一種促皮質(zhì)素的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種以哺乳動(dòng)物腦垂體前葉為原料，提取促皮質(zhì)素的制備方法。將哺乳動(dòng)物腦垂體前葉經(jīng)干燥、研磨成粉后，添加有機(jī)溶劑、無機(jī)酸提取，過濾去雜蛋白等步驟，得到促皮質(zhì)素。該技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)單，成本低，產(chǎn)品的效價(jià)達(dá)到2單位/mg。
【專利說明】一種促皮質(zhì)素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說涉及一種制備促皮質(zhì)素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]促皮質(zhì)素是從豬、牛、羊等動(dòng)物的腦垂體前葉中提取出來的一種多肽類藥物，呈白色或淡黃色粉末，無臭，有吸濕性，易溶于水，在干燥和酸性溶液中較穩(wěn)定，100°c加熱活力不減，在堿性溶液中容易失活。
[0003]促皮質(zhì)素是維持腎上腺正常形態(tài)和功能的重要激素。促皮質(zhì)素能刺激腎上腺皮質(zhì)合成和分泌氫化可的松、皮質(zhì)酮等，故臨床用途與皮質(zhì)激素基本相同。在極少數(shù)情況下用皮質(zhì)激素療效不佳時(shí)，改用促皮質(zhì)素后有較好療效。
[0004]除此之外，促皮質(zhì)素還有興奮腎上腺皮質(zhì)功能。長(zhǎng)期應(yīng)用皮質(zhì)激素在停藥前或腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)實(shí)施腎上腺術(shù)后，可短期應(yīng)用促皮質(zhì)素，以興奮腎上腺皮質(zhì)的功能。促皮質(zhì)素試驗(yàn)，原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能減退者，對(duì)本品無反應(yīng)。繼發(fā)性腎上腺皮質(zhì)功能減退者，在滴注促皮質(zhì)素3~5日后，類固醇的排出量逐漸增加，呈延遲反應(yīng)。此試驗(yàn)還有助于區(qū)分腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)者的病理性質(zhì)。如為雙側(cè)皮質(zhì)增生，反應(yīng)常高于正常；如為皮質(zhì)腺瘤，反應(yīng)正常或稍高；如為皮質(zhì)腺癌則無明顯反應(yīng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供了一種促皮質(zhì)素的制備方法。其技術(shù)方案是:將哺乳動(dòng)物腦垂體經(jīng)脫水干燥、取垂體前葉研磨成粉后，經(jīng)有機(jī)溶劑、無機(jī)酸兩次提取，過濾去雜蛋白等步驟得促皮質(zhì)素，包括如下步驟:
[0006](I)原料處理:將豬腦垂體取出后，立即投入丙酮中，浸泡脫水3-5次，每次約24小時(shí)，至腦垂體變硬為止，分離前葉，真空干燥，磨粉，得前葉干粉；
[0007](2) 一次提取:取前葉干粉，按1:5-1:10的比例加入丙酮，再按1:2_1:5的比例，加入0.5mol/L-5mol/L鹽酸溶液，攪拌溶解，加熱至40°C -60°C，保溫20-40分鐘，然后冷卻至10-25°C，離心20-40分鐘，過濾，取上清液，上清液預(yù)冷至1_5°C ；
[0008](3) 二次提取:將一次提取中的渣子再加入步驟(2) —半量的丙酮0.05mol/L~
0.5mol/L鹽酸溶液，攪拌溶解，加熱至40°C~60°C，保溫20~40分鐘，然后冷卻至10~250C，離心20~40分鐘，去渣過濾，取上清液；
[0009](4)沉淀:合并兩次上清液，將上清液冷卻至I~5°C，過濾至澄清；加入5~10倍量體積的丙酮，沉淀10~30分鐘后，去上清液，立即用丙酮洗滌去除沉淀物上的上清液，沉淀物用無水丙酮脫水洗滌2~5次；
[0010](5)干燥:真空干燥，即得促皮質(zhì)素成品。
[0011]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果:
[0012]本制備方法的的優(yōu)勢(shì)之處在于，工藝簡(jiǎn)單，成本低，過程溫和，制得的促皮質(zhì)素的效價(jià)達(dá)到2單位/mg【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0014]實(shí)施例1
[0015]所述的利用將哺乳動(dòng)物腦垂體經(jīng)脫水干燥、研磨成粉后，經(jīng)有機(jī)溶劑、無機(jī)酸兩次提取，去雜蛋白過濾等步驟得促皮質(zhì)素，包括如下步驟:
[0016](I)原料處理:將豬腦垂體取出后，立即投入丙酮中，浸泡脫水3次，每次約24小時(shí)，至腦垂體變硬為止，分離前葉，分別干燥，磨粉，得前葉干粉；
[0017](2) 一次提取:取3.2kg前葉干粉，加入22.4L丙酮，在攪拌下加入IOL的lmol/L鹽酸溶液，攪拌溶解后，加熱至50°C，保溫28分鐘，然后冷卻至18°C，離心30分鐘，過濾，取上清液，上清液預(yù)冷至3 °C ；
[0018](3) 二次提取:將一次提取中的渣子加入11.2L丙酮，攪拌下加入5L的0.lmol/L鹽酸溶液，攪拌溶解后，加熱至50°C，保溫30分鐘，然后冷卻至20°C，離心25分鐘，過濾，取上清液；
[0019](4)沉淀:合并兩次上清液，將上清液冷卻至:TC，過濾至澄清；加入336L丙酮，沉淀15分鐘后，吸出上清液，立即用丙酮洗滌去除沉淀物上的上清液，沉淀物用無水丙酮脫水洗滌3次；
[0020](5)干燥:真空干燥，天平稱重即得促皮質(zhì)素成品230g。
[0021]實(shí)施例2[0022](I)原料處理:將豬腦垂體取出后，立即投入丙酮中，浸泡脫水4次，每次約24小時(shí)，至腦垂體變硬為止，分離前葉，分別干燥，磨粉，得前葉干粉；
[0023](2) 一次提取:取3.6kg前葉干粉，加入21.6L丙酮，在攪拌下加入8L的lmol/L鹽酸溶液，攪拌溶解后，加熱至40°C，保溫35分鐘，然后冷卻至25°C，離心20分鐘，過濾，取上清液，上清液預(yù)冷至2 °C ；
[0024](3) 二次提取:將一次提取中的渣子加入10.8L丙酮，攪拌下加入4L的0.lmol/L鹽酸溶液，攪拌溶解后，加熱至40°C，保溫35分鐘，然后冷卻至20°C，離心20分鐘，過濾，取上清液；
[0025](4)沉淀:合并兩次上清液，將上清液冷卻至2 V，過濾至澄清；加入200L丙酮，沉淀20分鐘后，吸出上清液，立即用丙酮洗滌去除沉淀物上的上清液，沉淀物用無水丙酮脫水洗滌5次；
[0026](5)干燥:真空干燥，天平稱重即得促皮質(zhì)素成品248g。
[0027]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種促皮質(zhì)素的制備方法，其特征在于:將哺乳動(dòng)物腦垂體前葉經(jīng)脫水干燥、研磨成粉后，經(jīng)有機(jī)溶劑、無機(jī)酸兩次提取，過濾去雜蛋白等步驟，得促皮質(zhì)素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備促皮質(zhì)素的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟: (1)原料處理:將哺乳動(dòng)物的腦垂體取出后，用丙酮浸泡脫水，至垂體變硬，分離出前葉；真空干燥，磨粉； (2)一次提取:取前葉干粉，加入有機(jī)溶劑、無機(jī)酸，攪拌溶解，然后加熱、保溫、冷卻，離心過濾取上清液，； (3)二次提取:將一次提取中的渣子再次加入步驟(2) —半量的有機(jī)溶劑和無機(jī)酸，攪拌溶解，然后加熱、保溫、冷卻，離心過濾取上清液，預(yù)冷； (4)沉淀:合并兩次上清液，冷卻，過濾，加入有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀，沉淀完成后，去上清液，沉淀物用無水丙酮脫水洗滌； (5)干燥:真空干燥，得促皮質(zhì)素成品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟(1)中，所述的哺乳動(dòng)物為豬、狗、牛、羊、馬中的一種，優(yōu)選為豬、牛、羊。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，有機(jī)溶劑為丙酮，前葉干粉與有機(jī)溶劑的重量比為1:5至1:10 ;無機(jī)酸為0.5mol/L~5mol/L鹽酸溶液，前葉干粉與無機(jī)酸的重量比為1:2至1:5。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，有機(jī)溶劑為丙酮，前葉干粉與有機(jī)溶劑的重量比為1:6至1:8 ;無機(jī)酸為2mol/L~3mol/L鹽酸溶液,前葉干粉與無機(jī)酸的重量比為1:3至1:4。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟(2)、步驟(3)中，加熱至40°C~60°C，保溫20~40分鐘，然后冷卻至10°C 2~25°C，離心過濾上清液預(yù)冷至I~5°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于:步驟(2)、步驟(3)中，加熱至50°C~55°C，保溫30分鐘，然后冷卻至15°C~20°C，離心過濾上清液預(yù)冷至I~2°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟⑷上清液冷卻至I~5°C;用有機(jī)溶劑丙酮沉淀，上清液與丙酮的體積比例為1:5至1:10，沉淀10~30分鐘。
9.一種由權(quán)利要求1-8任意之一所述的方法制備得到的促皮質(zhì)素。
【文檔編號(hào)】C07K14/695GK103694341SQ201310613227
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年11月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月23日
【發(fā)明者】劉乃山, 葛翠鳳, 劉翠珍, 張曉涵 申請(qǐng)人:青島康原藥業(yè)有限公司