吉爾吉斯白樺的BkERF1基因及編碼蛋白的制作方法
【專利摘要】吉爾吉斯白樺的BkERF1基因及編碼蛋白，它涉及樺的BkERF1基因及編碼蛋白。吉爾吉斯白樺的BkERF1基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No：1所示，該基因編碼蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。本發(fā)明吉爾吉斯白樺BkERF1基因cDNA序列全長為1390bp，編碼328個氨基酸，本發(fā)明的BkERF1基因轉(zhuǎn)入擬南芥中，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因株系生長好于野生型(WT)株系，表現(xiàn)出過表達BkERF1基因的株系比野生型(WT)株系抗性生長的差別，說明白樺BkERF1基因能夠提高植物對堿性鹽(NaHCO3)脅迫的抗性，為抗堿性鹽植物分子育種準備了基因條件。
【專利說明】吉爾吉斯白樺的BkERFI基因及編碼蛋白
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及白樺的BkERFl基因及編碼蛋白。
【背景技術(shù)】
[0002]乙烯應答因子ERF是植物轉(zhuǎn)錄因子(AP2 / EREBP)家族中的一員，其ERF蛋白含有高度保守的AP2結(jié)構(gòu)域，ERF轉(zhuǎn)錄因子與細胞發(fā)育、激素、抗病、低溫、干旱、高鹽等信號傳遞有關(guān)，在調(diào)控植物生長發(fā)育和逆境脅迫中表現(xiàn)出一定的應答響應。是植物生長發(fā)育和脅迫應答反應的重要調(diào)控因子。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供吉爾吉斯白樺的BkERFl基因及編碼蛋白。
[0004]本發(fā)明中吉爾吉斯白樺的BkERFl基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
[0005]本發(fā)明中吉爾吉斯白樺的BkERFl基因編碼蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0006]本發(fā)明吉爾吉斯白樺BkERFl基因cDNA序列全長為1390bp，編碼328個氨基酸，本發(fā)明的BkERF l基因轉(zhuǎn)入擬南芥中，過表達該基因的株系和野生型(WT)萌發(fā)后在堿性鹽(NaHCO3)下脅迫生長試驗，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因株系生長好于野生型(WT)株系，表現(xiàn)出過表達BkERFl基因的株系比野生型(WT)株系抗性生長的差別，說明白樺BkERFl基因能夠提高植物對堿性鹽(NaHCO3)脅迫的抗性，為抗堿性鹽植物分子育種準備了基因條件。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]圖1為本發(fā)明中吉爾吉斯白樺葉片總RNA的電泳圖；
[0008]圖2為本發(fā)明中PCR擴增得到全長cDNA電泳圖，M為λ DNA/HindIII酶切Marker，I為PCR產(chǎn)物電泳；
[0009]圖3為本發(fā)明中吉爾吉斯白樺的全長核苷酸序列ORF分析結(jié)果圖；
[0010]圖4為本發(fā)明中吉爾吉斯白樺的BkERFl基因編碼氨基酸的同源性比對結(jié)果圖；
[0011]圖5為本發(fā)明中表達載體pBI 121-BkERFl酶切鑒定電泳圖，M為DL2000Marker，I，2和3泳道為質(zhì)粒DNA ；
[0012]圖6為本發(fā)明中無脅迫轉(zhuǎn)基因植株的圖；
[0013]圖7為本發(fā)明中1.5mM NaHCO3脅迫轉(zhuǎn)基因植株的圖；
[0014]圖8為本發(fā)明中3mM NaHCO3脅迫轉(zhuǎn)基因植株的圖。
【具體實施方式】
[0015]本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的任意組合。
[0016]【具體實施方式】一:本實施方式吉爾吉斯白樺的BkERFl基因的核苷酸序列如SEQID No:1 所示。
[0017]【具體實施方式】二:本實施方式吉爾吉斯白樺的BkERFl基因編碼蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0018]吉爾吉斯白樺的BkERFl基因的編碼區(qū)在117bp_1103bp。
[0019]吉爾吉斯白樺的BkERFl基因的核苷酸序列的獲得:
[0020]1、向2.0mL的離心管中加入900 μ L無水乙醇、100 μ L β -巰基乙醇混勻放在冰上預冷，取吉爾吉斯白樺的葉片0.5g，迅速加液氮冷凍研磨成細粉狀，分裝加入離心管中，震蕩2min，4°C，13000r/min離心5min，吸出上清；向離心管中加入CTAB提取緩沖液600 μ L，ΙΟΟμ?β-巰基乙醇，65°C水浴中預熱5min ;加入350 μ L苯酚，350 μ L氯仿，震蕩5min，4°C，13000r/min,離心IOmin,取上清，向其中加入700 μ L的氯仿，震蕩5min, 4°C，13000r/min,離心5min ;取上清,加入等體積的5mol/L LiCL, 1/2體積的無水乙醇,混勻，冰上沉淀IOmin, 40C，13000r/min,離心IOmin ;去上清；用冰浴的體積分數(shù)為75%的乙醇400 μ L洗滌沉淀；離心5min，去上清，空氣中干燥沉淀；加50 μ L的DEPC水溶解RNA ；1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整性，見圖1，紫外分光光度法進行純度檢測，A26tZA28tl比值在1.8-2.0之間，檢測質(zhì)量合格，送交華大基因進行轉(zhuǎn)錄組測序。測序分析獲得白樺ERF序列信息。經(jīng)過比對拼接，即得到完整的吉爾吉斯白樺BkERFl基因序列。 [0021]2、用上述CTAB法提取白樺葉片RNA，取I μ g總RNA進行反轉(zhuǎn)錄，按照東洋紡生化部反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成總cDNA，作為模板，根據(jù)完整的吉爾吉斯白樺BkERFl基因序列設計全長 PCR 擴增引物，F(xiàn)l:5’ -GCAGTCTGTCAACGTTCACACCAAAG-3’，Rl:5’ -CCGCCATCGCCTCAACAAACTATAT-3’，進行 PCR 擴增，反應體系 50 μ L,成分如下:
[0022]
【權(quán)利要求】
1.吉爾吉斯白樺的BkERFl基因，其特征在于吉爾吉斯白樺的BkERFl基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
2.吉爾吉斯白樺的BkERFl基因的編碼蛋白，其特征在于吉爾吉斯白樺的BkERFl基因編碼蛋白的氨基酸序列如SEQ ID N0:2所示。
【文檔編號】C07K14/415GK103695437SQ201310674412
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】楊成君, 李桂英 申請人:東北林業(yè)大學