專利名稱：Hcg粗品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于技術(shù)生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種HCG粗品的制備方法。
背景技術(shù)：
HCG即人絨毛膜促性腺激素,是英文human chorionic gonadotrophin三個英文的首字字母縮寫，是由胎盤的滋養(yǎng)層細胞分泌的一種糖蛋白，它是由a和0 二聚體的糖蛋白組成。HCG在受精后第六天前后就進入母血并快速增殖一直到孕期的第8周，然后緩慢降低濃度直到第18 20周，然后維持10天左右，并開始下降(但仍高于正常水平)。完整的HCG全部是由胎盤絨毛膜的合體滋養(yǎng)層產(chǎn)生。其主要功能就是刺激黃體，有利于雌激素和黃體酮持續(xù)分泌，以促進子宮蛻膜的形成，使胎盤生長成熟。現(xiàn)代認為HCG是由滋養(yǎng)層過渡型細胞和合體細胞產(chǎn)生的。HCG在受精后6左右天開始分泌，60 — 70天達到高峰。在妊娠的前8周增值很快，以維持妊娠。在大約孕8周以后，HCG逐漸下降，直到大約20周達到相對穩(wěn)定。HCG性狀呈白色粉末，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、乙醚等有機溶劑，pH3.2-3.3，干品較穩(wěn)定，臨床上主要用于男性垂體機能不足所致的性機能過低的隱睪癥，用于由黃體功能不全引起的功能行子宮出血病和習慣性流產(chǎn)與HMG合同可誘發(fā)排卵和治療不育癥。HCG的另一個重要用途是制備妊娠試劑盒放射免疫試劑，用以妊娠檢驗和絨毛膜癌的診斷，HCG在醫(yī)學上有重要的用途。HCG的傳統(tǒng)制備方法是:收集孕婦尿液，在尿液中加入苯甲酸鈉，再加入鹽酸，充分反應，生成苯甲酸，將HCG吸附住，再加入食用酒精使HCG沉淀下來，再干燥HCG，該方法的缺點是，該方法的步驟繁多，尿液中的HCG損失較大；而且該方法中使用到了苯甲酸鈉和鹽酸，其成本較高，而且鹽酸的復新過程需要消耗熱量。
CN1302818A公開的方法中，采用醋酸鈉的高鹽抽提和低鹽反抽技術(shù)得到HCG中間體，經(jīng)過SP-葡聚糖凝膠的分離純化技術(shù)制得一種高純度的人絨毛膜促性腺激素，經(jīng)過無菌無熱原的處理制得醫(yī)用的注射用HCG精品原料。其具體的工藝流程是:中間體制造工段和純品HCG制造工段，中間體制造工段過程中，稱取HCG粗品，投入到氯化鈉的醋酸鈉氯化鈣乙醇的緩沖液中，攪拌提取，靜置過夜虹吸上清液，殘渣繼續(xù)提取，離心取上清液；加入乙醇繼續(xù)提取；采用預冷丙酮脫水后真空干燥，得中間體；過色譜柱對HCG中間體純化，收集，加乙醇沉淀，的效價為3000-3500iu/mg的HCG純品。該方法的缺點是:采用的試劑較多，步驟較為繁瑣，而且在該方法中采用了有機試劑乙醇，增加了溶劑回收的步驟。CN1047507A披露了一種提取人絨毛膜促性腺激素的吸附劑和方法，該方法的具體步驟是:使用硅藻土作為吸附劑，從早、中期(2-6個月)孕婦新鮮尿液中，在37°C以下提取人絨毛膜促性腺激素。具體為:調(diào)節(jié)孕婦尿液PH值，加硅藻土吸附，取硅藻土裝柱，用洗脫液洗脫，加酒精沉淀，經(jīng)脫水干燥制得人絨毛膜促性腺激素。該方法的缺點是:采用硅藻土作為吸附劑，會吸附一部分HCG，帶來HCG的損失。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種成本低、步驟簡單、易于工業(yè)化生產(chǎn)的HCG粗品的制備的方法。HCG粗品的制備方法，包括下述的步驟:
a.收集孕婦尿液，采用40目濾網(wǎng)過濾；采用微濾設備預處理過濾，再在超濾設備中超濾得到濃縮液，超濾的條件是:PH3.8-4.0，超濾膜的截留分子量為lOOOODa，超濾至濃縮液為原尿液重量的4-5%為止；
b.在濃縮液中加入占濃縮液重為0.5-0.8%的無水氯化鈣，攪拌溶解；
c.再將步驟b中的濃縮液加入到2-3倍體積的預冷到4°C的丙酮中靜置6-15小時，并將濃縮液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存；
d.虹吸步驟c中的上層液，并用丙酮洗滌沉淀兩次；抽干或真空干燥得HCG粗品。上述的步驟a中，超濾尿液后，用反滲透水清洗超濾設備，清洗液冷藏并入下次尿液，可以將尿液中的有效成份更徹底的清洗出來，減少提取中的損失。上述的步驟b中，在濃縮液中加入戰(zhàn)濃縮液總重為0.65%的無水氯化鈣，攪拌溶解。優(yōu)選的，上述的步驟c中，具體為:再將步驟b中的濃縮液中加入到2.5倍體積的丙酮中靜置12小時，所述的丙酮為預冷到4°C的丙酮，并將濃縮液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存。上述的步驟a中，收集的孕婦尿液中，不得檢出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab0 上述的步驟a中，所得到的HCG粗品成品中不得檢出艾滋病毒、乙肝病毒HBs_Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab0步驟a中，在4_10°C的區(qū)間范圍內(nèi)，有利于HCG粗品的提取。HCG粗品的制備方法，包括下述的步驟:
a.收集孕婦尿液，采用40目濾網(wǎng)過濾；采用微濾設備預處理過濾，再在超濾設備中超濾得到濃縮液，超濾的條件是:PH3.9，超濾膜的截留分子量為lOOOODa，超濾至濃縮液為原尿液重量的4.5%為止；
b.在濃縮液中加入占濃縮液重為0.6%的無水氯化鈣，攪拌溶解；
c.再將步驟b中的濃縮液加入到2.5倍體積的預冷到4°C的丙酮中靜置8小時，并將濃縮液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存； d.虹吸步驟c中的上層液，并用丙酮洗滌沉淀兩次；抽干或真空干燥得HCG粗品。本發(fā)明的有益效果在于，采用以上的方法制備HCG粗品，和傳統(tǒng)的采用苯甲酸鈉的制備方法相比，無需采用苯甲酸鈉和鹽酸，降低了成本；而且本發(fā)明的方法中，減少了由于中間反應環(huán)節(jié)帶來的HCG的損失。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作更進一步的說明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解本發(fā)明，但并不因此限制本發(fā)明。實施例1HCG粗品的制備方法，包括下述的步驟:
a.收集孕婦尿液，該孕婦尿液中，未檢出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab，采用40目濾網(wǎng)過濾；采用微濾設備預處理過濾，再在超濾設備中超濾得到濃縮液，超濾的條件是:pH3.9，超濾膜的截留分子量為lOOOODa，超濾至濃縮液為原尿液重量的4%左右；
超濾后用反滲透水清洗超濾設備，清洗液冷藏并入下次尿液；
b.在濃縮液中加入濃度為0.65%的無水氯化鈣，攪拌溶解；
c.再將步驟b中的濃縮液加入到2.5倍體積的預冷到4°C的丙酮中靜置6小時以上，并將濃縮液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存；
d.虹吸步驟c中的上層液，并用丙酮洗滌沉淀兩次；真空干燥，得HCG粗品，經(jīng)檢測，HCG粗品中未檢出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。采用以上的實施例中的方法制備HCG粗品，其實驗結(jié)果如下:
權(quán)利要求
1.HCG粗品的制備方法，包括下述的步驟: a.收集孕婦尿液，采用40目濾網(wǎng)過濾；采用微濾設備預處理過濾，再在超濾設備中超濾得到濃縮液，超濾的條件是:PH3.8-4.0，超濾膜的截留分子量為lOOOODa，超濾至濃縮液為原尿液重量的4-5%為止； b.在濃縮液中加入占濃縮液重為0.5-0.8%的無水氯化鈣，攪拌溶解； c.再將步驟b中的濃縮液加入到2-3倍體積的預冷到4°C的丙酮中靜置6-15小時，并將濃縮液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存； d.虹吸步驟c中的上層液，并用丙酮洗滌沉淀兩次；抽干或真空干燥得HCG粗品。
2.如權(quán)利要求1所述的HCG粗品的制備方法，其特征在于，所述的步驟a中，超濾尿液后，用反滲透水清洗超濾設備，清洗液冷藏并入下次尿液。
3.如權(quán)利要求1所述的HCG粗品的制備方法，其特征在于，所述的步驟b中，在濃縮液中加入濃度為0.65%的無水氯化鈣，攪拌溶解。
4.如權(quán)利要求1所述的HCG粗品的制備方法，其特征在于，所述的步驟c中具體為:再將步驟b中的濃縮液中加入到2.5倍體積的丙酮中靜置12小時，所述的丙酮為預冷到4°C的丙酮，并將濃縮液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存。
5.如權(quán)利要求1所述的HCG粗品的制備方法，其特征在于，所述的步驟a中，所述的孕婦尿液中，不得檢出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
6.如權(quán)利要求1所述的HCG粗品的制備方法，其特征在于，所述的步驟a中，所述的成品HCG粗品中不得檢出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
7.如權(quán)利要求1所述的HCG粗品的制備方法，其特征在于，所述的步驟a中，超濾的溫度為 4-10°C。
8.如權(quán)利要求1所述的HCG粗品的制備方法，包括下述的步驟: a.收集孕婦尿液，采用40目濾網(wǎng)過濾；采用微濾設備預處理過濾，再在超濾設備中超濾得到濃縮液，超濾的條件是:PH3.9，超濾膜的截留分子量為lOOOODa，超濾至濃縮液為原尿液重量的4.5%為止； b.在濃縮液中加入占濃縮液重為0.6%的無水氯化鈣，攪拌溶解； c.再將步驟b中的濃縮液加入到2.5倍體積的預冷到4°C的丙酮中靜置8小時，并將濃縮液和丙酮的混合溶液置于4°C下保存； d.虹吸步驟c中的上層液，并用丙酮洗滌沉淀兩次；抽干或真空干燥得HCG粗品。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種HCG粗品的制備方法。HCG粗品的制備方法，包括下述的步驟a.收集孕婦尿液，超濾得濃縮液；b.在濃縮液中加入濃度為0.5-0.8%的無水氯化鈣，攪拌溶解；c.再將步驟b中的濃縮液加入到2-3倍體積的丙酮中靜置10-16小時，所述的丙酮溫度為4℃，并將加入了濃縮液的丙酮置于4℃下保存；d.虹吸步驟c中的上層液，并用丙酮洗滌沉淀兩次；抽干或真空干燥。采用以上的方法制備HCG粗品，和傳統(tǒng)的采用苯甲酸鈉的制備方法相比，無需采用苯甲酸鈉和鹽酸，降低了成本；而且本發(fā)明的方法中，減少了由于中間反應環(huán)節(jié)帶來的HCG的損失。
文檔編號C07K1/30GK103193880SQ20131012089
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月9日
發(fā)明者劉愛紅, 陳方山 申請人:鄒平縣濱渤生物科技有限公司