006]現(xiàn)有的預(yù)濃縮方法主要包括:絮凝沉降、乙醇濃縮、離心濃縮、壓濾濃縮。其中，絮凝沉降濃縮程度較小，一般用于低密度培養(yǎng)(生物質(zhì)濃度低)發(fā)酵液的濃縮；乙醇濃縮將消耗大量乙醇，形成乙醇水溶液，乙醇回收、提純能耗較高；離心濃縮濃縮程度有限，濃縮后生物質(zhì)濃度一般< 20% ;壓濾濃縮一般與絮凝沉降結(jié)合適用，多用于低密度培養(yǎng)發(fā)酵液濃縮，其濃縮效果受限于菌體性狀及大小。以上濃縮方法均無法實現(xiàn)濃縮和破壁同時完成。
[0007]通過以上分析可以看出，傳統(tǒng)的熱堿法破壁提油存在溶劑耗量大、易乳化等缺點；通過干燥后破壁提油可解決上述問題，卻又帶來能耗高、提油率偏低等缺點；采用先預(yù)濃縮后破壁方法，可在一定程度上克服熱堿法和干法破壁提油的缺點，但又帶來新的問題，如工藝繁瑣、濃縮過程中引入其他物質(zhì)、破壁后體系粘度高等。
[0008]本發(fā)明旨在解決上述問題，將預(yù)濃縮和破壁合為一步完成，即通過調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH，然后進行真空濃縮，在濃縮的過程中完成破壁。該法工藝簡單，破壁后體系粘度低，利于后續(xù)提油操作，同時也可避免熱堿法和干燥后破壁提油的常見問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明將預(yù)濃縮和破壁合為一步完成，即通過調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值，然后進行真空預(yù)濃縮，在預(yù)濃縮的過程中完成細胞破壁，減少后續(xù)的破壁設(shè)備投入和運行成本，從而通過簡單易行的方法提取微生物細胞中的油脂等活性成分。
[0010]本發(fā)明適合處理高密度培養(yǎng)的發(fā)酵液，可將發(fā)酵液濃縮至60%以上。
[0011]因此，本發(fā)明提供一種對微生物細胞實施破壁的方法，所述方法包括:
[0012]將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到10 — 14的范圍；和
[0013]濃縮前述步驟所得的發(fā)酵液；
[0014]從而使所述微生物細胞破壁。
[0015]本發(fā)明還提供一種提取微生物活性成分的方法，所述方法包括:
[0016]將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到10 - 14的范圍；
[0017]濃縮前述步驟所得的發(fā)酵液，從而使所述微生物細胞破壁；和
[0018]從細胞碎片中提取微生物細胞的活性成分。
[0019]在一【具體實施方式】中，所述方法包括向發(fā)酵液中添加堿、堿溶液、或能生成堿的物質(zhì)，從而將發(fā)酵液的PH值調(diào)節(jié)到10-14的范圍。
[0020]在一【具體實施方式】中，所述堿選自堿金屬堿、堿土金屬堿、或其混合物。
[0021]在一【具體實施方式】中，所述堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀和/或氫氧化鈣。
[0022]在一【具體實施方式】中，所述微生物為單細胞微生物。
[0023]在一【具體實施方式】中，所述微生物為產(chǎn)油微生物。
[0024]在一【具體實施方式】中，使用所述堿將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到11 - 12.5的范圍。
[0025]在一【具體實施方式】中，所述濃縮為真空濃縮。
[0026]在一【具體實施方式】中，所述真空濃縮的真空度為29000Pa_66000Pa。
[0027]在一【具體實施方式】中，向所述發(fā)酵液中添加氫氧化鉀，將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到
11.5-12.5 的范圍。
[0028]在一【具體實施方式】中，向所述發(fā)酵液中添加氫氧化鉀和氫氧化鈣，將發(fā)酵液的pH值范圍調(diào)節(jié)到11.5-12.5的范圍。
[0029]在一【具體實施方式】中，以發(fā)酵液質(zhì)量計，氫氧化鈣的添加量為0.1% -0.6%。
[0030]在一【具體實施方式】中，所述活性成分選自油脂和蛋白質(zhì)。
[0031]在一【具體實施方式】中，適用于本發(fā)明方法提取微生物油脂的微生物選自破囊壺菌屬(Thraustochytrium)的微生物、裂殖壺菌屬(Schizochytrium)的微生物、被孢霉屬(Mortierella)的微生物、Althornia屬的微生物、Aplanochytrium屬的微生物、Japonochytrium 屬的微生物、Labyrinthula 屬的微生物、Labyrinthuloides 屬的微生物、Crypthecodinium屬的微生物，褐指藻屬(Phaeodactylum)的微生物，微綠球藻屬(Nanochloropsis)的微生物,裸藻屬(Euglena)的微生物，四膜蟲屬(Tetrahymena)的微生物，螺旋藻屬(Spirulina)的微生物,和吾肯氏壺藻屬(Ulkenia)的微生物，隱甲藻屬(甲藻)(Crypthecodinium (Dinofagellates))的微生物，以及它們的混合物。優(yōu)選的，所述微生物選自破囊壺菌屬的微生物、裂殖壺菌屬的微生物、隱甲藻屬(甲藻)的微生物，以及它們的混合物。
[0032]在一【具體實施方式】中，在70°C _90°C實施所述真空濃縮。在某些實施方式中，將濃縮溫度控制在75 °C -85 °C。
【具體實施方式】
[0033]本發(fā)明的方法可用于從各種微生物中提取各種脂質(zhì)，所述脂質(zhì)含有膽固醇，植物甾醇，鏈留醇，生育三烯酚，生育酚，泛醌，類胡蘿卜素例如β_胡蘿卜素，葉黃素，黃體素，番茄紅素，蝦青素，玉米黃質(zhì)，角黃素和/或脂肪酸例如結(jié)合亞油酸，ω-3和ω-6高不飽和脂肪酸，例如二十碳五烯酸，二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸，和花生四烯酸，十八碳四烯酸，雙高Y-亞麻酸和Y-亞麻酸或它們的混合物，更優(yōu)選的是，ω-3高不飽和脂肪酸，例如二十二碳六烯酸(DHA)，二十碳五烯酸(EPA)，和/或二十二碳五烯酸(DPA)(即ω -3形式的DPA)，尤其是含相對大量DHA的脂質(zhì)，包含ω-6高不飽和脂肪酸例如花生四烯酸和二十二碳五烯酸(DPA)(即ω-6形式的DPA)的脂質(zhì)。
[0034]適用于本發(fā)明方法提取微生物油脂的微生物包括本領(lǐng)域周知的各種產(chǎn)油微生物，包括但不限于各種藻類、細菌、真菌和原生生物，例如包括微藻類，如綠藻門小球藻屬中的蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa),普通小球藻(Chlorella vulgaris),捕圓小球藻(Chlorella ellipsoidea)，Chlorella emersonii，Chlorella sorokiniana，Chlorella saccharophila， Chlorella regularis，微小小球藻(Chlorella minutissima)， Chlorella protothecoides,小球藻(Chlorella zofingiensis),以及綠藻門 中的 Brachiomonas submarina, Chlamydobonas reinhardtii， Chlamydomonasacidophila，雨生紅球藻(Haematococcus pluvialis)，湖泊紅球藻(HaematococcusIacustris)， 斜生柵藻(Scenedesmus obliquus)， Spongiococcum exetriccium，Tetraselmis suecica，扁藻(Tetraselmis chuii)，四肩突四鞭藻(Tetraselmistetrathele)，Tetraselmisverrucosa,微芒藻(Micractinium pusillum);娃藻門的筒柱藻(Cylindrotheca fusiformis)， Nitzschia laevis， Nitzschia alba, Nitzschiafonticola，Navicula incerta,羽紋娃藻(Navicula pelliculosa);藍藻門的多變魚渥藻(Anabaena variabilis);金藻門的 Poterioochromonas malhamensis ;甲藻門的前環(huán)藻(Amphidinium carterae)，寇氏隱甲藻(Crypthecodinium cohnii);裸藻門的 Euglenagricilis ;和紅藻門的單細胞紅藻(Galdieria sulphuraria)，以及它們的混合物。
[0035]適用于本發(fā)明方法提取微生物油脂的微生物還可以包括選自破囊壺菌屬(Thraustochytrium)的微生物、裂殖壺菌屬(Schizochytrium)的微生物、被孢霉屬(Mortierella)的微生物、Althornia屬的微生物、Aplanochytrium屬的微生物、Japonochytrium 屬的微生物、Labyrinthula 屬的微生物、Labyrinthuloides 屬的微生物、Crypthecodinium屬的微生物，褐指藻屬(Phaeodactylum)的微生物，微綠球藻屬(Nanochloropsis)的微生物，裸藻屬(Euglena)的微生物，四膜蟲屬(Tetrahymena)的微生物，螺旋藻屬(Spirulina)的微生物，和吾肯氏壺藻屬(Ulkenia)的微生物，隱甲藻屬(甲藻)(Crypthecodinium (Dinofagellates))的微生物，以及它們的混合物。優(yōu)選的，所述微生物選自破囊壺菌屬的微生物、裂殖壺菌屬的微生物、隱甲藻屬(甲藻)的微生物，以及它們的混合物。更優(yōu)選的，所述微生物為Schizochytrium sp.。更優(yōu)選的,所述微生物為ATCC20888和/或SR21。
[0036]本發(fā)明方法可用于提取微生物油脂。油脂包括“藻油”。“藻油”指由微藻細胞產(chǎn)生的脂質(zhì)組分，如膽固醇，植物留醇，鏈留醇，生育三烯酚，生育酚，泛醌，類胡蘿卜素和葉黃素例如胡蘿卜素，黃體素，番茄紅素，蝦青素，玉米黃質(zhì)，角黃素，和脂肪酸例如結(jié)合亞油酸，ω-3和ω-6高不飽和脂肪酸，例如，二十碳五烯酸，二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸，花生四烯酸，十八碳四烯酸，雙高Y-亞麻酸和Y-亞麻酸中的一種或多種。
[0037]優(yōu)選的是，微生物包含的脂質(zhì)至少約為20%重量，更優(yōu)選的是至少約30%，最優(yōu)選的是至少約40%。更優(yōu)選的是至少約20%的脂質(zhì)是膽固醇，植物留醇，鏈留醇，生育三烯酚，生育酚，泛醌，類胡蘿卜素和葉黃素例如胡蘿卜素，黃體素，番茄紅素，蝦青素，玉米黃質(zhì)，角黃素，和脂肪酸例如結(jié)合亞油酸，ω-3和ω-6高不飽和脂肪酸，例如，二十碳五烯酸，二十二碳五烯酸，二十二碳六烯酸，花生四烯酸，十八碳四烯酸，雙高Y -亞麻酸和Y-亞麻酸中的一種或多種,優(yōu)選的是至少約30%，更優(yōu)選的是至少約40%。
[0038]提取完油脂后，可將固渣和水溶液分離，水溶液經(jīng)過濾、等電點沉淀、干燥等得到蛋白質(zhì)粉末；固渣經(jīng)乙醇水溶液浸提，得到低聚糖；剩余柏渣經(jīng)干燥、造粒后可用于動物或水產(chǎn)飼料。
[0039]在本發(fā)明的一個具體實施例中，使用上述方法進行細胞破壁的微生物為單細胞微生物。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，使用上述方法進行細胞破壁的微生物為產(chǎn)油的單細胞微生物。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，使用上述方法進行細胞破壁的微生物為產(chǎn)油的單細胞微生物。
[0040]在另一個實施例中，使用上述方法進行細胞破壁的微生物為產(chǎn)蛋白的單細胞微生物。
[0041]本發(fā)明通過向發(fā)酵液中添加堿或堿溶液或能生成堿的物質(zhì)來調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH指。通常，獲得發(fā)酵液后，可直接向發(fā)酵液中加入堿或堿溶液，或者可先對發(fā)酵液實施巴氏滅菌滅活，然后再加入堿或堿溶液或能生成堿的物質(zhì)。
[0042]適用于本發(fā)明的堿包括但不限于堿金屬形成的堿(即堿金屬堿)、堿土金屬形成的堿(即堿土金屬堿)或其混合物，例如氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鈣或其任意混合物。優(yōu)選是能溶于水或微溶于水的堿?；蛘?，也可使用其它能在發(fā)酵液中反應(yīng)形成本發(fā)明所用的堿及PH范圍的成分，例如，可在發(fā)酵液中加入適量的CaO，其與水發(fā)生反應(yīng)后可生產(chǎn)本發(fā)明所需的氫氧化鈣。
[0043]優(yōu)選地，本發(fā)明使用氫氧化鉀或氫氧化鉀與氫氧化鈣的混合物。本發(fā)明的堿可以固體或水溶液的形式使用。
[0044]本發(fā)明通過堿或堿溶液來調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH在10 — 14的范圍之內(nèi)。因此，對用于調(diào)節(jié)發(fā)酵液PH值的物質(zhì)(例如本文所述的堿或堿溶液，或能在發(fā)酵液中生成所述堿的物質(zhì))的量并無特別限制，技術(shù)人員可根據(jù)發(fā)酵液的量以及所用的堿和/或堿溶液的濃度等因素，選擇適當量的物質(zhì)加到發(fā)酵液中，以將發(fā)酵液的pH值控制在10 - 14的范圍之內(nèi)。
[0045]在使用堿或堿溶液混合物的情況下，混合物中各堿的比例也無特殊限制，以能將發(fā)酵液的pH控制在10 - 14的范圍之內(nèi)為準。但在使用氫氧化鈣與其它堿的混合物的實施方式中，通常，以調(diào)節(jié)PH前發(fā)酵液質(zhì)量為基準，氫氧化鈣的添加量為0.1 % -0.6 %。在某些實施方式中，以調(diào)節(jié)PH前發(fā)酵液質(zhì)量為基準，氫氧化鈣的添加量在例如0.1% -0.5%、0.1% -0.4%,0.2% -0.3%的范圍內(nèi)。在使用氫氧化鈣和氫氧化鉀的混合物的實施方式中，以調(diào)節(jié)PH前發(fā)酵液質(zhì)量為基準，氫氧化鈣的添加量可以在例如0.1% -0.5%，例如0.1%-0.3%的范圍內(nèi)。
[0046]在某些優(yōu)選的實施方式中，通過堿或堿溶液將發(fā)酵液的pH值控制在11 一 13的范圍之內(nèi)。在其它優(yōu)選的實施方式中，通過堿或堿溶液將發(fā)酵液的pH控制在11.5 — 12.5的范圍之內(nèi)。
[0047]在其它實施方式中，當使用氫氧化鉀時，可用氫氧化鉀將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到
11.5-12.5的范圍；當使用氫氧化鈉時,可用氫氧化鈉將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到11.5-12.5的范圍；當使用氫氧化鈣時，可用氫氧化鈣將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到11.5-12.5的范圍；當使用氫氧化鉀和氫氧化鈣時，可用它們將發(fā)酵液的pH值范圍調(diào)節(jié)到11.5-12.5。
[0048]調(diào)節(jié)好發(fā)酵液的pH值之后，可對所述發(fā)酵液實施真空濃縮步驟。在某些優(yōu)選的實施方式中，優(yōu)選的真空范圍在29000Pa-66000Pa。在其它優(yōu)選實施例中，真空范圍控制在44000Pa到66000Pa的范圍之內(nèi)。[0049]濃縮溫度通常為70°C _90°C。在某些實施方式中，將濃縮溫度控制在75°C _85°C。
[0050]通過濃縮時間控制濃縮程度，優(yōu)選的濃縮比例為濃縮后發(fā)酵液干物質(zhì)含量為25%-55%。
[0051]經(jīng)真空濃縮后，即可獲得破壁的產(chǎn)物。
[0052]可對破壁的細胞產(chǎn)物實施進一步的處理，包括調(diào)節(jié)pH值、活性成分如油脂、蛋白等的提取。
[0053]油脂的提取方法可包括向采用上述步驟獲得的預(yù)濃縮的產(chǎn)物中加入適量溶劑(如預(yù)濃縮液:正己烷=1:3w/v)，充分混合后，分離出混合油(油脂和溶劑的混合物)，脫除溶劑得到毛油。溶劑抽提的過程中，加入適量乙醇，有利于提高抽提效率。應(yīng)理解，還可采用其它的油脂提取技術(shù)來提取油脂。油脂提取完成之后，還可采用常規(guī)的技術(shù)手段對殘渣中的其它活性成分例如蛋白質(zhì)進行提取。
[0054]本發(fā)明有以下優(yōu)點:
[0055]1.通過pH調(diào)節(jié)，減低了發(fā)酵液粘度，有效提高了濃縮效率(見表1)；
[0056]2.真空濃縮可減少物料與氧氣的接觸，降低濃縮溫度，提高油脂品質(zhì)；
[0057]3.通過篩選合適的堿，可有效抑制濃縮過程中的起泡現(xiàn)象，利于濃縮操作(見表
2);
[0058]4.濃縮的過程完成破壁(見表3)，減少破壁的設(shè)備投入和運行成本；
[0059]5.堿法預(yù)濃縮，可提高濃縮程度，降低體系粘度，減少后續(xù)提取溶劑的用量(見表
4)；
[0060]6.預(yù)濃縮破壁可抑制正己烷抽提過程中的乳化現(xiàn)象(見表9)。
[0061]與CN101429467B相比，本發(fā)明采用真空預(yù)濃縮，加熱溫度較低，利于油脂品質(zhì)提聞。
[0062]與CN1226923、CN1817846A相比，本發(fā)明適度濃縮，無需干燥至水分< 10%，節(jié)約能耗；本發(fā)明在預(yù)濃縮的過程中完成破壁，油脂提取率相對較高；本發(fā)明采用真空干燥，溫度相對較低，有利于提高油脂品質(zhì)。[0063]與CN101168501B、CN101323865A相比，本發(fā)明在預(yù)濃縮過程中即可完成破壁，無需增加破壁設(shè)備投入和運行成本；本發(fā)明在預(yù)濃縮的過程中不會引入絮凝劑，影響柏的使用；本發(fā)明在預(yù)濃縮的過程中不會引入乙醇，無需乙醇回收設(shè)備；本發(fā)明在預(yù)濃縮的過程中不會引入吸水劑，避免吸水劑回收復(fù)活成本。
[0064]下面將以具體實施例的方式闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅僅是闡述性的，并非限制本發(fā)明的范圍。實施例中所使用到的材料、試劑等，除非另有說明，否則為市場上可購得的各種材料和試劑。
[0065]對照實施例:熱堿法破壁提油(未濃縮發(fā)酵液)
[0066]稱取發(fā)酵液(Schizochytyium sp.自行培養(yǎng)獲得,滅菌后生物質(zhì)含量15.5%,干基含油38.7%) 100g,調(diào)節(jié)pH值后，常壓下加熱攪拌破壁。采用正己烷提取破壁后的發(fā)酵液。具體步驟為:
[0067]1.調(diào)節(jié)pH值:采用30%K0H調(diào)節(jié)pH值至12。
[0068]2.加熱破壁:80°C，攪拌加熱30min。
[0069]3.溶劑抽提:向破壁后的發(fā)酵液中加入適量正己烷(發(fā)酵液:正己烷=1:lw/v),充分混合后，3000g3min離心分離混合油，重復(fù)抽提3次，合并混合油層。
[0070]4.真空脫溶。采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀60°C Ih脫溶，得到毛油。
[0071]在此條件下，油脂的回收率為83.04%，其中，油脂回收率=獲得的油脂/發(fā)酵液中的總脂質(zhì)(下同)。
[0072]實施例1:不同pH值對發(fā)酵液粘度和濃縮效率的影響
[0073]稱取發(fā)酵液(Schizochytyium sp.自行培養(yǎng)獲得,滅菌后生物質(zhì)含量15.5%,干基含油38.7%) 500g，分別調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH值為pH9、pHIO、pHll、pH12，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮(9000卩&，801:，301^11)，考察粘度變化及濃縮效率。粘度檢測:按GB/T22427.7-2008淀粉粘度測定中的方法進行；干物質(zhì)濃度檢測:按GB/T20264-2006，糧食、油料水分兩次烘干測定法進行。結(jié)果顯示在下表1中。
[0074]表1不同pH對發(fā)酵液粘度及濃縮效率的影響
[0075]
【權(quán)利要求】
1.一種對微生物細胞實施破壁的方法，所述方法包括: 將發(fā)酵液的PH值調(diào)節(jié)到10 - 14的范圍；和 濃縮前述步驟所得的發(fā)酵液； 從而使所述微生物細胞破壁。
2.一種提取微生物活性成分的方法，所述方法包括: 將發(fā)酵液的PH值調(diào)節(jié)到10 - 14的范圍； 濃縮前述步驟所得的發(fā)酵液，從而使所述微生物細胞破壁；和 從細胞碎片中提取微生物細胞的活性成分。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，向發(fā)酵液中添加堿、堿溶液、或能生成堿的物質(zhì)，從而將發(fā)酵液的PH值調(diào)節(jié)到10-14的范圍。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述堿選自堿金屬堿、堿土金屬堿、或其混合物；優(yōu)選的，所述堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀和/或氫氧化鈣。
5.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述微生物為單細胞微生物；優(yōu)選的，所述微生物為產(chǎn)油微生物。
6.如權(quán)利要求1一 5中任一項所述的方法，其特征在于，使用所述堿將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到11 一 12.5的范圍。
7.如權(quán)利要求1一 6中任一項所述的方法，其特征在于，所述濃縮為真空濃縮，優(yōu)選的，所述真空濃縮的真空度為29000Pa-66000Pa。
8.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，向所述發(fā)酵液中添加氫氧化鉀，將發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)到11.5-12.5的范圍。
9.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，向所述發(fā)酵液中添加氫氧化鉀和氫氧化鈣，將發(fā)酵液的PH值范圍調(diào)節(jié)到11.5-12.5的范圍；優(yōu)選的，以發(fā)酵液質(zhì)量計，氫氧化鈣的添加量為0.1% -0.6%。
10.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述活性成分是油脂和蛋白質(zhì)。
【文檔編號】C07K1/14GK103911288SQ201310005865
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2013年1月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月8日
【發(fā)明者】洪豐, 王勇, 姜元榮, 王野 申請人:豐益(上海)生物技術(shù)研發(fā)中心有限公司