一種利那洛肽的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物合成【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種利那洛肽的制備方法，其在合成線性肽時，載體樹脂采用Wang Resin，相對氯樹脂性質(zhì)較穩(wěn)定、肽不易脫落。同時在合成線性肽時，肽序中六個半胱氨酸中的五個采用價格相對低廉的Fmoc-Cys(Trt)-OH作為反應(yīng)原料，大大降低了合成成本，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。此外，形成三個二硫鍵時，采用一步氧化法，直接將粗肽氧化，形成配對正確的三個二硫鍵，操作簡便實用，收率高，成本低，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。運(yùn)用本發(fā)明的方法制備的利那洛肽，線性粗肽重量收率達(dá)到103.9%，純度可達(dá)82.9%，精肽純度穩(wěn)定在99.12～99.30%之間，總收率達(dá)到32.15%。
【專利說明】一種利那洛肽的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物合成【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種利那洛肽的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 利那洛肽，英文名稱為Linaclotide ;商品名稱為Linzess ;中文通用名稱為利那 洛肽。其為一種多肽藥物，用于治療成人慢性特發(fā)性便秘和便秘型腸易激綜合征（IBS-C)， 具體肽序如下式所示：

【權(quán)利要求】
1. 一種利那洛肽的制備方法，包括如下步驟： 1. Fmoc-Tyr (tBu) -0H 和載體樹脂反應(yīng)，獲得 Fmoc-Tyr (tBu)-樹脂； 2. Fmoc-Tyr (tBu)-樹脂采用逐一偶聯(lián)的方式偶聯(lián)Fmoc保護(hù)基團(tuán)的其他氨基酸，獲得 利那洛肽肽樹脂； 3) 利那洛肽肽樹脂經(jīng)裂解反應(yīng)，獲得利那洛肽粗肽； 4) 利那洛肽粗肽中的三個二硫鍵經(jīng)環(huán)化后，再經(jīng)純化和凍干，獲得利那洛肽； 其特征在于，步驟2)偶聯(lián)時肽序中第5位半胱氨酸、第6位半胱氨酸或者第10位半胱 氨酸采用Fmoc-Cys(Mmt)-〇H，其余半胱氨酸均采用Fmoc-Cys(Trt)-〇H。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟1)中的載體樹脂為Wang Resin，優(yōu)選Wang Resin的替代度為0· 5?1. Ommol/g，更優(yōu)選為0· 7mmol/g。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟2)所述的Fmoc保護(hù)基團(tuán)的其他氨基 酸依次為 Fmoc-Cys(Trt)-〇H、Fmoc-Gly-〇H、Fmoc-Thr(tBu)-〇H、Fmoc-Cys(T;rt)-〇H、 Fmoc-Ala-〇H> Fmoc-Pr〇-〇H> Fmoc-Asn (Trt)-〇H> Fmoc-Cys (Mmt)-〇H> Fmoc-Cys (Trt)-〇H> Fmoc-Tyr (tBu) -OH、Fmoc-Glu (OtBu) -OH、Fmoc-Cys (Trt) -OH 和 Fmoc-Cys (Trt) -OH。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟2)中逐一偶聯(lián)的方式采用的偶聯(lián)試劑為 HOBt/DIC 或 HOBt/PyBop/DIPEA 或 HATU/HOAt/DIPEA。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟3)中裂解試劑的用量為15mL/g樹脂，裂解 試劑為三氟乙酸TFA、苯甲硫醚、苯酚、1，2-乙二硫醇EDT、水和三異丙基硅烷TIS的混合試 劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中裂解試劑中各組分的體積百分含量為TFA :70? 75%，苯甲硫醚：5?8%，苯酚：5?8%，TIS :3?6%，EDT :5?10%，余量為水；優(yōu)選裂解試劑 中各組分的體積比為TFA :苯甲硫醚：苯酚：水：EDT :TIS=75 :5 :5 :5 :8 :2。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟4)中環(huán)化三個二硫鍵的緩沖體系為100? 300mmol/L磷酸二氫鈉、10?50mmol/L鹽酸胍和50?100mmol/L醋酸銨的水溶液，緩沖 體系pH為7. 8 ;采用的氧化試劑為5?30%DMS0及1?5mmol/L EDTA，優(yōu)選緩沖體系為 100mmol/L磷酸二氫鈉、20mmol/L鹽酸胍和50mmol/L醋酸銨的水溶液；氧化劑為10%DMS0 及 2mmo1 /T, EDTA。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，步驟4)中環(huán)化三個二硫鍵的反應(yīng)時間為8?15小時， 優(yōu)選為10小時。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟4)所述的純化為反相高效液相色譜純化。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中反相高效液相色譜純化中，流動相A相為常規(guī)的 0. 1%TFA/水，流動相B相為乙腈。
【文檔編號】C07K1/06GK104231051SQ201310223243
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年6月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月6日
【發(fā)明者】朱日成, 宓鵬程, 馬亞平, 袁建成 申請人:深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司