2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的分離純化工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了2,3,5,4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（以下簡(jiǎn)稱“二苯乙烯苷”）的分離純化工藝，通過稱取二苯乙烯苷提取物經(jīng)硅膠拌樣呈松散狀，置玻璃柱上面用洗脫劑洗脫，經(jīng)過TLC跟蹤檢測(cè)，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶劑，干燥得二苯乙烯苷的提取物，加純水加熱溶解二苯乙烯苷提取物后冷凍結(jié)晶，待其溶化后抽濾，并用純水洗滌，可得類白色的結(jié)晶，將濾渣轉(zhuǎn)移至真空干燥箱干燥，得到二苯乙烯苷純品；該工藝操作簡(jiǎn)單可行，并可以提高產(chǎn)品純度，能夠快速大量地分離和純化二苯乙烯苷；該工藝操作簡(jiǎn)便，成本低廉，收率穩(wěn)定，在保持低成本和高收率的同時(shí)，經(jīng)重結(jié)晶處理后能獲得高純度的二苯乙烯苷，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)的需要。
【專利說明】2, 3, 5, 4f -四羥基二苯乙烯-2-0- ^ -D-葡萄糖苷的分離
純化工藝【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥分離純化【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-0 -D-葡萄糖苷(以下簡(jiǎn)稱“二苯乙烯苷”)的分離純化工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]何首烏，為寥科植物何首烏Polygonum multiflorum Thunb.的干燥塊根，始載于 《開元本草》，分布于華東、中南及河北、山西、陜西、甘肅、臺(tái)灣、四川、貴州、云南等地，具有解毒、消癰、潤(rùn)腸通便之功效，同時(shí)還具有補(bǔ)益精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨和補(bǔ)肝腎。藥理研究表明何首烏具有抗衰老、提高機(jī)體非特異性免疫功能、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心肌、保肝、神經(jīng)保護(hù)及抗菌等藥理活性，臨床研究主要用于治療高脂血癥，失眠癥，白發(fā)，癤腫等。 何首烏中的有效成分主要包括以大黃酚、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚為主的蒽醌類成分及二苯乙烯苷，其中蒽醌類成分能解毒、消癰、潤(rùn)腸通便，而二苯乙烯苷具有明顯的降低膽固醇和保肝作用。二苯乙烯苷是何首烏藥材中的主要活性成分，《中華人民共和國藥典》2010 年版一部對(duì)二苯乙烯苷的總量限度作出明確規(guī)定，何首烏藥材中二苯乙烯苷的總量不得少于1.0%。二苯乙烯苷是何首烏中具有重要藥理作用的活性成分之一，臨床應(yīng)用及現(xiàn)代藥理研究表明二苯乙烯苷具有顯著的抗衰老及降脂作用。
[0003]如何快速分離純化大量的二苯乙烯苷是工業(yè)生產(chǎn)中密切關(guān)注的問題。目前關(guān)于二苯乙烯苷分離純化的方法有結(jié)晶法、聚酰胺吸附色譜法、大孔樹脂吸附色譜法、高速逆流色
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[0004]例如，結(jié)晶法是比較傳統(tǒng)的提取方法，用95%乙醇回流提取何首烏粗粉，回收乙醇得何首烏流浸膏，用適量的蒸餾水稀釋后以等量的乙醚萃取3次，水層用兩倍的醋酸乙酯熱回流5-6h，收集醋酸乙酯層，減壓濃縮至原體積的1/10，室溫下靜置析晶，過濾，得到二苯乙烯苷粗品。粗品于適量熱水或熱醋酸乙酯中溶解，趁熱過濾，放冷析晶，如此反復(fù)結(jié)晶， 得到二苯乙烯苷精品，為灰色無定形結(jié)晶粉末。經(jīng)HPLC法分析，粗品中二苯乙烯苷純度為 68.71%，精品中為99.94%。該方法分離純化得到的二苯乙烯苷純度雖高，然而此法存在著溶劑用量大，工藝復(fù)雜，資源利用率偏低等缺點(diǎn)。
[0005]此外還有研究采用高效液相色譜法分離得到純度較高的二苯乙烯苷單體，但是此方法儀器成本高，溶劑消耗量大，制約了該技術(shù)的發(fā)展。本領(lǐng)域需要有能夠快速和(/或)大量地制備純度較高的二苯乙烯苷的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供二苯乙烯苷的分離純化工藝。
[0007]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0008]二苯乙烯苷的分離純化工藝，具體步驟為:精密稱量初步純化的二苯乙烯苷提取物，加純水I溶解后冷凍結(jié)晶，待其融化后快速抽濾，并用純水II洗滌，可得類白色的結(jié)晶，將濾渣轉(zhuǎn)移至真空干燥箱干燥，得二苯乙烯苷純品。
[0009]優(yōu)選的上述二苯乙烯苷的分離純化工藝，所述初步純化的二苯乙烯苷提取物與用于溶解提取物的純水I及用于洗滌結(jié)晶的純水II的重量:體積:體積按g/ml/ml計(jì)為1:3-7:3-7，冷凍結(jié)晶溫度為-20±1°C _0±1°C。
[0010]優(yōu)選的上述二苯乙烯苷的分離純化工藝，所述初步純化的二苯乙烯苷提取物與用于溶解提取物的純水I及用于洗滌結(jié)晶的純水II的重量:體積:體積按g/ml/ml計(jì)為1:3:5，冷凍結(jié)晶溫度為-10°C ±1°C。
[0011]優(yōu)選的，上述二苯乙烯苷的分離純化工藝，具體步驟如下:
[0012]( I)稱取二苯乙烯苷提取物，加甲醇或95%乙醇將其溶解后，加硅膠拌樣，待溶劑揮發(fā)后研磨成松散狀，其中，二苯乙烯苷提取物、甲醇或95%乙醇和硅膠的重量/體積/重量比按 g/ml/g 計(jì)為 100 =120-200 =100-200 ；
[0013](2)將乙酸乙酯和硅膠按體積重量比ml/g計(jì)5:1進(jìn)行混合，除去氣泡后傾入玻璃柱中，并繼續(xù)不斷加入乙酸乙酯將附著于管壁的硅膠洗下，使玻璃柱表面硅膠平整；
[0014](3)將步驟(1)處理后的樣品加至玻璃柱表層，開始用乙酸乙酯洗脫，經(jīng)過TLC跟蹤檢測(cè)，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶劑，干燥即得二苯乙烯苷提取物；
[0015](4)精密稱量初步純化的二苯乙烯苷提取物，加純水I溶解后冷凍結(jié)晶，待其融化后快速抽濾，并用純水II洗滌，可得類白色的結(jié)晶，將濾渣轉(zhuǎn)移至真空干燥箱干燥，得二苯乙烯苷純品。
[0016]優(yōu)選的,上述二苯乙烯苷的分離純化工藝,所述步驟(4)中初步純化的二苯乙烯苷提取物與用于溶解提取物的純水I及用于洗滌結(jié)晶的純水II的重量:體積:體積按g/ml/ml計(jì)為1:3-7:3-7，冷凍結(jié)晶溫度為-20±1°C _0±1°C。
[0017]優(yōu)選的,上述二苯乙烯苷的分離純化工藝,所述步驟(4)中初步純化的二苯乙烯苷提取物與用于溶解提取物的純水I及用于洗滌結(jié)晶的純水II的重量:體積:體積按g/ml/ml計(jì)計(jì)為1:3:5，冷凍結(jié)晶溫度為-10°C ±1°C。
[0018]本發(fā)明的有益效果是:
[0019]上述二苯乙烯苷的分離純化工藝，克服了現(xiàn)有自二苯乙烯苷提取物(何首烏提取物)中分離純化二苯乙烯苷技術(shù)中存在的不足，操作簡(jiǎn)單可行，并可以提高產(chǎn)品純度，能夠快速大量地分離和純化二苯乙烯苷；該工藝操作簡(jiǎn)便，無污染，成本低廉，收率穩(wěn)定，在保持低成本和高收率的同時(shí)，經(jīng)重結(jié)晶處理后能獲得高純度的二苯乙烯苷，且重復(fù)性好，適用性較廣，純度10%-80%的二苯乙烯苷樣品都可以純化至96%以上，適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)的需要。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖
的含量。
[0021]圖的含量。
[0022]圖
的含量。
I是用3ml純水溶解,2是用5ml純水溶解,3是用7ml純水溶解，
-1O0C 土 1°C中的條件冷凍結(jié)晶，用5ml-1O0C 土 1°C中的條件冷凍結(jié)晶，用5ml-1O0C 土 1°C中的條件冷凍結(jié)晶，用3ml
的純水洗滌得到的純水洗滌得到的純水洗滌得到[0023]圖4是用3ml純水溶解，-10°C 土 1°C中的條件冷凍結(jié)晶，用7ml的純水洗滌得到
的含量。
[0024]圖5是用3ml純水溶解，(TC ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，用3ml的純水洗滌得到的含量。
[0025]圖6是用5ml純水溶解，(TC ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，用7ml的純水洗滌得到的含量。
[0026]圖7是用7ml純水溶解，(TC ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，用5ml的純水洗滌得到的含量。
[0027]圖8是用7ml純水溶解，-20 °C ± TC中的條件冷凍結(jié)晶，用7ml的純水洗滌得到
的含量。
[0028]圖9是用3ml純水溶解，-20 °C ± TC中的條件冷凍結(jié)晶，用5ml的純水洗滌得到
的含量。
[0029]圖10是用5ml純水溶解，-20 °C ± I °C中的條件冷凍結(jié)晶，用3ml的純水洗滌得到
的含量。
圖11是用二苯乙烯苷的提取物(二苯乙烯苷純度50%)分離純化二苯乙烯苷的HPLC檢測(cè)圖譜。
圖12是用二苯乙烯苷的提取物(80%)分離純化二苯乙烯苷的HPLC檢測(cè)圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0030]為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合附圖及【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0031]以下實(shí)施例中的二苯乙烯苷提取物均為購自市場(chǎng)的何首烏提取物，經(jīng)HPLC檢測(cè)， 上述二苯乙烯苷提取物中的二苯乙烯苷的純度為10%-80%。通過下面的實(shí)施例用來說明本發(fā)明，但是不用來限制本發(fā)明的范圍。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。在本發(fā)明中(除實(shí)施例I和2 二苯乙烯苷純品采用超高效液相色譜法檢測(cè)，色譜柱:ACQUITY UPLC BEH C18 (3.0X 100mm, 1.7 u m);流動(dòng)相:乙腈:/jC =10:90 ;流速:0.4mL/min ;柱溫:50°C ;檢測(cè)波長(zhǎng): 320nm)，其余檢測(cè)提取物或單體成分所使用的HPLC方法為《中華人民共和國藥典》關(guān)于何首烏中二苯乙烯苷的測(cè)定方法，如下表所示。采用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定其純度。二苯乙烯苷對(duì)照品購于中國食品藥品檢定研究院，含量以94.7%計(jì)；批號(hào):110844-201109 ;條形碼: 8E0S-NMAB。
[0032]色譜柱:AgilentEclipse XDB-C18 (4.6 X 150mm, 5 U m);
[0033]流動(dòng)相:乙腈冰=18:82
[0034]流速:lmL/min;
[0035]柱溫:20°C；
[0036]檢測(cè)波長(zhǎng):320nm；
[0037]方法:以流動(dòng)相(乙腈冰=18:82)等度洗脫，時(shí)間15min。
[0038]實(shí)施例1[0039]用二苯乙烯苷的提取物(二苯乙烯苷純度50%)分離純化二苯乙烯苷，具體步驟如下:
[0040](I)稱取50% 二苯乙烯苷提取物110g，置于燒杯中，加95% (v/v)乙醇150ml將其充分混合溶解后，加150g硅膠(200-300目)拌樣，在通風(fēng)櫥里研磨并使溶劑自然揮干呈松散狀；
[0041](2)將5000ml乙酸乙酯和1000g硅膠(100-200目)進(jìn)行混合，攪拌以除去氣泡，
待浸泡完全后慢慢傾入玻璃柱中，然后繼續(xù)加入乙酸乙酯，將附著于管壁的硅膠洗下，使玻璃柱表面硅膠平整；
[0042](3)將步驟(1)處理后的樣品緩緩加在已制備好的玻璃柱上面，用乙酸乙酯洗脫，每600ml為I個(gè)流份，共收集20個(gè)流份，經(jīng)過TLC跟蹤檢測(cè)，合并4~19，在365nm下可觀察到藍(lán)色熒光，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶劑，干燥即得二苯乙烯苷的提取物；
[0043](4)精密稱量初步純化的二苯乙烯苷提取物約70g，置于燒杯中，用約3倍量(210ml)的純水I加熱溶解后，置于-10°C 土 1°C的條件下冷凍至結(jié)晶后取出，待室溫條件下溶化后轉(zhuǎn)移至抽濾裝置中抽濾，并用5倍量(350ml)的純水II少量分次洗滌，可見濾渣為類白色的結(jié)晶，將濾渣轉(zhuǎn)移至真空干燥箱減壓干燥即得二苯乙烯苷純品41.78g，經(jīng)HPLC檢測(cè)，通過低溫水媒法處 理后，二苯乙烯苷的純度97.76%，結(jié)果見圖11。
[0044]實(shí)施例2
[0045]用二苯乙烯苷的提取物(80%)分離純化二苯乙烯苷，具體步驟如下:
[0046]稱量二苯乙烯苷樣品(80% 二苯乙烯苷的提取物)約70g，置于燒杯中，用約3倍量(210ml)的純水I加熱溶解后，置于_10±1°C的條件下冷凍至結(jié)晶后取出，待室溫條件下溶化后轉(zhuǎn)移至抽濾裝置中抽濾，并用5倍量(350ml)的純水II少量分次洗滌，可見濾渣為類白色的結(jié)晶，將濾渣轉(zhuǎn)移至真空干燥箱減壓干燥即得二苯乙烯苷純品41.59g J^HPLC檢測(cè)，通過低溫水媒法處理后，二苯乙烯苷的純度96.50%，結(jié)果見圖12。
[0047]實(shí)施例3
[0048]用二苯乙烯苷的提取物(50%)分離純化二苯乙烯苷，具體步驟如下:
[0049](I)稱取50% 二苯乙烯苷提取物100g，置于燒杯中，加120ml95%乙醇將其充分混合溶解后，加200g硅膠(200-300目)拌樣，在通風(fēng)櫥里研磨并使溶劑自然揮干呈松散狀；
[0050](2)將5000ml乙酸乙酯和1000g硅膠(100-200目)進(jìn)行混合，攪拌以除去氣泡，待浸泡完全后慢慢傾入玻璃柱中，然后繼續(xù)加入乙酸乙酯，將附著于管壁的硅膠洗下，使玻璃柱表面硅膠平整；
[0051](3)將步驟(1)處理后的樣品緩緩加在已制備好的玻璃柱上面，用乙酸乙酯洗脫，每600ml為I個(gè)流份，共收集20個(gè)流份，經(jīng)過TLC跟蹤檢測(cè)，合并4~19，在365nm下可觀察到藍(lán)色熒光，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶劑，干燥即得二苯乙烯苷的純化粗品；
[0052](4)精密稱量初步純化的二苯乙烯苷提取物約10g，置于燒杯中，用約5倍量(50ml)的純水I加熱溶解后，置于_20°C ± 1°C的條件下冷凍至結(jié)晶后取出，待室溫條件下溶化后轉(zhuǎn)移至抽濾裝置中抽濾，并用5倍量(50ml)的純水II少量分次洗滌，可見濾渣為類白色的結(jié)晶，將濾渣轉(zhuǎn)移至真空干燥箱減壓干燥即得二苯乙烯苷純品7.53g，經(jīng)HPLC檢測(cè)，通過低溫水媒法處理后，二苯乙烯苷的純度91.7%。
[0053]實(shí)施例4[0054]用二苯乙烯苷的提取物(50%)分離純化二苯乙烯苷，具體步驟如下:
[0055](I)稱取50% 二苯乙烯苷提取物100g，置于燒杯中，加200ml95%乙醇將其充分混合溶解后，加100g硅膠(200-300目)拌樣，在通風(fēng)櫥里研磨并使溶劑自然揮干呈松散狀；
[0056](2)將5000ml乙酸乙酯和1000g硅膠(100-200目)進(jìn)行混合，攪拌以除去氣泡， 待浸泡完全后慢慢傾入玻璃柱中，然后繼續(xù)加入乙酸乙酯，將附著于管壁的硅膠洗下，使玻璃柱表面硅膠平整；
[0057](3)將步驟(1)處理后的樣品緩緩加在已制備好的玻璃柱上面，用乙酸乙酯洗脫， 每600ml為I個(gè)流份，共收集20個(gè)流份，經(jīng)過TLC跟蹤檢測(cè)，合并4~19，在365nm下可觀察到藍(lán)色熒光，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶劑，干燥即得二苯乙烯苷的純化粗品；
[0058](4)精密稱量初步純化的二苯乙烯苷提取物約10g，置于燒杯中，用約4倍量 (40ml)的純水I加熱溶解后，置于_15°C ±1°C的條件下冷凍至結(jié)晶后取出，待室溫條件下溶化后轉(zhuǎn)移至抽濾裝置中抽濾，并用5倍量(50ml)的純水II少量分次洗滌，可見濾渣為類白色的結(jié)晶，將濾渣轉(zhuǎn)移至真空干燥箱減壓干燥即得二苯乙烯苷純品7.47g，經(jīng)HPLC檢測(cè)， 通過低溫水媒法處理后，二苯乙烯苷的純度94.32%。
[0059]工藝比較試驗(yàn)例
[0060]制備80% 二苯乙烯苷含量的提取物:稱取50%的二苯乙烯苷提取物約20g，采用硅膠柱層析的方法用乙酸乙酯等度洗脫，并根據(jù)薄層色譜跟蹤檢測(cè)，使二苯乙烯苷完全被洗脫，合并含二苯乙烯苷的洗脫液，回收溶解得到二苯乙烯苷樣品粉末。以下試驗(yàn)均使用該樣品粉末(二苯乙烯苷含量約80%)。
[0061]試驗(yàn)1:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用3mL純水加熱溶解，使其在-10°C ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用5mL的純水洗滌濾渣，所得固體干燥成粉末。經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度96.72%，見圖1。
[0062]試驗(yàn)2:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用5mL純水加熱溶解，使其在-10°C ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用5mL的純水洗`滌濾渣，所得固體干燥成粉末。經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度為96.31%，見圖2。
[0063]試驗(yàn)3:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用7mL純水加熱溶解，使其在-10°C ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用3mL的純水洗滌濾渣，所得固體干燥成粉末。取樣，用HPLC進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度為91.80%，見圖3。
[0064]試驗(yàn)4:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用3mL純水加熱溶解,并使其在-10°C ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用7mL的純水洗滌濾渣，所得固體干燥成粉末。取樣，經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度為91.31%，見圖4。
[0065]試驗(yàn)5:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用3mL純水加熱溶解,使其在(TC ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用3mL的純水洗滌濾渣，所得固體干燥成粉末。取樣，經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度為93.83%，見圖5。
[0066]試驗(yàn)6:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用5mL純水加熱溶解,使其在(TC ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用7mL的純水洗滌濾渣，所得固體干燥成粉末。取樣，經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度為93.36%，見圖6。
[0067]試驗(yàn)7:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用7mL純水加熱溶解，使其在(TC ±1°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用5ml的純水洗滌濾渣，所得固體干燥成粉末。取樣，經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度為91.51%，見圖7。
[0068]試驗(yàn)8:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用7mL純水加熱溶解，并使其在_20°C ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用7mL純水洗滌濾洛，所得固體干燥成粉末。取樣，經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度為93.01%，見圖8。
[0069]試驗(yàn)9:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用3mL純水加熱溶解，使其在-20°C ±1°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用5mL的純水洗滌濾渣，所得固體干燥成粉末。取樣，經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度為96.64%，見圖9。
[0070]試驗(yàn)10:稱取上述二苯乙烯苷樣品約1.0g置于試管中，用5mL純水加熱溶解,并使其在_20°C ± I°C中的條件冷凍結(jié)晶，取出待溶化后，采用抽濾裝置抽濾，并用3mL的純水洗滌濾渣，所得固體干燥成粉末。取樣，經(jīng)HPLC檢測(cè)后，二苯乙烯苷的純度為89.25%，見圖10。
[0071]綜上，通過試驗(yàn)1-10可以看出，本發(fā)明的分離純化工藝中，每1.0g 二苯乙烯苷樣品使用溶媒(純水)的體積是3ml，結(jié)晶溫度是-10°C ± I°C，洗滌體積是5ml時(shí)，效果更好。
[0072]上述參照【具體實(shí)施方式】對(duì)該2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2_0_ β -D-葡萄糖苷的分離純化工藝進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個(gè)實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(以下簡(jiǎn)稱“二苯乙烯苷”)的分離純化工藝，其特征在于:具體步驟為:精密稱量初步純化的二苯乙烯苷提取物，加純水I溶解后冷凍結(jié)晶，待其融化后快速抽濾，并用純水II洗滌，可得類白色的結(jié)晶，將濾渣轉(zhuǎn)移至真空干燥箱干燥，得二苯乙烯苷純品 。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二苯乙烯苷的分離純化工藝，其特征在于:所述初步純化的二苯乙烯苷提取物與用于溶解提取物的純水I及用于洗滌結(jié)晶的純水II的重量:體積:體積按g/ml/ml計(jì)為1:3-7:3_7，冷凍結(jié)晶溫度為_20±1°C -0±l°Co
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的二苯乙烯苷的分離純化工藝，其特征在于:所述初步純化的二苯乙烯苷提取物與用于溶解提取物的純水I及用于洗滌結(jié)晶的純水II的重量:體積:體積按g/ml/ml計(jì)為1:3:5，冷凍結(jié)晶溫度為_10°C ±1°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二苯乙烯苷的分離純化工藝，其特征在于:具體步驟如下:(1)稱取二苯乙烯苷提取物，加甲醇或95%乙醇將其溶解后，加硅膠拌樣，待溶劑揮發(fā)后研磨成松散狀，其中，二苯乙烯苷提取物、甲醇或95%乙醇和硅膠的重量/體積/重量比按 g/ml/g 計(jì)為 100:120-200:100-200 ；(2)將乙酸乙酯和硅膠按體積重量比ml/g計(jì)5:1進(jìn)行混合，除去氣泡后傾入玻璃柱中，并繼續(xù)不斷加入乙酸乙酯將附著于管壁的硅膠洗下，使玻璃柱表面硅膠平整；(3)將步驟(1)處理后的樣品加至玻璃柱表層，開始用乙酸乙酯洗脫，經(jīng)過TLC跟蹤檢測(cè)，合并含有二苯乙烯苷的流份，回收溶劑，干燥即得二苯乙烯苷提取物；(4)精密稱量初步純化的二苯乙烯苷提取物，加純水I溶解后冷凍結(jié)晶，待其融化后快速抽濾，并用純水II洗滌，可得類白色的結(jié)晶，將濾渣轉(zhuǎn)移至真空干燥箱干燥，得二苯乙烯苷純品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的二苯乙烯苷的分離純化工藝，其特征在于:所述步驟(4)中初步純化的二苯乙烯苷提取物與用于溶解提取物的純水I及用于洗滌結(jié)晶的純水II的重量:體積:體積按g/ml/ml計(jì)為1:3-7:3_7，冷凍結(jié)晶溫度為-20 +TC -0±l°Co
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的二苯乙烯苷的分離純化工藝，其特征在于:所述步驟(4)中初步純化的二苯乙烯苷提取物與用于溶解提取物的純水I及用于洗滌結(jié)晶的純水II的重量:體積:體積按g/ml/ml計(jì)為1:3:5，冷凍結(jié)晶溫度為-10±1°C。
【文檔編號(hào)】C07H15/203GK103524576SQ201310350567
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年8月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月12日
【發(fā)明者】王躍飛, 高秀梅, 朱彥, 劉二偉, 劉海濤, 焦玉嬌, 楊靜 申請(qǐng)人:天津中醫(yī)藥大學(xué)