人參皂苷m1的叔丁基二甲基醚液相制備方法
【專利摘要】人參皂苷M1與叔丁基二甲基氯硅烷反應(yīng)生成單醚的過(guò)程伴隨生成多種少量人參皂苷M1的多叔丁基二甲硅基的多醚副產(chǎn)物，從薄層色譜法上可以看出這些副產(chǎn)物的極性大小與人參皂苷M1的單叔丁基二甲基硅醚的極性很相似，增大了分離難度，本發(fā)明公開(kāi)了高效制備液相法制備分離人參皂苷M1的叔丁基二甲基醚的最佳分離條件，將優(yōu)化后的條件應(yīng)用于液相制備，從而達(dá)到快速準(zhǔn)確的分離目的。
【專利說(shuō)明】人參皂苷M1的叔丁基二甲基醚液相制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的液相制備方法屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。 【背景技術(shù)】
[0002]人參具有抗衰老、抗炎、抗過(guò)敏、降血糖、修復(fù)神經(jīng)損傷和保肝等作用。近年來(lái)的研究表明，人參皂苷具有抗腫瘤的作用，大部分都是以Rg3、Rh1, Rh2等為主要研究對(duì)象。他們?cè)诖龠M(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和腫瘤細(xì)胞分化等方面表現(xiàn)出顯著作用，不同結(jié)構(gòu)的人參皂苷在抗腫瘤活性方面存在差異，其中二醇型人參皂苷抗腫瘤活性明顯強(qiáng)于三醇型人參皂苷。
[0003]隨著皂苷藥代動(dòng)力學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)真正發(fā)揮抗腫瘤作用的是皂苷動(dòng)物體內(nèi)的次級(jí)代謝產(chǎn)物Compound K,人參阜苷Compound K屬于原人參二醇型阜苷。研究表明人參阜苷Compound K的酯化衍生物具有更好的抗腫瘤活性。EMl (Ml的硬脂酸酯、棕櫚酸酯和油酸酯的混合物)與Ml相比具有更強(qiáng)的抗腫瘤活性。但是EMl來(lái)源有限，難以分離純化。而利用化學(xué)合成技術(shù)獲得的系列Ml衍生物水溶性差。采用酯鍵、醚鍵等方式給Ml的修飾基引入水溶性較好的基團(tuán)，使其兼具脂溶性和水溶性，人參皂苷Ml的結(jié)構(gòu)式上有六個(gè)羥基，從而選擇性酯化和提高單酯化產(chǎn)率具有很重要的研究?jī)r(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明公開(kāi)了一種液相制備人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的方法。采用高效液相色譜法探索最佳分離條件，包括檢測(cè)波長(zhǎng)，流動(dòng)相比例，流速，確定樣品各組分出峰時(shí)間， 將優(yōu)化后的條件應(yīng)用于液相制備，從而達(dá)到快速準(zhǔn)確的分離目的。
[0005]本發(fā)明的積極效果在于探索出最佳的人參皂苷Ml的單叔丁基二甲基硅醚的液相制備條件，從而解決了人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的分離提純難題。產(chǎn)物損 失小且方法簡(jiǎn)捷可行。
[0006]具體方法
高效液相色譜法得到優(yōu)化后的制備條件色譜柱:C18色譜柱(10 X 250mm, 5Mm)
檢測(cè)波長(zhǎng):203 nm 流動(dòng)相比例:95%甲醇/水流速:1.0 mL/min 柱溫:25°C
制備型高效液相法人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的出峰時(shí)間為20.6 min.[0007]實(shí)驗(yàn)例I
儀器及試劑:Agilent 1260 LC型高效液相色譜儀；
LC3000型高效液相色譜儀；
甲醇(99.9%)，北京百靈威試劑有限公司；
哇哈哈純凈水；1、色譜柱的選擇
分別采用Agilent C18不同長(zhǎng)短的色譜柱進(jìn)行分離實(shí)驗(yàn),本實(shí)驗(yàn)選用10X250 mm, 5 u m 的C18色譜柱，可以達(dá)到較好的分離效果。
[0008]2、檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
人參皂苷Ml的單醚化衍生物采用液相進(jìn)行檢測(cè)時(shí)通過(guò)198-600 nm的紫外波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Compound K衍生物在203 nm下有最大吸收波長(zhǎng)。因而在實(shí)驗(yàn)操作中采用203 nm作為本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。
[0009]3、流動(dòng)相及其比例的組合
實(shí)驗(yàn)中根據(jù)人參皂苷Ml的單醚化衍生物的結(jié)構(gòu)特征，分別進(jìn)行了液相色譜流動(dòng)相比例選擇，以經(jīng)濟(jì)快速準(zhǔn)確為出發(fā)點(diǎn)，選擇的流動(dòng)相為甲醇/水體系，流動(dòng)相比例為95%的甲醇/水。
[0010]4、流速的選擇
在確定流動(dòng)相的比例后，本實(shí)驗(yàn)也對(duì)流動(dòng)相的流速也進(jìn)行了條件優(yōu)化，采用:v* =95: 5的流動(dòng)相，對(duì)各流速也進(jìn)行了條件優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在流速為I mL /min時(shí)，分離效果達(dá)到最佳。
[0011]5、柱溫的選擇
確定流動(dòng)相的配比和流速等條件后，實(shí)驗(yàn)對(duì)柱溫的選擇也進(jìn)行了條件優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)考查了不同溫度下的醚化產(chǎn)物分離度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在柱溫為室溫25°C時(shí)，分離效果好。
[0012]6、確定人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的出峰時(shí)間色譜柱:Agilent C18 色譜柱(4.6X250mm, 5Mm)
檢測(cè)波長(zhǎng):203 nm 流動(dòng)相比例:95%甲醇/水流速:1.0 mL/min 柱溫:25°C
進(jìn)樣量10 ML(樣品濃度為5mg/mL)
得到人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的出峰時(shí)間為19.8 min ；
峰面積為84%
液相色譜圖如圖1
7、人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的液相制備色譜柱:C18色譜柱(10 X 250mm, 5Mm)
檢測(cè)波長(zhǎng):203 nm 流動(dòng)相比例:95%甲醇/水流速:1.0 mL/min 柱溫:25°C
進(jìn)樣量:1.0 mL(5mg/mL)
收集20.6 min出峰的流動(dòng)相
8、高效液相色譜法確定制備后人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的純度色譜柱:Agilent C18 色譜柱(4.6X250mm, 5Mm)
檢測(cè)波長(zhǎng):203 nm流動(dòng)相比例:95%甲醇/水流速:1.0 mL/min 柱溫:25°C
進(jìn)樣量10 ML(樣品濃度為5mg/mL)
得到人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的出峰時(shí)間為19.9 min 峰面積為98%，說(shuō)明此制備方法制備的人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚樣品純度高。
[0013]液相色譜圖如圖2。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1確定人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚制備時(shí)間的高效液相色譜圖圖2制備所得人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的高效液相色譜圖
【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)施例1
儀器及試劑:Agilent 1260 LC型高效液相色譜儀；
LC3000型高效液相色譜儀；
甲醇(99.9%)，北京百靈威試劑有限公司；
哇哈哈純凈水；
制備條件:
色譜柱:C18色譜柱(10 X 25Omm, 5Mm)
檢測(cè)波長(zhǎng):203 nm 流動(dòng)相比例:95%甲醇/水流速:1.0 mL/min 柱溫:25°C
按照以上條件制備得到高純度人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚。
【權(quán)利要求】
1.液相制備人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的方法:采用高效液相色譜法探索最佳分離條件，包括色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)，流動(dòng)相比例，流速，柱溫，確定樣品各組分出峰時(shí)間，將優(yōu)化后的條件應(yīng)用于液相制備，從而達(dá)到快速準(zhǔn)確的分離目的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1:高效液相色譜法得到優(yōu)化后的制備條件色譜柱:C18色譜柱(10 X 250mm, 5Mm)檢測(cè)波長(zhǎng):203 nm 流動(dòng)相比例:95%甲醇/水流速:1.0 mL/min 柱溫:25°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1:高效液相色譜法得到人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚出峰時(shí)間為 19.8 分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1:制備型高效液相法得到人參皂苷Ml的叔丁基二甲基醚的出峰時(shí)間為20.6分。
【文檔編號(hào)】C07J17/00GK103601784SQ201310636173
【公開(kāi)日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月3日
【發(fā)明者】弓曉杰, 肖景楠, 陳麗榮 申請(qǐng)人:大連杰信生物科技有限公司