固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的工藝方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明為一種固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的工藝方法，它是以碳酸鈣為模板，在層層自組裝技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合仿生硅化及仿生粘合思想實(shí)現(xiàn)多酶分隔式固定用于去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖。本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單，條件溫和，對(duì)酶活性損失??；制備的固定化酶用于去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖，葡萄糖去除率可達(dá)到80%以上，且重復(fù)使用率較高；載體廉價(jià)易得。
【專(zhuān)利說(shuō)明】固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的工藝方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于固定化酶應(yīng)用領(lǐng)域，特別是一種固定化多酶用于去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品(IM0-500)中葡萄糖的工藝方法。
【背景技術(shù)】
[0002]低聚異麥芽糖被稱(chēng)為“雙歧因子”。經(jīng)多年研究表明，雙歧桿菌有許多保健功能，而作為雙歧因子的低聚異麥芽糖受到了人們的關(guān)注。自然界中極少的低聚異麥芽糖是以游離狀態(tài)存在的，因此不能通過(guò)提取分離純化過(guò)程直接獲得。由于低聚異麥芽糖多作為支鏈淀粉、右旋糖和多糖等的組成部分，所以由這些原料生產(chǎn)低聚異麥芽糖是最直接、最經(jīng)濟(jì)的途徑。我國(guó)生產(chǎn)的低聚異麥芽糖產(chǎn)品大多是功能成分為50%(頂0-500)的初級(jí)產(chǎn)品，嚴(yán)重影響了其功能效價(jià)和商業(yè)價(jià)值。而把初級(jí)產(chǎn)品制成功能成分90%以上(頂0-900)的低聚異麥芽糖，其經(jīng)濟(jì)效益大幅度提高。因此，提高低聚異麥芽糖的純度，即成為工藝需要解決的關(guān)鍵問(wèn)題。
[0003]關(guān)于低聚異麥芽糖產(chǎn)品純化的文獻(xiàn)報(bào)道包括:文獻(xiàn)1:Science and Technologyof Food industry, 2002，23 (5):27-30將釀酒酵母As2.109馴化后，用于發(fā)酵法分離純化低聚異麥芽糖。文獻(xiàn)2:食品科學(xué)，2004，25(增刊):82-85利用酵母發(fā)酵法對(duì)低純度的低聚異麥芽糖產(chǎn)品進(jìn)行純化。通過(guò)對(duì)酵母菌進(jìn)行篩選實(shí)驗(yàn)，選育出一株只利用葡萄糖和麥芽糖，而不利用低聚異麥芽糖的酵母菌。利用此菌對(duì)低聚異麥芽糖產(chǎn)品進(jìn)行純化，最終純度可達(dá)到99%。以 上方法對(duì)低聚異麥芽糖產(chǎn)品純化的效率較高，但菌種選育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，反應(yīng)后的菌種不易再重復(fù)使用。文獻(xiàn)3 Journal of South China AgriculturalUniversity, 2005, 26(4): 102-105利用葡萄糖氧化酶與過(guò)氧化氫酶的協(xié)同作用提純低聚異麥芽糖產(chǎn)品，異麥芽糖純度由62.78%提高到85.28%。此方法簡(jiǎn)單易行，但游離酶反應(yīng)后不能回收利用，造成較大的浪費(fèi)。此方法借鑒了活細(xì)胞中的酶催化過(guò)程，細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)轉(zhuǎn)化通常涉及到多種酶的協(xié)同催化過(guò)程，但此方法使用的是游離酶，不易回收，如果把酶固定將會(huì)在生產(chǎn)應(yīng)用中的研究意義更大。受此啟發(fā)，模擬生物內(nèi)多酶系統(tǒng)進(jìn)行多酶系統(tǒng)的構(gòu)建將為實(shí)現(xiàn)多酶催化過(guò)程的高效進(jìn)行開(kāi)辟新途徑。
[0004]固定化葡萄糖氧化酶與過(guò)氧化氫酶的文獻(xiàn)報(bào)道包括:文獻(xiàn)1:生物工程學(xué)報(bào)，1987，3(1):46-52利用重氮鹽共價(jià)鍵合法將GOD與CAT共同接到交聯(lián)瓊脂糖上制備固定化雙酶系統(tǒng)。文獻(xiàn) 2 =Macromolecular Bioscience, 2004，4(10):950-956 將 GOD 與 CAT共同固定于臨近于陰離子交換膜的聚合物膜上，用以葡萄糖酸的生產(chǎn)。文獻(xiàn)3 Journal ofMicrobiology and Biotechnology, 2007, 17(6):960-967 將 GOD 和 CAT 固定于娃酸續(xù)載體，并研究了同時(shí)固定與順序固定的差別。結(jié)果顯示，無(wú)論在酶活方面還是成本消耗方面，順序固定的方法均優(yōu)于同時(shí)固定。與單獨(dú)固定的GOD相比，最適條件幾乎未有變動(dòng)。而在重復(fù)使用與催化效率方面，共固定系統(tǒng)遠(yuǎn)超單獨(dú)固定的酶。文獻(xiàn)4 Journal of Applied PolymerScience, 2004, 91 (6)，4057-4063將GOD和CAT固定于改性的丙烯晴共聚物細(xì)胞膜上。
[0005]以上相關(guān)文獻(xiàn)介紹了固定化葡萄糖氧化酶與過(guò)氧化氫酶的不同方法及應(yīng)用。盡管目前以上策略致力于實(shí)現(xiàn)雙酶固定，但仍亟待開(kāi)發(fā)溫和、高效、簡(jiǎn)便、適用性強(qiáng)的固定化多酶的載體。目前為止，文獻(xiàn)中還未見(jiàn)采用層層自組裝技術(shù)結(jié)合仿生硅化、仿生粘合思想分隔式固定化葡萄糖氧化酶與過(guò)氧化氫酶用于去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是針對(duì)當(dāng)前共固定化多酶體系存在的(I)各種酶的獨(dú)立調(diào)控性較差；(2)各種酶的固定化位置隨意，較難達(dá)到形成底物產(chǎn)物鏈的目的；(3)多酶的相互接觸可能導(dǎo)致各自催化性能受影響的缺點(diǎn)，提供了一種操作簡(jiǎn)單、成本低廉的分隔式固定化多酶的方法，并將此固定化多酶用于去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖。它是以碳酸鈣為模板，在層層自組裝技術(shù)的基礎(chǔ)上，結(jié)合仿生硅化及仿生粘合思想實(shí)現(xiàn)多酶分隔式固定用于去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖。該方法所用載體價(jià)廉易得、成本較低，而且分隔式固定化多酶去除葡萄糖的效率較高且可重復(fù)利用。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0008]一種固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的工藝方法，包括以下步驟:
[0009]I)固定化多酶的制備:①聚苯乙烯磺酸鈉(PSS)摻雜的含葡萄糖氧化酶(GOD)的碳酸鈣微粒的制備:①取0.33mol/L的CaCl2 ? 2H20溶液10ml，在其中加入300mgPSS和800UG0D,然后在攪拌下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置15-30min，搖勻，離心，去上清液 ，水洗，得到碳酸鈣微粒向上面得到的全部碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) rCaC03中加入2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSS/PDADMAC)!-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) 2-CaC03 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；@再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌4_8h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6-12h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶。
[0010]2)固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖:將上述制備的固定化多酶全部放于3ml、pH=2-7的200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液中，保持30_50°C反應(yīng)12_24h，加A SO-1lOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化；最后得到去除葡萄糖的低聚異麥芽糖溶液。
[0011]上述固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的工藝方法所涉及物質(zhì)的量均可按相應(yīng)比例整體擴(kuò)大或縮小。
[0012]所述的pH=8.5的Tris-HCl緩沖液配制方法如下:稱(chēng)取Tris固體1.2g，用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到1.2g/L的Tris溶液；母液2:稱(chēng)取濃鹽酸Ig (質(zhì)量分?jǐn)?shù)為37%)，用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到0.37g/L的HCl溶液，之后按體積比母液1:母液2=20:3將二者混合，并用pH計(jì)校正后得到。
[0013]所述的硅前驅(qū)體溶液的制備如下:在室溫下將TMOS (正硅酸甲酯)加入到0.37g/L的HCL溶液中，TMOS完全溶解、澄清后再加入pH=7磷酸鹽緩沖液，混勻；其物料配比為體積比:TM0S:HCL溶液:磷酸緩沖液=1:19:200。
[0014]所述的2mg/mL的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液的制備方法如下:稱(chēng)取去甲腎上腺素固體200mg，用100ml的容量瓶加上述pH=8.5的Tris-HCl緩沖液定容即得到2mg/mL的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:
[0016]1.本發(fā)明在層層自組裝技術(shù)基礎(chǔ)上，結(jié)合仿生硅化及仿生粘合思想分隔式固定化葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化氫酶，制備工藝簡(jiǎn)單，條件溫和，對(duì)酶活性損失小。
[0017]2.制備的固定化酶用于去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖，葡萄糖去除率可達(dá)到80%以上，且重復(fù)使用率較高；(酶活回收率為72.85%。本方法固定化酶活力也較高，達(dá)到2668U/g。而文獻(xiàn):Min DD, Zhang XD, He ff, Zhang Y, Li Pff, Zhang MM, Liu JN, Liu SJ, XuFX, Du Y, Zhang ZL.J Mater Chem B, 2013, 10:29.提到其酶活力最大只能達(dá)到 238.93U/g。且制備的固定化酶可用于去除低聚異麥芽糖中的葡萄糖，去除率達(dá)到80.73%，重復(fù)6次，去除率仍可達(dá)到70.22%。)
[0018]3.載體廉價(jià)易得。
【具體實(shí)施方式】
[0019]本發(fā)明所用的TMOS購(gòu)自于天津市化學(xué)試劑研究所。
[0020]本發(fā)明所用的去甲腎上腺素購(gòu)自湖北巨順宏生物化工有限公司。
[0021]本發(fā)明所用的葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化氫酶均購(gòu)于sigma公司。
[0022]本發(fā)明所述的磷酸鹽緩沖溶液為Na2HPO4-NaH2PO4緩沖溶液。
[0023]實(shí)驗(yàn)所用pH=7的磷酸鹽緩沖液配制方法如下:母液1:稱(chēng)取NaH2PO4.2H20固體0.lmol，用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到0.lmol/L的NaH2PO4溶液；母液2:稱(chēng)取Na2HPO4.12H20固體0.lmol，用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到0.lmol/L的Na2HPO4溶液，之后按體積比母液1:母液2=2:3將二者混合，并用pH計(jì)校正后得到。
[0024]實(shí)驗(yàn)所用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液配制方法如下:母液1:稱(chēng)取Tris固體1.2g,用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到1.2g/L (約lOmmol/L)的Tris溶液；母液2:稱(chēng)取濃鹽酸Ig(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為37%)，用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到0.37g/L (約IOmmol/L)的HCl溶液，之后按體積比母液1:母液2=20:3將二者混合，并用pH計(jì)校正后得到。
[0025]實(shí)驗(yàn)所用2mg/mL的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液的制備方法如下:稱(chēng)取去甲腎上腺素固體200mg，用100ml的容量瓶加上述pH=8.5的Tris-HCl緩沖液定容即得到2mg/mL的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液。
[0026]實(shí)驗(yàn)所用0.33mol/L的CaCl2.2H20溶液和Na2CO3溶液配制方法如下:稱(chēng)取CaCl2.2H20固體0.33mol,用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到0.33mol/L的CaCl2.2H20溶液；稱(chēng)取Na2CO3固體0.33mol,用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到0.33mol/L 的 Na2CO3 溶液。
[0027]實(shí)驗(yàn)所用2mg/mL的PDADMAC溶液和PSS溶液配制方法如下:母液1:稱(chēng)取NaCl固體0.5mol，用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到0.5mol/LNaCl溶液；稱(chēng)取PSS固體1000mg，用500ml的容量瓶加母液I定容即得到2mg/mL的PSS溶液；稱(chēng)取PDADMAC液體lOOOmg，用500ml的容量瓶加母液I定容即得到2mg/mL的PDADMAC溶液。
[0028]實(shí)驗(yàn)所用的硅前驅(qū)體溶液配制方法如下:在室溫下將TMOS (正硅酸甲酯，分析純)加入到1.2g/L的HCL溶液中，TMOS完全溶解、澄清后再加入pH=7磷酸鹽緩沖液，混勻；其物料配比為體積比:TM0S:HCL溶液:磷酸緩沖液=1:19:200。
[0029]實(shí)驗(yàn)所用pH=2_7的200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液配制方法如下:稱(chēng)取低聚異麥芽糖產(chǎn)品(頂0-500) 20g，用100ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液；之后用lmol/L的HCI溶液和lmol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液的PH值，用pH計(jì)校正即可。
[0030]實(shí)例1:
[0031]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PssZPDADMAC)1-CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有P SS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。
[0032]將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml，pH=2)中，保持溫度(40°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率達(dá)到59.9%。
[0033]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為41.8%。
[0034]實(shí)例2:
[0035]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液 ，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。
[0036]將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml, pH=3)中，保持溫度(40°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率達(dá)到69.8%。
[0037]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為50.4%。
[0038]實(shí)例3:
[0039]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下 加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。
[0040]將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml，pH=4)中，保持溫度(40°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率達(dá)到80.7%。
[0041]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為70.2%。
[0042]實(shí)例4:
[0043]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。
[0044]將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml，pH=4.5)中，保持溫度(40°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率達(dá)到77.7%。
[0045]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為66.3%。[0046]實(shí)例5:
[0047]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。
[0048]將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml, pH=6)中，保持溫度(40°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率達(dá)到63.4%。
[0049]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為52.7%。
[0050]實(shí)例6:[0051]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。
[0052]將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml，pH=4)中，保持溫度(30°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率達(dá)到65.22%。
[0053]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為53.9%。
[0054]實(shí)例7:
[0055]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。
[0056]將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml，pH=4)中，保持溫度(35°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率達(dá)到76.3%。
[0057]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為65.7%。
[0058]實(shí)例8:
[0059]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。
[0060] 將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml, pH=4)中，保持溫度(45°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率達(dá)到78.5%。[0061]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為67.2%。
[0062]實(shí)例9:
[0063]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。
[0064]將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml，pH=4)中，保持溫度(50°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率達(dá)到62.7%。
[0065]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為51.5%。
[0066]實(shí)例10:
[0067]①取0.33mol/L 的 CaCl2.2Η20 溶液 10ml，在其中加入 300mgPSS 和 800UG0D，然后在磁力攪拌器(600r/min)下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置20min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上述全部碳酸鈣微粒中加Λ 2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSSA3DADMAC)1-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩 15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAO2-CaCO3 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，使粒子重新分散，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；④再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶，凍干稱(chēng)重為103.3mg。[0068]將上述制備的固定化多酶放于200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液(3ml, pH=4)中，保持溫度(40°C)反應(yīng)12h，加入IOOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化。用HPLC方法檢測(cè)分離純化后糖液的組分，之后用葡萄糖去除率(Degradation Rate)=l_殘夜葡萄糖殘余量/原始葡萄糖含量計(jì)算葡萄糖的去除率，葡萄糖的去除率為70.2%。
[0069]以上操作重復(fù)6次，葡萄糖的去除率依然較高，為61.1%。
[0070]本發(fā)明的實(shí)施例僅為對(duì)發(fā)明的具體說(shuō)明，不視為對(duì)發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0071]本發(fā)明未盡事宜為公知技術(shù)。
【權(quán)利要求】
1.一種固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的工藝方法，其特征為包括以下步驟: 1)固定化多酶的制備:①聚苯乙烯磺酸鈉(PSS)摻雜的含葡萄糖氧化酶(GOD)的碳酸鈣微粒的制備:①取0.33mol/L的CaCl2 ? 2H20溶液IOml,在其中加入300mgPSS和800UG0D,然后在攪拌下加入IOml的0.33mol/L的Na2CO3溶液，使其持續(xù)攪拌20s，將其靜置15-30min，搖勻，離心，去上清液，水洗，得到碳酸鈣微粒向上面得到的全部碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清，水洗，得到PSS包裹的碳酸鈣微粒；之后向PSS包裹的碳酸鈣微粒中加入2mg/ml的聚二甲基二烯丙基氯化銨(PDADMAC)溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的一個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) !-CaCO3 ;之后向(PSS/PDADMAC) rCaC03中加入2mg/ml的PSS溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到PSS包裹的(PSS/PDADMAC)!-CaCO3 ;之后向 PSS 包裹的(PSS/PDADMAC) ^CaCO3 中加入 2mg/ml 的 PDADMAC 溶液 15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到包裹有PSS和PDADMAC的兩個(gè)有機(jī)雙層的碳酸鈣微粒，簡(jiǎn)稱(chēng)(PSS/PDADMAC) 2-CaC03 ;③將上述制備的全部(PSS/PDADMAC) 2_CaC03分散于硅前驅(qū)體溶液15ml，振蕩15min，離心，去上清液，水洗，得到雜化微球；@再向上述全部雜化微球中加入2mg/ml的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液15ml，持續(xù)攪拌4_8h，離心，去上清液，然后用pH=8.5的Tris-HCl緩沖液洗至上清液無(wú)色，離心，去上清液，得到復(fù)合微球；⑤之后向上述全部復(fù)合微球中加入pH=8.5的Tris-HCl緩沖液20ml和4000U過(guò)氧化氫酶(CAT)，在磁力攪拌器下持續(xù)攪拌6-12h，離心，去上清液，用2mmol/L的稀鹽酸去除模板，之后水洗，得到固定化多酶； 2)固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖:將上述制備的固定化多酶全部放于3ml、pH=2-7的200mg/ml的低聚異麥芽糖產(chǎn)品溶液中，保持30_50°C反應(yīng)12_24h，加入SO-1lOmg氫氧化鈣，生成葡萄糖酸鈣，離心過(guò)濾純化；最后得到去除葡萄糖的低聚異麥芽糖溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的工藝方法，其特征為所述的PH=8.5的Tris-HCl緩沖液配制方法如下:稱(chēng)取Tris固體1.2g，用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到1.2g/L的Tris溶液；母液2:稱(chēng)取濃鹽酸Ig (質(zhì)量分?jǐn)?shù)為37%)，用1000ml的容量瓶加蒸餾水定容即得到0.37g/L的HCl溶液，之后按體積比母液1:母液2=20:3將二者混合，并用pH計(jì)校正后得到。
3.如權(quán)利要求1所述的固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的工藝方法，其特征為所述的硅前驅(qū)體溶液的制備如下:在室溫下將TMOS (正硅酸甲酯)加入到0.37g/L的HCL溶液中，TMOS完全溶解、澄清后再加入pH=7磷酸鹽緩沖液，混勻；其物料配比為體積比:TM0S:HCL溶液:磷酸緩沖液=1:19:200。
4.如權(quán)利要求1所述的固定化多酶去除低聚異麥芽糖產(chǎn)品中的葡萄糖的工藝方法，其特征為所述的2mg/mL的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液的制備方法如下:稱(chēng)取去甲腎上腺素固體200mg，用100ml的容量瓶加上述pH=8.5的Tris-HCl緩沖液定容即得到2mg/mL的去甲腎上腺素鹽酸鹽溶液。
【文檔編號(hào)】C07H1/06GK103524569SQ201310502588
【公開(kāi)日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月23日
【發(fā)明者】姜艷軍, 辛茜, 高靜 申請(qǐng)人:河北工業(yè)大學(xué)