一種六月青木脂素苷的提取、分離方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種六月青木脂素苷(6R，7S，8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy]lyoniresinol的提取、分離方法。該方法以六月青為原料，經(jīng)乙醇或水加熱回流提取，濃縮；濃縮液分別用乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，將相同溶劑的萃取液合并，濃縮；取乙酸乙酯萃取液用MCI脫色后，用不同比例的三氯甲烷-甲醇，在開放硅膠柱的條件下洗脫，合并成分相同的洗脫液并濃縮，濃縮液用RP-18進(jìn)行反相柱層析后，再用制備HPLC進(jìn)行分離純化得到化合物六月青木脂素苷。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：該方法快速、簡(jiǎn)便，六月青木脂素苷純度高，成本低。
【專利說明】-種六月青木脂素苷的提取、分離方法
[0001] 本發(fā)明屬一種提取、分離、制備方法，具體是一種六月青木脂素苷的提取、分離方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 六月青是系爵床科（Acanthaceae)植物肖籠雞（頂頭馬藍(lán)）Taraphochlamys affinis (Griff) Bremekhu (Strobilanthes affinis (Griff) Y. C. Tang)的干燥地上部分。產(chǎn)自 廣西、云南、貴州和湖南。生于山坡草地或灌木叢中。越南至印度東北部也有分布。
[0003] 頂頭馬藍(lán)為草本，高達(dá)60cm。莖基部多膝曲，多分枝，嫩莖具白色糙毛。葉對(duì)生； 具柄；葉片卵形，長(zhǎng)3-8cm，先端尖，兩面疏具糙毛，邊緣有鈍齒。穗狀花序圓柱狀，頂生，長(zhǎng) 3-6cm ;荀片覆瓦狀排列，寬倒卵形至卵形，長(zhǎng)約7mm ;小荀片稍短于苞片，線形；花萼裂片5， 線形，三者均具腺毛和長(zhǎng)睫毛；花冠淡紫色，長(zhǎng)約2. 5cm，裂片5,略作二唇形；雄蕊二強(qiáng)，伸 出花冠之外，2短雄蕊之間有退化雄蕊殘跡，花絲基部有膜相連，膜的兩側(cè)邊緣具柔毛。蒴果 長(zhǎng)約7mm，有微毛。種子4顆。
[0004] 《本草拾遺》記載，該藥能活血，涼血，疏肝瀉濕，消腫止痛，主要用于急慢性肝炎， 黃疸、流行性腮腺炎、腎性水腫、血尿及高血壓等。由六月青、白花蛇舌草、桅子花根等組成 的復(fù)方六月青（CLYQ，又稱復(fù)方六月雪），是根據(jù)長(zhǎng)時(shí)期的臨床觀察而擬定的治療急慢性乙 型肝炎的驗(yàn)方，民間常用于治療急性黃疸性肝炎的濕熱黃疸等證。
[0005] 六月青化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明：六月青中含有皂苷、強(qiáng)心苷類、內(nèi)酯類、香豆素 類、酚類、有機(jī)酸、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖和苷類和鞣質(zhì)類成分。
[0006] 六月青的乙醇提取物、醇提物的皂苷、水提取物的多糖以及醇提液氯仿部位、乙酸 乙酯、正丁醇萃取液等部位具有明顯的保肝和抗纖維化的作用。六月青皂苷實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： 連續(xù)給藥4周后，六月青皂苷高、中劑量組血清AST含量均低于模型組；各給藥組血清ALT 含量均低于模型組，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 〇. 01和P < 〇. 05);并且可顯著 升高肝纖維化大鼠血清SOD及GSH-Px活力，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0. 01和 P < 0. 05)。與模型對(duì)照組相比較六月青皂苷高、中、低劑量組均可顯著降低肝纖維化大鼠 肝組織中Hyp和MDA含量，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0. 01和P < 0. 05)。本實(shí)驗(yàn)研究表明，六 月青皂苷可有效地保護(hù)CCl4所致的大鼠肝細(xì)胞的損害，并對(duì)大鼠肝纖維化具有較好的逆轉(zhuǎn) 作用。其機(jī)制可能是通過清除氧自由基，抑制肝臟脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而穩(wěn)定肝細(xì)胞膜，減 輕細(xì)胞損傷發(fā)揮作用，從而達(dá)到對(duì)肝纖維化的保護(hù)和逆轉(zhuǎn)的效果。
[0007] 六月青多糖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，CCl4模型組小鼠肝臟系數(shù)、脾臟系 數(shù)明顯增加（P<〇. 05)，各給藥組均能降低肝臟、脾臟系數(shù)，并且呈良好的劑量關(guān)系。對(duì)于 CCl4所致急性肝損傷小鼠，六月青多糖各劑量均能顯著降低血清ALT、AST和AKP活性（P <0.05或P <0.01)，提高Alb含量和T-AOC能力（P< 0.05或P <0.01);其中高、中劑 量組作用最明顯（P < 〇. 01)。經(jīng)由CCl4誘導(dǎo)肝損傷后，模型組肝組織中的MDA含量顯著升 高（P < 0. 01)，SOD活性降低。六月青多糖各劑量均能降低MDA含量，提高SOD活性，其中 以六月青多糖高劑量組作用最明顯（P < 〇. 01)。其機(jī)制可能為提高機(jī)體總抗氧化能力和提 高SOD酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。
[0008] 以上研究說明六月青提取物具有保肝和抗肝纖維化的功效。目前，六月青的化學(xué) 成分研究報(bào)導(dǎo)較少。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 為了進(jìn)一步研究六月青內(nèi)在化學(xué)成分的類型、性質(zhì)及相關(guān)的提取、分離技術(shù)工藝， 本發(fā)明提供一種六月青木脂素苷的提取、分離方法。
[0010] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0011] 一種六月青木脂素苷（6R，7S，8S) _7a_[ ( 0 -glucopyranosyl) oxy] Iyoniresinol 的提取、分離方法。本方法以爵床科（Acanthaceae)植物肖籠雞（頂頭馬藍(lán)） Taraphochlamys affinis (Griff) Bremekhu (Strobilanthes affinis (Griff) Y. C. Tang)的干 燥地上部分六月青為原料，經(jīng)一定濃度乙醇或水提取，合并提取液，濃縮。濃縮液分別用乙 酸乙酯和正丁醇依次萃取，將相同溶劑的萃取液合并，分別濃縮；取乙酸乙酯部分用MCI脫 色后，用3?5倍量不同比例的三氯甲烷-甲醇溶液在開放硅膠柱及室溫條件下洗脫，合并 成分相同的洗脫液、濃縮；用RP-18進(jìn)行反相柱層析后，再以制備HPLC進(jìn)行分離純化得到一 個(gè)化合物（6R，7S，8S)-7a_[(0 _glucopyranosyl)oxy] Iyoniresinol。具體操作步驟如下：
[0012] 1)將六月青粉碎成粗粉或最粗粉，加6?9倍量的50?80%乙醇，浸泡0. 5?2 小時(shí)，常壓下直接加熱回流提取，提取1?3次，濾過，合并提取液，于50?80°C減壓回收乙 醇。
[0013] 2)或?qū)⒘虑喾鬯槌纱址刍蜃畲址郏??9倍量的水，浸泡0. 5?2小時(shí)，常壓 下直接加熱回流提取，同法提取1?3次，濾過，合并提取液，濃縮。
[0014] 3)分別將步驟1)、步驟2)濃縮液分別用1?4倍量的乙酸乙酯和正丁醇在室溫 條件下，依次萃取1?3次；在室溫條件下，將相同溶劑的萃取液分別合并、濃縮。取乙酸乙 酯萃取液用MCI脫色后，用3?5倍量不同比例的三氯甲烷-甲醇溶液在開放硅膠柱及室 溫條件下洗脫，合并成分相同的洗脫液、濃縮；用RP-18進(jìn)行反相柱層析后，再以制備HPLC 進(jìn)行分離純化得到一個(gè)化合物（6R，7S，8S) _7a_[ ( 0 -glucopyranosyl) oxy] lyoniresinol， 其分子式為C28H38O13，結(jié)構(gòu)式如下：
[0015]

【權(quán)利要求】
1. 一種六月青木脂素苷（6R，7S，8S) _7a_[ ( 0-glucopyranosyl) oxy] lyoniresinol 的提取、分離方法。其特征是：以爵床科（Acanthaceae)植物肖籠雞（頂頭馬藍(lán)） Taraphochlamys affinis (Griff) Bremekhu (Strobilanthes affinis (Griff) Y. C. Tang)的干 燥地上部分六月青為原料，經(jīng)一定濃度乙醇或水提取，合并提取液，濃縮。濃縮液分別用乙 酸乙酯和正丁醇依次萃取，將相同溶劑的萃取液合并，分別濃縮；取乙酸乙酯部分用MCI脫 色后，用開放硅膠柱、RP-18反相柱層析以及制備HPLC進(jìn)行分離純化得到一個(gè)化合物（6R， 7S，8S)-7a_[(0-glucopyranosyl)oxy]lyoniresinol。具體操作步驟如下： 1) 將六月青粉碎成粗粉，加6?9倍量的50?80%乙醇，浸泡0. 5?2小時(shí)，常壓下 直接加熱回流提取，提取1?3次，濾過，合并提取液，于50?80°C減壓回收乙醇。 2) 或?qū)⒘虑喾鬯槌纱址?，??9倍量的水，浸泡0. 5?2小時(shí)，常壓下直接加熱回 流提取，同法提取1?3次，濾過，合并提取液，濃縮。 3) 分別將步驟1)、步驟2)濃縮液分別用1?4倍量的乙酸乙酯和正丁醇在室溫條件 下，依次萃取1?3次；在室溫條件下，將相同溶劑的萃取液分別合并、濃縮。取乙酸乙酯萃 取液用3?5倍量不同比例的三氯甲烷-甲醇溶液在開放硅膠柱及室溫條件下洗脫，合并 成分相同的洗脫液、濃縮；用RP-18進(jìn)行反相柱層析后，再以制備HPLC進(jìn)行分離純化得到一 個(gè)化合物（6R，7S，8S) _7a_ [ ( 0 -glucopyranosyl) oxy] lyoniresinol。
【文檔編號(hào)】C07H15/18GK104356180SQ201310156679
【公開日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2013年4月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月14日
【發(fā)明者】黃仁彬, 周先麗, 焦楊, 梁韜, 郭又嘉, 邱少云, 左巧云, 農(nóng)志歡 申請(qǐng)人:廣西醫(yī)科大學(xué)