一種對蛋白質(zhì)進行分離富集親的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種對蛋白質(zhì)進行分離富集親的方法，其特征在于，首先讓樣品經(jīng)過首次凝集素親和層析，然后進行酶解，再把樣品進行第二次凝集素親和層析，最后再利用HPLC分離，進入質(zhì)譜進行測序。使用的凝集素有伴刀豆凝集素A、麥芽凝集素、菜豆凝集素等；處理后的樣品用毛細(xì)管液相色譜-ESI-MASS或毛細(xì)管液相色譜-MADLI-TOF-MASS對糖肽進行分析和數(shù)據(jù)庫檢索。本發(fā)明的有益效果是，可以一次收集不同類別的糖類，標(biāo)記后的多肽可以通過親合的方法富集，而且通過采用同位素標(biāo)記的試劑有望實現(xiàn)定量和比較分析。
【專利說明】一種對蛋白質(zhì)進行分離富集親的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生化的實驗方法，具體來說，一種對蛋白質(zhì)進行分離富集親的方法。【背景技術(shù)】
[0002]當(dāng)前，采用基因工程方式生產(chǎn)的蛋白質(zhì)類藥物由于其在治療腫瘤和免疫疾病方面的廣泛應(yīng)用，越來越受到研究者們的關(guān)注。對于蛋白質(zhì)類藥物本身而言，其重要功能的實現(xiàn)不僅取決于其蛋白質(zhì)的序列和空間結(jié)構(gòu)，也在于蛋白翻譯后修飾等因素，其中糖基化修飾就是翻譯后修飾中最主要的修飾方式之一。對蛋白質(zhì)糖基化的檢測分析也是衡量蛋白質(zhì)類藥物的一項重要指標(biāo)。蛋白質(zhì)的糖基化分析主要包括以下幾個方面:糖基化是否發(fā)生；在哪里發(fā)生了糖基化；糖基化的類型是什么；糖鏈中各種糖的種類和含量；糖鏈的一級結(jié)構(gòu)等等。至今，仍無一種可以完全解決以上所有問題的好方法。在糖鏈結(jié)構(gòu)解析方面應(yīng)用最廣泛的是質(zhì)譜技術(shù)和核磁共振技術(shù)，各種技術(shù)各有利弊，因此在應(yīng)用中經(jīng)常可以互補。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案:
一種對蛋白質(zhì)進行分離富集親的方法，首先讓樣品經(jīng)過首次凝集素親和層析，然后進行酶解，再把樣品進行第二次凝集素親和層析，最后再利用HPLC分離，進入質(zhì)譜進行測序。
[0004]本發(fā)明中，使用的凝集素有伴刀豆凝集素A、麥芽凝集素、菜豆凝集素等。
[0005]本發(fā)明中，處理后的樣品用毛細(xì)管液相色譜-ES1-MASS或毛細(xì)管液相色譜-MADL1-T0F-MASS對糖肽進行分析和數(shù)據(jù)庫檢索。
[0006]本發(fā)明的有益效果是，可以一次收集不同類別的糖類，標(biāo)記后的多肽可以通過親合的方法富集，而且通過采用同位素標(biāo)記的試劑有望實現(xiàn)定量和比
較分析。
【具體實施方式】
[0007]首先讓樣品經(jīng)過首次凝集素親和層析，然后進行酶解，再把樣品進行第二次凝集素親和層析，最后再利用HPLC分離，進入質(zhì)譜進行測序。使用的凝集素有伴刀豆凝集素A、麥芽凝集素、菜豆凝集素等；處理后的樣品用毛細(xì)管液相色譜-ES1-MASS或毛細(xì)管液相色譜-MADL1-T0F-MASS對糖肽進行分析和數(shù)據(jù)庫檢索。
[0008]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種對蛋白質(zhì)進行分離富集親的方法，其特征在于，首先讓樣品經(jīng)過首次凝集素親和層析，然后進行酶解，再把樣品進行第二次凝集素親和層析，最后再利用HPLC分離，進入質(zhì)譜進行測序。
2.如權(quán)利要求1所述的一種對蛋白質(zhì)進行分離富集親的方法，其特征在于，使用的凝集素有伴刀豆凝集素A、麥芽凝集素、菜豆凝集素等。
3.如權(quán)利要求1所述的一種對蛋白質(zhì)進行分離富集親的方法，其特征在于，處理后的樣品用毛細(xì)管液相色譜-ES1-MASS或毛細(xì)管液相色譜-MADL1-TOF-MASS對糖肽進行分析和數(shù) 據(jù)庫檢索。
【文檔編號】C07K1/22GK103614439SQ201310531075
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月1日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月1日
【發(fā)明者】劉軍 申請人:劉軍