Ag22多肽的完全抗原及其制備方法和抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種AG22多肽的完全抗原，所述AG22多肽的完全抗原由AG22多肽和交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成；其中，所述AG22多肽的序列為SEQ?ID?No.1所示的序列。這種AG22多肽的完全抗原具有較強的免疫原性，可以作為完全抗原投入使用。本發(fā)明還公開了一種上述AG22多肽的完全抗原的制備方法，以及與該AG22多肽的完全抗原特異性結(jié)合的AG22多肽的完全抗原的抗體。這種AG22多肽的完全抗原的抗體可以用于血清或組織中小鼠骨鈣素蛋白質(zhì)的檢測。
【專利說明】AG22多肽的完全抗原及其制備方法和抗體
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種AG22多肽的完全抗原及其制備方法和抗體。
【背景技術(shù)】
[0002]骨鈣素蛋白質(zhì)是由成骨細(xì)胞分泌的，其含量隨著年齡的變化而變化，通過血清骨鈣素的含量可以了解成骨細(xì)胞的狀態(tài)，對于骨質(zhì)疏松的判定等具有重要的意義。
[0003]AG22多肽是小鼠骨鈣素蛋白質(zhì)分子中的一段保守序列，經(jīng)過序列分析此段多肽具有抗原性的多肽。然而，AG22多肽自身的免疫原性較低，無法作為完全抗原投入使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]基于此，有必要提供一種AG22多肽的完全抗原。
[0005]此外，還有必要提供該AG22多肽的完全抗原的制備方法，以及與該AG22多肽的完全抗原特異性結(jié)合的抗體。
[0006]一種AG22多肽的完全抗原，所述AG22多肽的完全抗原由AG22多肽和交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成；
[0007]其中，所述AG22多肽的序列為SEQ ID No. I所示的序列，所述AG22多肽通過半胱氨酸與所述交聯(lián)劑活化的匙孔 血藍(lán)蛋白偶聯(lián)。
[0008]在一個實施例中，所述AG22多肽與所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白的摩爾比為800 ~1000 :1。
[0009]在一個實施例中，所述交聯(lián)劑為馬來酰亞胺。
[0010]一種AG22多肽的完全抗原的制備方法，包括如下步驟：
[0011]提供交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白，并用磷酸鈉緩沖液對所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白進行重構(gòu)，得到重構(gòu)后的交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液；
[0012]提供AG22多肽，并將所述AG22多肽用偶聯(lián)緩沖液或雙蒸水溶解，得到AG22多肽溶液；
[0013]將所述重構(gòu)后的交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液和所述AG22多肽溶液混勻后充分反應(yīng)，分離純化后得到由所述AG22多肽和所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成AG22多肽的完全抗原，其中，所述AG22多肽的序列為SEQ ID No. I所示的序列，所述AG22多肽通過半胱氨酸與所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)。
[0014]在一個實施例中，所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液的濃度為5mg/mL ；
[0015]所述AG22多肽溶液的濃度為8mg/mL。
[0016]在一個實施例中，將所述重構(gòu)后的交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液和所述AG22多肽溶液混勻的操作中，所述AG22多肽與所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白的摩爾比為800 ~1000 :1。
[0017]在一個實施例中，所述交聯(lián)劑為馬來酰亞胺。[0018]在一個實施例中，分離純化后得到由所述AG22多肽和所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成AG22多肽的完全抗原的操作為：
[0019]用30mL含有質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.01%的疊氮鈉PBS緩沖液平衡S印hadex G-25M凝膠柱，接著向所述Sephadex G-25M凝膠柱加入反應(yīng)液,用總體積IOmL的所述PBS緩沖液洗滌，收集洗出液，每次收集O. 5mL~1.0mL，在280nm下測量吸光度值，根據(jù)吸光度值收集含蛋白洗脫液。
[0020]一種AG22多肽的完全抗原的抗體，所述AG22多肽的完全抗原的抗體與上述的AG22多肽的完全抗原特異性結(jié)合。
[0021]一種AG22多肽的完全抗原的抗體，所述AG22多肽的完全抗原的抗體為上述的AG22多肽的完全抗原作為抗原被免疫系統(tǒng)識別后表達(dá)得到的抗體，所述AG22多肽的完全抗原的抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。
[0022]在一個實施例中，所述AG22多肽的完全抗原的抗體為兔源的多克隆抗體。
[0023]這種AG22多肽的完全抗原具有較強的免疫原性，可以作為完全抗原投入使用。這種AG22多肽的完全抗原的抗體可以用于血清或組織中小鼠骨鈣素蛋白質(zhì)的檢測。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖I為一實施方式的AG22多肽的完全抗原的制備方法的流程圖；
[0025]圖2為交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0026]圖3為半胱氨酸鹽 酸鹽一水物的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0027]圖4為5，5’ - 二硫雙（2-硝基苯甲酸）的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0028]圖5為ELISA法測定AG22多肽的完全抗原的多克隆抗體的效價得到的結(jié)果圖。
【具體實施方式】
[0029]為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】做詳細(xì)的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施的限制。
[0030]一實施方式的AG22多肽的完全抗原，該AG22多肽的完全抗原由AG22多肽和交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成。
[0031 ] AG22多肽是小鼠骨鈣素蛋白質(zhì)分子中的一段保守序列，經(jīng)過序列分析此段多肽具有抗原性的多肽。
[0032]AG22多肽的序列為SEQ ID No. I所示的序列，AG22多肽通過半胱氨酸與交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)。
[0033]匙孔血藍(lán)蛋白（KLH)分子表面有大量的活性基團，最常用于偶聯(lián)的是伯胺基團。小的多肽通常也帶有不同基團可以用于偶聯(lián)，常用的有伯胺基團，羧基和巰基。
[0034]多肽與KLH的偶聯(lián)就是利用這些基團，再通過交聯(lián)劑（crosslinker)，將多肽上的巰基/羧基/伯胺與KLH上的伯胺相連，從而形成共價偶聯(lián)，制備成完全抗原，用于免疫動物獲得抗體。
[0035]所以偶聯(lián)的伯胺應(yīng)該是來自于賴氨酸側(cè)鏈和N端，而偶聯(lián)的羧基則來自于天冬氨酸，谷氨酸和C端，巰基則來自于半胱氨酸。
[0036]至于偶聯(lián)上去的數(shù)量，和加入的肽段，交聯(lián)劑，KLH的摩爾比例有關(guān)。通常一分子KLH上可能會偶聯(lián)上百個肽段。
[0037]本實施方式中，AG22多肽與匙孔血藍(lán)蛋白的摩爾比為800~1000 :1。
[0038]本實施方式中，交聯(lián)劑為馬來酰亞胺。
[0039]如圖I所示的上述的AG22多肽的完全抗原的制備方法，包括如下步驟：
[0040]S10、提供交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白，并用磷酸鈉緩沖液對交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白進行重構(gòu)，得到重構(gòu)后的交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液。
[0041]交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白的結(jié)構(gòu)示意如圖2所示。
[0042]本實施方式中采用的磷酸鈉緩沖液pH為6. 6，ImL磷酸鈉緩沖液中含有20mM磷酸鈉、230mM NaCl、2mM EDTA 和 80mM 蔗糖。
[0043]本實施方式中，交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液的濃度為5mg/mL。
[0044]本實施方式中，交聯(lián)劑為馬來酰亞胺。
[0045]S20、提供AG22多肽，并將AG22多肽用偶聯(lián)緩沖液或雙蒸水溶解，得到AG22多肽溶液。
[0046]本實施方式中，AG22多肽溶液的濃度為8mg/mL。
[0047]本實施方式中，偶聯(lián)緩沖液可以為含有IOOmM的EDTA、80mM的蔗糖和230mM的NaCl的20mM的pH為6. 6的磷酸鈉緩沖液。
[0048]S30、將SlO得到的重構(gòu)后的交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液和S20得帶的AG22多肽溶液混勻后充分反應(yīng)，分離純化后得到由AG22多肽和交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成AG22多肽的完全抗原。
[0049]其中，所述AG22多肽的序列為SEQ ID No. I所示的序列，AG22多肽通過半胱氨酸與匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)。
[0050]將重構(gòu)后的交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液和AG22多肽溶液混勻的操作中，AG22多肽與交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白的摩爾比為800~1000 :1。
[0051]分離純化后得到由AG22多肽和交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成AG22多肽的完全抗原的操作為：
[0052]用30mL含有質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.01%的疊氮鈉PBS緩沖液平衡S印hadex G-25M凝膠柱，接著向所述Sephadex G-25M凝膠柱加入反應(yīng)液,用總體積IOmL的所述PBS緩沖液洗滌，收集洗出液，每次收集O. 5mL~1.0mL，在280nm下測量吸光度值，根據(jù)吸光度值收集含蛋白洗脫液。[0053]這種AG22多肽的完全抗原具有較強的免疫原性，可以作為完全抗原投入使用。
[0054]一實施方式的AG22多肽的完全抗原的抗體，該AG22多肽的完全抗原的抗體與上述的AG22多肽的完全抗原特異性結(jié)合。
[0055]一實施方式的AG22多肽的完全抗原的抗體，該AG22多肽的完全抗原的抗體為上述的AG22多肽的完全抗原作為抗原被免疫系統(tǒng)識別后表達(dá)得到的抗體。該AG22多肽的完全抗原的抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。
[0056]具體而言，該AG22多肽的完全抗原的抗體為兔源的多克隆抗體。
[0057]這種AG22多肽的完全抗原的抗體可以用于血清或組織中小鼠骨鈣素蛋白質(zhì)的檢測。
[0058]下通過具體實施例，對上述AG22多肽的完全抗原，AG22多肽的完全抗原的制備方法，以及與該AG22多肽的完全抗原特異性結(jié)合的抗體，進行進一步的解釋和實驗證明。
[0059]如無特殊說明，實施例中采用的方法均為常規(guī)方法，實施案例中所用試劑材料均為常規(guī)生化試劑。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。
[0060]實施例中所用的磷酸鹽緩沖液均為pH7. 4,0.01M的PBS緩沖液。實施例中所用的碳酸鹽緩沖液均為PH9. 6、0.05M的碳酸鈉緩沖液。
[0061]實施例中使用到的藥品和材料包括：牛血清白蛋白簡稱BSA ;匙孔血監(jiān)蛋白簡稱為KLH ;半胱氨酸鹽酸鹽一水物，分子量175. 6344，結(jié)構(gòu)式如圖3所示；5，5’ - 二硫雙（2-硝基苯甲酸）簡稱DTNB，分子量396. 35，結(jié)構(gòu)式如圖4所示；新西蘭大白兔（4月齡購于廣東省實驗動物中心)。
[0062]實施例I
[0063]AG22多肽的完全抗原的制備。
[0064]I.打開一管馬來酰亞胺活化的KLH加入lmL20mM磷酸鈉緩沖液（230mM NaCl，2mMEDTA, 80mM蔗糖，pH6. 6)，將馬來酰亞胺活化的KLH進行重構(gòu)，制備成5mg/mL的溶液，盡快使用；
[0065]2.用IOmL雙蒸水將偶聯(lián)緩沖液進行重構(gòu)，制備磷酸鈉緩沖液（IOOmM EDTA, 80mM鹿糖，pH6. 6)；
[0066]3.將4mg含有半胱氨酸 的AG22多肽溶解在O. 5mL偶聯(lián)緩沖液或者雙蒸水中，同時留取50 μ L多肽溶液用于確定偶聯(lián)效率(總cys)，保存至2-8°C ；
[0067]4.立即將AG22多肽溶液與馬來酰亞胺活化的KLH在反應(yīng)管內(nèi)混合，攪拌；
[0068]5.攪拌反應(yīng)持續(xù)室溫2小時或者2_8°C過夜；
[0069]6.保留100 μ L偶聯(lián)反應(yīng)液用于確定偶聯(lián)效率(游離cys)。
[0070]實施例2
[0071]AG22多肽的完全抗原的分離純化。
[0072]I.將一包PBS溶解在IL雙蒸水中，加入0.01%疊氮鈉，長期保存；
[0073]2.將S印hadex G-25M凝膠柱固定在適宜的燒杯上；
[0074]3.取下凝膠柱的蓋子，剪開凝膠柱的底端，讓過量的液體流出，禁止柱內(nèi)液體流干;
[0075]4.用30mL PBS平衡凝膠柱，如果不立即使用凝膠柱請蓋好上下的蓋子后，保存至2-8 0C ；
[0076]5.向凝膠柱加入反應(yīng)后的液體，收集下端流出液體；
[0077]6.用總體積IOmL PBS洗滌，收集洗出液，每一次收集O. 5mL_l. OmL,在280nm下測
量吸光度值；
[0078]7.收集含蛋白洗脫液，_20°C凍存。
[0079]實施例3
[0080]C半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。
[0081]I.將一管DTNB緩沖液溶解于IOmL雙蒸水中；
[0082]2.將5mgDTNB試劑溶解在5mLDTNB緩沖液中；[0083]3.將32mg L-半胱氨酸鹽酸鹽一水物溶解于ImL雙蒸水中，梯度稀釋范圍O.4-0. 04mg/mL;
[0084]4.在測試管中加入預(yù)稀釋的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)液50 μ L，空白管加入50 μ L雙蒸水；
[0085]5.所有管內(nèi)加入O. ImL雙蒸水，O. 75mL pH8. ODTNB緩沖液，立即加入O. ImLDTNB試劑溶液，使總體積為ImL,混勻；
[0086]6.在412nm處測定吸光度值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，重復(fù)三次。
[0087]實施例4
[0088]AG22多肽的完全抗原的測定。
[0089]I.將50 μ L的AG22多肽溶液(總cys)加入O. ImL雙蒸水中；
[0090]2.將下列50 μ L溶液加入測試管中：DTNB緩沖液(空白）、稀釋的多肽樣品（總cys，KLH結(jié)合)、多肽-KLH (游離cys，KLH結(jié)合)、稀釋的多肽樣品（總cys，BSA結(jié)合)、多肽-BSA(?子尚cys, BSA結(jié)合）；
[0091 ] 3.向所有試管內(nèi)加入O. ImL雙蒸水，O. 75mLpH8. O的DTNB緩沖液，立即加入
O.ImLDTNB試劑溶液，終體積為lmL，混勻；
[0092]4.在412nm處測量吸光度值，如果吸光度值大于I. 4，稀釋樣品重復(fù)測試；
[0093]5.計算公式
[0094]% f禹合效率=(總 cys-游離 cys) / 總 cys*100。
[0095]計算得到AG22多肽的完全抗原的偶聯(lián)效價為62%。
[0096]實施例5
[0097]動物免疫以及AG22多肽的完全抗原的多克隆抗體的效價的測定。
[0098]將實施例2中分離純化得到的AG22多肽的完全抗原由新西蘭大白兔的免疫，共免疫四次，首次免疫600 μ g/只，用完全弗氏佐劑進行乳化，皮下多點注射，之后用300 μ g/只用弗式不完全佐劑進行乳化，每隔兩周進行一次免疫，最后一次免疫后采血進行AG22多肽的完全抗原的多克隆抗體效價的測定。
[0099]抗體效價測定——ELISA法
[0100]I.抗原包被：將AG22多肽的完全抗原稀釋至濃度2 μ g/mL,加入96孔板，每孔100yL，4°C濕盒內(nèi)包被過夜；
[0101]2.洗滌：用含有0.05%吐溫-20的PBS緩沖液洗滌包被的酶標(biāo)板，200 μ L/孔，洗漆3次,5min/次；
[0102]3.封閉：用1%BSA溶液對96孔板進行封閉，250 μ L/孔，37 °C濕盒內(nèi)封閉2h;
[0103]4.洗滌：同上洗滌方法；
[0104]5. —抗孵育：將兔血清多克隆抗體按照1:1000、1:2000、1:4000，1:8000，1:16000，1:32000、1:64000用PBS緩沖液進行稀釋，同時設(shè)置空白對照和陰性血清對照，100 μ L/孔，37°C濕盒內(nèi)孵育Ih ；
[0105]6.洗滌：同上洗滌方法；
[0106]7. 二抗孵育：將HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體用PBS緩沖液按照1:5000稀釋，100 μ L/孔，37°C濕盒內(nèi)孵育Ih;
[0107]8.洗滌：同上洗滌方法；
[0108]9.加底物：將TMB按照100 μ L/孔加入96孔板，37°C濕盒內(nèi)避光反應(yīng)20min;[0109]10.終止反應(yīng)：用2M H2SO4按照50 μ L/孔加入96孔板終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450nm波長時測定吸光度值，氣質(zhì)OD _/(?_> 2. I為血清效價判定標(biāo)準(zhǔn)。
[0110]測量結(jié)果如圖5所示，由圖中可以看出，本實施制備得到的AG22多肽的完全抗原的多克隆抗體的效價為I :32000。
[0111]以上所述實施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專 利 的保護范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種AG22多肽的完全抗原，其特征在于，所述AG22多肽的完全抗原由AG22多肽和交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成； 其中，所述AG22多肽的序列為SEQ ID No. I所示的序列，所述AG22多肽通過半胱氨酸與所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的AG22多肽的完全抗原，其特征在于，所述AG22多肽與所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白的摩爾比為800~1000 :1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的AG22多肽的完全抗原，其特征在于，所述交聯(lián)劑為馬來酰亞胺。
4.一種AG22多肽的完全抗原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： 提供交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白，并用磷酸鈉緩沖液對所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白進行重構(gòu)，得到重構(gòu)后的交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液； 提供AG22多肽，并將所述AG22多肽用偶聯(lián)緩沖液或雙蒸水溶解，得到AG22多肽溶液； 將所述重構(gòu)后的交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液和所述AG22多肽溶液混勻后充分反應(yīng)，分離純化后得到由所述AG22多肽和所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成AG22多肽的完全抗原，其中，所述AG22多肽的序列為SEQ ID No. I所示的序列，所述AG22多肽通過半胱氨酸與所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的AG22多肽的完全抗原的制備方法，其特征在于，所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液的濃度為5mg/mL ； 所述AG22多肽溶液的濃度為8mg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的AG22多肽的完全抗原的制備方法，其特征在于，將所述重構(gòu)后的交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白溶液和所述AG22多肽溶液混勻的操作中，所述AG22多肽與所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白的摩爾比為800~1000 :1。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的AG22多肽的完全抗原的制備方法，其特征在于，所述交聯(lián)劑為馬來酰亞胺。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的AG22多肽的完全抗原的制備方法，其特征在于，分離純化后得到由所述AG22多肽和所述交聯(lián)劑活化的匙孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)形成AG22多肽的完全抗原的操作為： 用30mL含有質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.01%的疊氮鈉PBS緩沖液平衡S印hadex G-25M凝膠柱，接著向所述Sephadex G-25M凝膠柱加入反應(yīng)液,用總體積IOmL的所述PBS緩沖液洗漆,收集洗出液，每次收集O. 5mL~1.0mL,在280nm下測量吸光度值，根據(jù)吸光度值收集含蛋白洗脫液。
9.一種AG22多肽的完全抗原的抗體，其特征在于，所述AG22多肽的完全抗原的抗體與如權(quán)利要求1~3中任一項所述的AG22多肽的完全抗原特異性結(jié)合。
10.一種AG22多肽的完全抗原的抗體，其特征在于，所述AG22多肽的完全抗原的抗體為如權(quán)利要求1~3中任一項所述的AG22多肽的完全抗原作為抗原被免疫系統(tǒng)識別后表達(dá)得到的抗體，所述AG22多肽的完全抗原的抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的AG22多肽的完全抗原的抗體，其特征在于，所述AG22多肽的完全抗原的抗體為兔源的多克隆抗體。
【文檔編號】C07K19/00GK103524629SQ201310514525
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月25日
【發(fā)明者】任培根, 郭成志, 李健, 郭小勇 申請人:中國科學(xué)院深圳先進技術(shù)研究院