專利名稱：一種從山茶花花卉中提取多酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體的說(shuō)，涉及一種從山茶花花卉中提取多酚的方法。
背景技術(shù)：
植物中的多酚類是具多個(gè)酚基的化合物，常包括黃烷醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等。目前研究較多的天然多酚類是從食用茶葉中得到的屬黃烷醇類的茶多酚，許多研究表明其為一種天然抗氧化劑，具有能清除自由基、阻止脂質(zhì)過(guò)氧化、提高機(jī)體免疫力和延緩衰老等生物作用；另報(bào)道其還具有抗輻射和抑制癌細(xì)胞增殖的作用。為此，茶多酚被開(kāi)發(fā)應(yīng)用于食品保鮮防腐，延長(zhǎng)食品保質(zhì)期，保護(hù)食品中營(yíng)養(yǎng)成分，并且無(wú)毒副作用，食用安全。之外，也有從芒果、龍眼、甘蔗、蘋果、石榴等水果中獲取多酚類。山茶花(Camellia japonica)也是富含多酹類的一種植物,在老四川地區(qū)廣泛種植,用于城市景觀綠化供人們觀賞，也是獲取多酚類的一種天然資源。盡管許多研究表明從山茶花的葉片中成功提取獲得了多酚類，但是，其花中的多酚類提取研究至今未見(jiàn)有報(bào)道，而且每年山茶花的花卉因凋落而未被利用和白白浪費(fèi)掉了。現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn):目前尚未有從山茶花花卉中提取多酚的研究，山茶花作為觀賞性植物，資源充足，卻沒(méi)有有效得到利用，造成了資源的浪費(fèi)。

發(fā)明內(nèi)容
為解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種能快速有效的從山茶花卉中提取多酚的方法。本發(fā)明目的是這樣實(shí)現(xiàn) 的:一種從山茶花花卉中提取多酚的方法，其關(guān)鍵在于包括以下步驟:( I)山茶花粉末制備:摘取花開(kāi)正艷的山茶花，洗凈，放冰箱凍存，然后用凍干機(jī)凍干，研磨后過(guò)18目篩，最后封口袋裝好-20°C保存；(2)浸提液的制備:稱取山茶花粉末，加入體積濃度為60%的乙醇，山茶花粉末重量與乙醇水溶液體積的比為1:35，放在80°C水浴中浸提20min后，過(guò)濾；濾液于35°C，
0.09KPa條件下減壓蒸懼除去乙醇,然后用蒸懼水稀釋到濃度2 3mg.ml/1,再過(guò)0.45um的濾膜，最后得到浸提液；(3)樹脂吸附:a:將乙醇浸泡樹脂3 4h，然后放掉，用同樣的方法反復(fù)浸泡清洗樹脂，直到在出口洗滌液中加入3倍量的水不顯渾濁為止，然后用清水充分淋洗至無(wú)明顯乙醇?xì)馕稙橹?，然后將樹脂裝入樹脂柱中；b:將準(zhǔn)備好的浸提液按I 1.5ml.HIirT1的流速加到樹脂柱上端，上樣完畢后，用體積濃度為5%的乙醇洗脫雜質(zhì)及未結(jié)合的多酚，以I 1.5ml.HiirT1的流速洗脫體積3BV ；再用體積濃度為80%的乙醇洗脫多酚，以I 1.5ml.HiirT1的流速洗脫體積3 4BV，收集洗脫液，然后將收集到的多酚洗脫液減壓蒸餾后，冷凍干燥，最后得到暗紅色的具有金屬光澤的多酚粉末。
上述步驟(3)中所述樹脂為DM301大孔樹脂。
上述步驟(2)浸提液的制備中最佳參數(shù)的選取:
I)不同溶劑對(duì)多酚浸出率的影響
稱取1.0OOg山茶花，分別加入蒸餾水，體積濃度為50%甲醇，體積濃度為50%乙醇三種提取劑各25mL，70°C溫浴20min，過(guò)濾，濾液定容至50mL，取ImL測(cè)定多酚浸出率，每組做三個(gè)重復(fù)，結(jié)果如圖2所示。由圖2可見(jiàn)，不同溶劑提取的多酚含量差別較大，依次為50%乙醇 > 蒸餾水> 50%甲醇，所以下一步采用乙醇作為浸提溶劑。
2)乙醇濃度對(duì)多酚浸出率的影響
稱取1.0OOg山茶花，分別加入40%、50%、60%、70%、80%、90%六種體積濃度的乙醇各25mL, 70°C溫浴20min，過(guò)濾，濾液定容至50mL，取ImL測(cè)定多酚浸出率，結(jié)果如圖3所示。由圖3可見(jiàn)，乙醇濃度由40%增加到60%時(shí)，浸出率逐步增大，60%時(shí)浸出率達(dá)到最大，再增加乙醇濃度，浸出率則逐漸下降。所以選擇60%的乙醇作為浸提溶液。
3)浸提次數(shù)對(duì)茶多酚浸出率的影響
稱取1.0OOg山茶花，按體積濃度為60%乙醇25mL，70°C 20min的條件浸提一次、兩次、三次，過(guò)濾，收集濾液定容至IOOmL,每組做三個(gè)重復(fù)，每組的浸出率如圖4所示。由圖4見(jiàn)，浸提一次后山茶花中的多酚已大部分被浸提出來(lái)，而浸提二次和三次對(duì)多酚的浸出率貢獻(xiàn)不大，所以從資源利用率考慮，實(shí)驗(yàn)選擇浸提一次。
4)料液比對(duì)多酚浸提率的影響
分別稱取1.0OOg山茶花，加入不同體積的體積濃度為60%的乙醇，70°C浸提20min后過(guò)濾,濾液定容至50mL，取ImL測(cè)定多酚浸出率，每組做三個(gè)重復(fù)，結(jié)果如圖5所示。從圖5可見(jiàn)，隨著浸提溶劑用量的增加，多酚的浸出率不斷增大，當(dāng)料液比為1:30時(shí)浸出率達(dá)到最大，再增加浸提劑用量時(shí)，多酚的浸出率變化不大，所以選擇1:30為最佳的料液比。
5)溫度對(duì)多酚浸提的影響
稱取1.0OOg山茶花，加入體積濃度為60%乙醇30mL，分別置于50°C、60°C、70°C、80°C >90°C、100°C下，浸提20min，過(guò)濾，濾液定容至50mL，取ImL測(cè)定多酚的浸出率，每組做三個(gè)重復(fù)，結(jié)果如圖6所示:從50°C升高到80°C時(shí)，浸出率逐漸增大，80°C達(dá)到最大，再升高溫度浸出率反而降低，可能是高溫使多酚氧化加快。所以選擇80°C為浸提的最佳溫度。
6)時(shí)間對(duì)多酚浸提的影響`
稱取1.0OOg山茶花，加入體積濃度為60%乙醇30mL，置于80°C下保溫不同時(shí)間，做三個(gè)重復(fù)，觀察時(shí)間對(duì)多酚浸出率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖7。由圖7可知，隨著時(shí)間的增加浸出率不斷升高，保溫30min時(shí)，多酚浸出率達(dá)到最大，再延長(zhǎng)提取時(shí)間浸出率反而降低，這可能是因?yàn)槎喾釉诟邷貭顟B(tài)下持續(xù)越久，氧化就越多，所以選擇30min為最佳浸提時(shí)間。
7)正交試驗(yàn)結(jié)果
綜合上述因素，實(shí)驗(yàn)選取乙醇濃度、溫度、時(shí)間、料液比作為考察因素見(jiàn)表1，并進(jìn)行多酚的提取實(shí)驗(yàn)，測(cè)定多酚浸出率，結(jié)果見(jiàn)表2。
表I考察因素與水平對(duì)比表
權(quán)利要求
1.一種從山茶花花卉中提取多酚的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)山茶花粉末制備:摘取花開(kāi)正艷的山茶花，洗凈，放冰箱凍存，然后用凍干機(jī)凍干，研磨后過(guò)18目篩，最后封口袋裝好-20°c保存； (2)浸提液的制備: 稱取山茶花粉末，加入體積濃度為60%的乙醇，山茶花粉末重量與乙醇水溶液體積的比為1:35，放在80°C水浴中浸提20min后，過(guò)濾；濾液于35°C，0.09KPa條件下減壓蒸餾除去乙醇，然后用蒸餾水稀釋到濃度2 3mg.mL—1，再過(guò)0.45um的濾膜，最后得到浸提液； (3)樹脂吸附: a:將乙醇浸泡樹脂3 4h，然后放掉，用同樣的方法反復(fù)浸泡清洗樹脂，直到在出口洗滌液中加入3倍量的水不顯渾濁為止，然后用清水充分淋洗至無(wú)明顯乙醇?xì)馕稙橹?，然后將樹脂裝入樹脂柱中； b:將準(zhǔn)備好的浸提液按I 1.5ml.HiirT1的流速加到樹脂柱上端，上樣完畢后，用體積濃度為5%的乙醇洗脫雜質(zhì)及未結(jié)合的多酚，以I 1.5ml.HiirT1的流速洗脫體積3BV ;再用體積濃度為80%的乙醇洗脫多酚，以I 1.5ml.HiirT1的流速洗脫體積3 4BV，收集洗脫液，然后將收集到的多酚洗脫液減壓蒸餾后，冷凍干燥，最后得到暗紅色的具有金屬光澤的多酚粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種從山茶花花卉中提取多酚的方法，其特征在于:所述步驟(3)中所述樹脂為DM301大孔樹 脂。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從山茶花花卉中提取多酚的方法，其特征在于包括以下步驟(1)山茶花粉末制備；(2)浸提液的制備；(3)樹脂吸附。本發(fā)明公開(kāi)了本發(fā)明一種從山茶花花卉中提取多酚的方法，具有制備方法簡(jiǎn)單、操作方便和成本低廉等特點(diǎn)，能充分的利用山茶花花卉的資源提純度高的取多酚，合理的利用資源，符合了變廢為寶的研發(fā)目標(biāo)。
文檔編號(hào)C07G99/00GK103145770SQ20131008928
公開(kāi)日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2013年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月20日
發(fā)明者羅通 申請(qǐng)人:宜賓學(xué)院, 重慶師范大學(xué)