一種制備高純度非達霉素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種制備高純度非達霉素的方法。具體的，本發(fā)明的方法包括使用樹脂層析和結(jié)晶的技術(shù)制備高純度非達霉素。本發(fā)明的優(yōu)點是兩次柱層析都采用了普通的常壓柱而沒有采用中壓制備色譜，從而大大減少了生產(chǎn)的前期設備投入，對設備要求低，有效的降低了生產(chǎn)成本，并且本發(fā)明采用樹脂吸附和結(jié)晶的技術(shù)方法純化非達霉素，操作方法簡單，收率和純度大大提高，本發(fā)明的總收率為50~60%，純度99%以上，更適合應用于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種制備高純度非達霉素的方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及工業(yè)微生物【技術(shù)領域】，具體涉及一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的提取方法， 更具體的，涉及非達霉素的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 艱難梭菌感染（67〇5^/^￡//應￡///'_/<^7<9//?/'61<^/〇/7，0)1)是一種厭氧的革蘭氏陽 性芽孢桿菌過度生長并釋放毒素引起，可導致結(jié)腸炎癥、嚴重腹瀉甚至死亡。
[0003] 非達霉素（Fidaxomicin)是一種由放線菌屬指孢囊菌 NRRL 18085 發(fā)酵產(chǎn)生的 18 兀環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生 素，又叫非達米星、臺勾霉素 B，2011年5月27日獲FDA批準，用于治療難辨梭菌(難辨梭 狀芽胞桿菌）相關性腹瀉（CDAD)的抗生素。其作用機理新穎，主要是通過抑制細菌的RNA 聚合酶而產(chǎn)生迅速的抗難治梭狀芽孢桿菌感染（CDI)作用。其治療CDI優(yōu)于現(xiàn)有藥物。同 時，研究發(fā)現(xiàn)非達霉素可用于治療胃腸癌，具有非常廣闊的前景。非達霉素 CAS Registry Number: 873857-62-6 ;分子式=C52H74Cl2O18 ;結(jié)構(gòu)式如下式 I :
【權(quán)利要求】
1. 一種制備高純度非達霉素的方法，該方法包括以下步驟： 1) 將從非達霉素發(fā)酵液中分離出的菌絲體用極性有機溶劑浸提，過濾得到濾液； 2) 將濾液加水稀釋后，導入大孔吸附樹脂進行吸附； 3) 吸附完畢，采用極性溶劑的水溶液作為預洗液對樹脂凈化，然后用極性溶劑與水混 合而成的解吸液進行解吸，得到非達霉素的粗品解吸液I ; 4) 將解吸液I濃縮，結(jié)晶，得到非達霉素粗品； 5) 非達霉素粗品用乙腈的水溶液溶解成上柱液，導入大孔吸附樹脂進行吸附，經(jīng)解吸 液解吸得到高純度的非達霉素解吸液II ; 6) 將非達霉素解吸液II蒸除溶劑得到固體，再用極性有機溶劑重結(jié)晶，得到非達霉素 產(chǎn)品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中步驟1)中所述的分離為過濾、壓濾或離心；所述的 極性溶劑選自甲醇、乙醇或丙酮中的一種，或其中任一種與水的混合溶液，溶劑用量與菌絲 體的體積重量比為廣5:1 (ml/g)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其中所述甲醇、乙醇或丙酮中任一種與水的混合溶液的 濃度為50%?80% (V/V)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中步驟2)所述的大孔樹脂為DIAION HP20、HP21、 SEPABEADS、SP825L、SP850、SP700、SP70或SP207,其用量與上柱液中非達霉素的體積重量 比為 50?150:1 (ml/g)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中步驟2)所述的將濾液加水稀釋是將濾液稀釋至有機 溶劑濃度為30%?60%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中步驟3)所述極性溶劑為甲醇、乙醇或丙酮；所述的 預洗液濃度為509T70% (V/V)，用量為2~3倍柱體積；所述解吸液的濃度為60%-90% (V/V)， 用量為2-5倍柱體積。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中步驟4)所述的濃縮是在40°C飛0°C溫度下進行，濃 縮至有機溶劑濃度為1(T15%。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中步驟4)所述的結(jié)晶為將濃縮后的解吸液I溫度降 至0°C ~20°C，抽濾、壓濾或離心后得到非達霉素的一次結(jié)晶品的過程或者是將非達霉素的 一次結(jié)晶品再用有機溶劑進行一次或多次結(jié)晶的過程。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述方法，其中所述的有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸 乙酯中的一種，或選自混合溶劑甲醇/水、乙醇/水、乙酸乙酯/石油醚、乙酸乙酯/正已烷 中的一種。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中步驟5)所述的大孔吸附樹脂為UniPS3、UniPS5、 UniPSlO、UniPS15、UniPS20、UniPS30、UniPS40 或 UniPS50,其用量與上柱液中非達霉素粗 品重量比為50?150:1 (V/W)。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中步驟5)所述的乙腈水溶液濃度為50% ;所述的解吸 液為40~70%的乙腈水溶液，所述解吸液用量為5~12倍柱體積。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其中步驟6)所述的極性溶劑為甲醇、乙醇或異丙醇。
【文檔編號】C07H1/06GK104418925SQ201310400591
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月5日
【發(fā)明者】唐恒, 楊久林, 孟憲柱, 袁建棟 申請人:重慶乾泰生物醫(yī)藥有限公司, 博瑞生物醫(yī)藥技術(shù)(蘇州)有限公司