小麥胚芽蛋白源抗氧化肽、其制備方法及其應用的制作方法
【專利摘要】一種小麥胚芽蛋白源抗氧化肽、其制備方法及應用。所述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽包含SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：2所示序列；其制備方法包括：將新鮮小麥胚芽制成脫脂麥胚蛋白粉后，以堿性蛋白酶水解、滅酶、高速離心后，取上清液超濾除去大分子物質，濾液冷凍干燥得麥胚蛋白酶解物，再將麥胚蛋白酶解物溶液依次過大孔吸附樹脂柱、凝膠過濾色譜柱，收集抗氧化活性最強的組分，即為具有目標產物。本發(fā)明工藝簡單高效，所獲麥胚蛋白抗氧化肽具有較高的抗氧化活性，具有較小的分子量和明確的氨基酸序列，能夠清除自由基、減輕氧化應激損傷，還可用于抗氧化類膳食補充劑，具有原料來源廣泛、安全性高、成本較低等優(yōu)點，在食品、醫(yī)藥等領域具有廣闊的應用前景。
【專利說明】小麥胚芽蛋白源抗氧化肽、其制備方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明特別涉及一種小麥胚芽蛋白源抗氧化肽、其制備方法及其應用，屬于小麥副廣品精深加工【技術領域】。
【背景技術】
[0002]小麥胚芽是小麥加工的副產物，其產量隨著制粉技術的提高而不斷增大。目前小麥胚芽被大量地用于提取小麥胚芽油，然而提取小麥胚芽油后的麥胚柏應用范圍比較局限，除了作為廉價飼料，還被用作蛋白質補充劑和食品配料添加劑。脫脂麥胚含有高達30%左右的蛋白質，且氨基酸分布均衡，八種必需氨基酸含量約占總氨基酸的34%，是重要的優(yōu)質植物蛋白營養(yǎng)源，深度開發(fā)和利用脫脂麥胚成為國內外科研工作者的關注和研究熱點，也具有很大的現(xiàn)實意義。例如，利用小麥胚芽提取生物活性肽已經成為當前回收利用脫脂麥胚的重要途徑之一。
[0003]CN102168124A公開了一種復合酶結合堿法制備小麥胚芽活性多肽的方法，以獲得不同分子量的生物活性肽粉。CN202297429U提供了一種制備小麥胚芽多肽的脫鹽裝置，其能有效提高多肽的純度。CN102524514A公開了一種小麥胚芽活性多肽的制備方法，其所獲小麥胚芽活性多肽對青年期小鼠營養(yǎng)性肥胖具有一定的預防作用。CN101513218A公開了一種從小麥胚芽中提取抗氧化活性小肽營養(yǎng)粉的方法，其所獲小肽可在體外抑制被鐵、血紅蛋白、脂質氧化酶和單態(tài)氧催化的脂質氧化作用。
[0004]但是，前述技術對于小麥胚 芽活性肽的研究尚較為初級，未能精確的提取獲得具有確定結構和功能的活性肽，因此缺乏實際應用價值。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的之一在于提供一種小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，其實現(xiàn)了對氧化應激損傷具有較強保護作用的小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的精確有效提取，從而克服了現(xiàn)有技術中的不足。
[0006]本發(fā)明的目的之二在于提供一種小麥胚芽蛋白源抗氧化肽，其對氧化應激損傷具有較強保護作用。
[0007]本發(fā)明的目的之三在于提供前述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的應用。
[0008]為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下技術方案:
[0009]一種小麥胚芽蛋白源抗氧化肽，它包含SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2所示的序列。
[0010]一種小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，包括如下步驟:
[0011](i)將新鮮小麥胚芽依次經脫脂、干燥、粉碎形成脫脂麥胚粉，再經堿沉酸提方法獲得脫脂麥胚蛋白粉；
[0012](ii)將脫脂麥胚蛋白粉溶于水配置成脫脂麥胚蛋白懸液，并調節(jié)pH值8.0-8.5，在50-60°C平衡30min以上，然后加入堿性蛋白酶，在50_60°C進行水解反應，同時維持反應體系的pH值保持恒定，水解反應完畢后，將酶解液于90-100°C滅酶IOmin以上，迅速冷卻，在4°C以8000r/min以上的速度離心30min以上，收集上清液，并以截留分子量為5000-10000Da超濾膜過濾除去大分子物質，將濾液冷凍干燥得麥胚蛋白酶解物；
[0013](iii)將麥胚蛋白酶解物溶于水配置成樣品溶液，并使樣品溶液通過大孔吸附樹脂柱，同時以紫外檢測器記錄A22tlnm,當A22tol達到0.05時停止上樣，然后依次用水和體積濃度為15-75%的乙醇水溶液進行洗滌和洗脫；
[0014](iv)步驟(iii)得到的乙醇洗脫液在溫度45_55°C下蒸發(fā)濃縮，再依次進行冷凍干燥和抗氧化活性，收集抗氧化活性最強的組分；
[0015](V)將步驟(iv)所獲抗氧化活性最強的組分配置成水溶液，并通過凝膠過濾色譜柱，再用水進行洗脫，按照洗脫峰收集各組分進行冷凍干燥，并進行抗氧化活性的測定，再次收集抗氧化活性最強的組分，即為具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示序列的小麥胚芽蛋白源抗氧化肽。
[0016]進一步的，步驟(i)包括:將經正己烷脫脂的新鮮小麥胚芽，置于室溫風干后，粉碎過60-80目篩得脫脂麥胚粉，采用堿沉酸提方法得脫脂麥胚蛋白粉。
[0017]進一步的,步驟(ii)包括:將脫脂麥胚蛋白粉溶于水形成濃度為5w/v% _10w/v%的脫脂麥胚蛋白懸液，用堿調節(jié)PH值至8.0-8.5，在50-60°C條件下平衡30_40min，然后加A 0.024AU/g堿性蛋白酶，在50-60°C條件下進行水解反應4h以上，同時用酸或堿維持反應體系的PH值恒定，水解反應完畢后，將酶解液于90-100°C水浴滅酶10-15min，迅速冷卻，在4°C以8000-10000r/min的轉速離心30_35min，收集上清液，將上清液依次以普通濾紙和0.45um微孔濾膜過濾，再采用截留分子量為5000-10000Da超濾膜過濾除去大分子物質，將濾液冷凍干燥，獲得麥胚蛋白酶解物。
[0018]進一步的，步驟(iii)包括:將步驟(ii)所獲麥胚蛋白酶解物溶于水形成濃度為20-30mg/mL的樣品溶液，讓樣品溶液以l_2mL/min流速通過大孔吸附樹脂柱，紫外檢測器記錄A22tol,當A22tlnm達到0.05時停止上樣，然后用水以l_2mL/min流速洗滌1_2個柱體積，再用體積濃度為15-75%的乙醇水溶液以l_2mL/min流速進行洗脫。
[0019]進一步的，步驟(iv)包括:將步驟(iii)所獲乙醇洗脫液在溫度45_55°C下進行旋轉蒸發(fā)，再將濃縮組分進行冷凍干燥，而后進行抗氧化活性的測定，并收集抗氧化活性最強的組分。
[0020]進一步的，步驟(V)包括:將步驟(iv)所獲抗氧化活性最強的組分溶于水形成濃度為4-5mg/mL的溶液，以0.5-lmL/min流速通過凝膠過濾色譜柱,再用水以0.5-lmL/min流速進行洗脫，按照洗脫峰收集各組分進行冷凍干燥，再進行抗氧化活性的測定，再次收集抗氧化活性最強的組分。
[0021]進一步的，所述大孔吸附樹脂可選自但不限于DA201-C型大孔吸附樹脂。
[0022]所述凝膠過濾色譜柱可選用Superdex Peptidel0/300GL預裝柱,但不限于此。
[0023]前述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽在保護氧化損傷細胞中的應用。
[0024]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點至少在于:`采用有效的制備、分離純化方法準確獲得了具有確定結構和功效的麥胚蛋白抗氧化肽，所述麥胚蛋白抗氧化肽具有較高的抗氧化活性，具有較小的分子量和明確的氨基酸序列，能夠清除自由基、減輕氧化應激損傷，還可用于抗氧化類膳食補充劑，具有原料來源廣泛、安全性高、成本較低等優(yōu)點，在食品、醫(yī)藥等領域具有廣闊的應用前景，可取得一定的經濟效益。本發(fā)明為拓展脫脂麥胚的開發(fā)范圍提供了研究基礎，可提高麥胚深度開發(fā)的利用價值和相關產業(yè)的經濟效益。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1是本發(fā)明一較佳實施例中的大孔吸附樹脂DA201-C分離圖譜；
[0026]圖2是本發(fā)明一較佳實施例中的Superdex Peptidel0/300GL凝膠過濾色譜分離圖譜。
【具體實施方式】
[0027]如前所述，鑒于現(xiàn)有技術中的不足，本發(fā)明的一個方面旨在提供一種小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法。
[0028]在本發(fā)明的一典型實施方式中，該制備方法可包括如下步驟:
[0029](i)蛋白提取步驟:
[0030]新鮮小麥胚芽經正己烷脫脂，置于室溫風干后，粉碎過篩￠0-80目)得脫脂麥胚粉。配制10%-20% (w/v)脫脂麥胚粉去離子水溶液，用堿調pH至9.0-9.5，室溫攪拌提取l-2h，以8000-10000r/min、4°C離心25_30min，重復上述堿溶過程，合并兩次上清液。用酸將上清液 pH 調至 4.0-4.5，靜置 30-45min，以 8000-10000r/min、4°C離心 25_30min，獲得沉淀，并用pH4.0去尚子水洗漆三次,用少量去尚子水分散沉淀,并調pH至6.8-7.2,冷凍干燥得脫脂麥胚蛋白粉。
[0031]前述新鮮小麥胚 芽可由市售等途徑獲得，例如，可采用由益海嘉里(昆山)食品有限公司提供的相關產品，脫脂后的小麥胚芽蛋白質含量> 30%。
[0032]前述冷凍干燥使用的實驗器具亦可通過市售途徑獲得，比如，可采用美國LABC0NC0美國公司銷售的相關產品。
[0033](ii)酶解步驟:
[0034]在酶反應器中制備濃度為5 _10 (w/v)脫脂麥胚蛋白懸液，用喊調節(jié)pH至8.0-8.5，在50-60°C條件下平衡體系30_35min，然后加入0.024AU/g堿性蛋白酶，在50-60°C條件下進行水解反應4h，同時用酸或堿維持反應介質的pH值恒定，水解反應完畢后，酶解液于90-100°C滅酶lOmin，迅速冷卻，以8000-10000r/min，4°C離心30-35min，收集上清液。上清液用少量去離子水稀釋，先用濾紙進行真空抽濾，再用0.45 微孔濾膜過濾，最后采用截留分子量為5000-10000Da超濾膜過濾除去大分子物質，將透過液冷凍干燥得麥胚蛋白酶解物。
[0035]在本發(fā)明中，所述的蛋白酶可采用諾維信(中國)生物技術有限公司生產的堿性蛋白酶Alcalase2.4L，當然亦可采用其它類似市售產品。
[0036]本發(fā)明各個步驟中所述的酸選自無機酸(鹽酸)，所述的堿選自無機堿(氫氧化鈉)。
[0037]所述酸或堿的使用濃度在0.5-1.5mol/L范圍內。
[0038]前述超濾系統(tǒng)可采用美國PALL公司以商品名小型切向流超濾裝置銷售的產品，膜包采用改性聚醚砜超濾膜。
[0039](iii)大孔吸附樹脂分離步驟:[0040]將步驟(ii)得到的麥胚蛋白酶解物溶于雙蒸水制備濃度為20_30mg/mL樣品溶液，讓樣品溶液以流速l_2mL/min通過大孔吸附樹脂柱，紫外檢測器記錄A22tlnm,當A22tlnm達到
0.05時停止上樣，然后用雙蒸水以l_2mL/min流速洗滌1_2個柱體積，再用15% -75%乙醇水溶液以l_2mL/min流速進行洗脫。
[0041]在本發(fā)明中，大孔吸附樹脂分離條件如下:色譜柱:2.6CmX50Cm;檢測波長:220nm ;樣品濃度:20-30mg/mL ;流速:l-2mL/min。洗脫條件如下:洗脫劑:15% -75%乙醇；流速:l-2mL/min。其分離圖譜見圖1，用不同濃度的乙醇進行梯度洗脫，得到五個組分，所得組分分別命名為A、B、C、D、E。
[0042]所述大孔吸附樹脂能通過分子間作用力吸附溶液中的多肽，使鹽分與多肽實現(xiàn)分離，同時，本身的多孔性結構也使其具備一定的分子篩作用。由于該樹脂與多肽之間為物理性吸附，被吸附的多肽較易洗脫，并具有低成本、高效率、樹脂易回收再生等優(yōu)點，因此大孔吸附樹脂分離技術現(xiàn)已大量用于化工、食品、醫(yī)藥等領域。
[0043]所述大孔吸附樹脂在使用前需要進行如下的預處理:先用無水乙醇浸泡過夜，然后用無水乙醇清洗至220nm無吸收峰,使用前再用雙蒸水清洗。
[0044]所述大孔吸附樹脂可采用江蘇蘇青水處理工程集團有限公司提供的DA201-C型
[0045](iv)蒸發(fā)濃縮步驟:
[0046]步驟(iii)得到的乙醇洗脫液在溫度45_55°C下進行旋轉蒸發(fā)，將濃縮的組分進行冷凍干燥，再進行抗氧化活性的測定，收集抗氧化活性最強的組分得到麥胚蛋白抗氧化肽_1。
[0047]前述旋轉蒸發(fā)濃縮可通過上海亞榮生化儀器廠提供的RE-52A旋轉蒸發(fā)器而實施，且不限于此。
[0048]冷凍干燥使用的設備如前面所述的設備。
[0049](V)凝膠過濾色譜分離步驟:
[0050]將步驟(iv)得到的麥胚蛋白抗氧化肽-1用雙蒸水制備成4_5mg/mL溶液，以
0.5-lmL/min流速通過美國GE公司生產的Superdex Peptide 10/300GL凝膠過濾色譜柱,再用雙蒸水以0.5-lmL/min流速進行洗脫，按照洗脫峰收集各組分進行冷凍干燥，再進行抗氧化活性的測定，收集抗氧化活性最強的組分得到麥胚蛋白抗氧化肽_2。
[0051]在本發(fā)明中，凝膠過濾色譜分離條件如下:檢測波長:280nm ;柱溫:25°C ;上樣流速 0.5-lmL/min ;進樣濃度:4_5mg/mL ;進樣量:< 0.5mL。
[0052]洗脫條件如下:雙蒸水，洗脫流速0.5-lmL/min。其分離圖譜見圖2，組分B經凝膠柱分離，獲得五個組分，所得組分分別命名為a，b，c，d，e。。
[0053]冷凍干燥使用的設備如前面所述的設備。
[0054](vi)質譜分析多肽氨基酸序列:
[0055]將步驟(V)得到的麥胚蛋白抗氧化肽-2以業(yè)界習用的方式測序，例如，使用超高分辨飛行時間質譜儀分析氨基酸序列，得到母離子m/zl221Da的氨基酸序列為HWPLHKVHAP和母離子m/z2168Da氨基酸序列為PKKSDRCFTLRKCAHTYN的兩個肽段。
[0056]所述質譜儀是美國AB SCIEX公司生產的5800MALDI T0F/T0F超高分辨飛行時間質譜儀，其具體步驟如下:麥胚蛋白抗氧化肽-2樣品與等體積基質溶液(CHC與50%乙腈水溶液配制而成，終濃度為10mg/mL)均勻混合，點0.5 樣品于MALDI靶板點樣空中，自然干燥后再點0.LCHCA(0.5g/L)溶液，室溫下自然干燥。質譜儀條件如下=OptiBeam同軸激光器，激光波長為355nm，離子加速電壓為20kV，頻率為1kHz，正離子反射模式采集數(shù)據(jù)，質譜掃描范圍為m/z500-3000Da，測定結果顯示，在譜圖中，信號較強的母離子為m/zl221.5859和m/z2168.0796，由于這兩個峰均為單一分子離子峰，即為單一肽，由此得出，組分B主要由分子量為1221Da和2168Da的肽段組成。。質譜分析后，將樣品的一級質譜圖與空白對照對比，選取有顯著差異的肽段離子進行串聯(lián)質譜分析，測試結果顯示，圖譜中主要的a型、b型和y型離子峰，并通過手動計算推測，其中分子量為1221Da的肽段由10個氛基酸殘基組成，一級序列為His-Trp-Pro-Leu-His-Lys-Val-His-Ala-Pro (簡稱為HWPLHKVHAP);分子量為2168Da的肽段由18個氨基酸殘基組成，一級序列為Pro-Lys-Lys-Ser-Asp-Arg-Cys-Phe-Thr-Leu-Asp-Lys-Cys-Ala-His-Thr-Tyr-Asn (簡稱為 PKKSDRCFTLRKCAHTYN)。
[0057]本發(fā)明的麥胚蛋白抗氧化肽制備方法，其特點在于采用超濾技術實現(xiàn)脫鹽和除雜蛋白，利用大孔吸附樹脂和凝膠過濾色譜分離純化得到的麥胚蛋白抗氧化由兩個氨基酸序列明確的肽段組成，其序列詳見SEQ ID NO:USEQ ID NO:2。
[0058]前述麥胚蛋白抗氧化肽可在制備治療氧化應激損傷中的藥品、食物等之中應用，其能夠顯著提高H2O2誘導PC12氧化損傷模型的細胞存活率，當劑量為lmg/mL時，PC12細胞存活率可提高34.43 ± 2.45 %。
[0059]作為較為優(yōu)選的實施方案之一，前述麥胚蛋白抗氧化肽對H2O2誘導PC12氧化損傷細胞模型的保護作用可按照以下方法測定:
[0060]PC12細胞的培養(yǎng):PC12細胞采用高糖DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100 i! g/mL鏈霉素)培養(yǎng)，置于37°C、5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中。細胞單層培養(yǎng)，用
0.25%胰蛋白酶溶液消化進行傳代培養(yǎng)。
[0061]PC12細胞氧化損傷模型(實驗模型組)的建立:PC12細胞以1父105個/1細胞濃度接種于96孔板中，培養(yǎng)48h，每孔加入200 u mol/L H2O2溶液(溶于細胞培養(yǎng)液，經
0.22 um濾膜過濾除雜除菌)，培養(yǎng)2h。
[0062]PC12細胞存活率的測定:PC12細胞以I X IO5個/mL細胞濃度接種于96孔板中，培養(yǎng)24h，加入lmg/mL麥胚蛋白抗氧化肽溶液(溶于細胞培養(yǎng)液，經0.22 pm濾膜過濾除雜除菌)，繼續(xù)培養(yǎng)24h，每孔加入200iimol/L H2O2溶液，培養(yǎng)2h。除去培養(yǎng)液，每孔加入20 u LMTT溶液(濃度為5mg/mL)，置于37°C、5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h。除去培養(yǎng)液，每孔加入150 u L DMSO溶液，振蕩lOmin，酶標儀測定96孔板各孔的吸光值A57(lnm。
[0063]細胞存活率)由以下公式計算:
[0064]
【權利要求】
1.一種小麥胚芽蛋白源抗氧化肽，其特征在于，它包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示的序列。
2.一種小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (i)將新鮮小麥胚芽依次經脫脂、干燥、粉碎形成脫脂麥胚粉，再經堿沉酸提方法獲得脫脂麥胚蛋白粉； (ii)將脫脂麥胚蛋白粉溶于水配置成脫脂麥胚蛋白懸液，并調節(jié)PH值8.0-8.5，在50-60°C平衡30min以上，然后加入堿性蛋白酶，在50-60°C進行水解反應，同時維持反應體系的PH值保持恒定，水解反應完畢后，將酶解液于90-100°C滅酶IOmin以上，迅速冷卻，在4°C以8000r/min以上的速度離心30min以上，收集上清液，并以截留分子量為5000-10000Da超濾膜過濾除去大分子物質，將濾液冷凍干燥得麥胚蛋白酶解物； (iii)將麥胚蛋白酶解物溶于水配置成樣品溶液，并使樣品溶液通過大孔吸附樹脂柱，同時以紫外檢測器記錄A22tlnm,當A22tol達到0.05時停止上樣，然后依次用水和體積濃度為15-75 %的乙醇水溶液進行洗滌和洗脫； (iv)步驟(iii)得到的乙醇洗脫液在溫度45-55°C下蒸發(fā)濃縮，再依次進行冷凍干燥和抗氧化活性，收集抗氧化活性最強的組分； (v)將步驟(iv)所獲抗氧化活性最強的組分配置成水溶液，并通過凝膠過濾色譜柱，再用水進行洗脫，按照洗脫峰收集各組分進行冷凍干燥，并進行抗氧化活性的測定，再次收集抗氧化活性最強的組分，即為具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示序列的小麥胚芽蛋白源抗氧化肽。
3.根據(jù)權利要求2所述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，其特征在于，步驟(i)包括:將經正己烷脫脂的新鮮小麥胚芽，置于室溫風干后，粉碎過60-80目篩得脫脂麥胚粉，采用堿沉酸提方法得脫脂麥 胚蛋白粉。
4.根據(jù)權利要求2所述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，其特征在于，步驟(ii)包括:將脫脂麥胚蛋白粉溶于水形成濃度為5w/V% -10w/V%的脫脂麥胚蛋白懸液，用堿調節(jié)pH值至8.0-8.5，在50-60°C條件下平衡30_40min，然后加入0.024AU/g堿性蛋白酶，在50-60°C條件下進行水解反應4h以上，同時用酸或堿維持反應體系的pH值恒定，水解反應完畢后，將酶解液于90-100°C水浴滅酶10-15min，迅速冷卻，在4°C以8000-10000r/min的轉速離心30-35min，收集上清液，將上清液依次以普通濾紙和0.45 y m微孔濾膜過濾，再采用截留分子量為5000-10000Da超濾膜過濾除去大分子物質，將濾液冷凍干燥，獲得麥胚蛋白酶解物。
5.根據(jù)權利要求2所述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，其特征在于，步驟(iii)包括:將步驟(ii)所獲麥胚蛋白酶解物溶于水形成濃度為20-30mg/mL的樣品溶液，讓樣品溶液以l-2mL/min流速通過大孔吸附樹脂柱，紫外檢測器記錄A22tlnm,當A22tlnm達到0.05時停止上樣，然后用水以l_2mL/min流速洗滌1_2個柱體積，再用體積濃度為15-75%的乙醇水溶液以l_2mL/min流速進行洗脫。
6.根據(jù)權利要求2所述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，其特征在于，步驟(iv)包括:將步驟(iii)所獲乙醇洗脫液在溫度45-55°C下進行旋轉蒸發(fā)，再將濃縮組分進行冷凍干燥，而后進行抗氧化活性的測定，并收集抗氧化活性最強的組分。
7.根據(jù)權利要求2所述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，其特征在于，步驟(V)包括:將步驟(iv)所獲抗氧化活性最強的組分溶于水形成濃度為4-5mg/mL的溶液，以.0.5-lmL/min流速通過凝膠過濾色譜柱，再用水以0.5-lmL/min流速進行洗脫，按照洗脫峰收集各組分進行冷凍干燥，再進行抗氧化活性的測定，再次收集抗氧化活性最強的組分。
8.根據(jù)權利要求2或5所述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂包括DA201-C。
9.根據(jù)權利要求2或7所述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽的制備方法，其特征在于，所述凝膠過濾色譜柱包括Superdex Peptidel0/300GL預裝柱。
10.權利要求1所述小麥胚芽蛋白源抗氧化肽在保護氧化損傷細胞中的應用。
【文檔編號】C07K7/06GK103435682SQ201310219236
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年6月3日 優(yōu)先權日:2013年6月3日
【發(fā)明者】朱科學, 郭旭, 郭曉娜, 周惠明, 彭偉 申請人:江南大學